氬氦刀凍融兔肝后局部結(jié)締組織變化的實驗研究(一)

1、氬氦刀凍融兔肝后局部結(jié)締組織變化的實驗研究(一)【摘要】 探討氬氦刀凍融兔肝后局部結(jié)締組織的變化過程，為臨床上氬氦刀治療肝臟腫瘤提供實驗依據(jù)。將氬氦刀置于兔肝表面進(jìn)行2個凍融循環(huán)，在不同時間點取局部肝組織，經(jīng)HE和膠原染色后在光鏡下觀察。凍融后1、2 d，凍融區(qū)與未凍融區(qū)之間無結(jié)締組織產(chǎn)生。凍融后第4 d，在近肝門的交界線的凍融區(qū)側(cè)有纖細(xì)的結(jié)締組織增生。第8 d近肝門側(cè)的交界處的結(jié)締組織增生帶增寬，其余交界處亦形成較薄的結(jié)締組織帶。第16 d近肝門側(cè)及周圍的組織帶進(jìn)一步增寬。第30 d，周圍的結(jié)締組織帶與表面的結(jié)締組織帶貼近或合并，形成一個盤狀疤痕覆蓋在新生的肝組織表面。說明氬氦刀凍融后凍融區(qū)

2、內(nèi)的結(jié)締組織經(jīng)歷一個急速變性，緩慢變質(zhì)并被逐漸吸收的過程。而凍融區(qū)周圍則產(chǎn)生結(jié)締組織并逐漸增厚形成結(jié)締組織帶，逐漸地底層的結(jié)締組織帶與表面的結(jié)締組織帶靠近進(jìn)而相貼，形成一個圓盤狀的疤痕貼在新生的肝組織表面。 【關(guān)鍵詞】 氬氦刀;兔;動物實驗;組織形態(tài)學(xué);結(jié)締組織Abstract：To explore the histomorphologic changes of the interstitial connective tissue(ICT) of rabbit liver frozen by Cryocare and provide an experimental basis for clin

3、ical treatment of hepatic tumor cryosurgery.The hepatic tissues frozen and thawed for two circulation were taken down respectively at different time points and observed on light microscope. Results showed that the ICT in frozen area was lightly degenerative and there was no connective tissue at the

4、boundary line at the first and second d after freezing . The ICT in frozen area was degenerative and decreased gradually from the fourth to the sixteenth d and disappeared at the thirtieth d.A proliferative layer of fiberblast and some fine collegen bunches was appeared at the boundary line at the f

5、ourth d, and the band became wider gradually form at the eighth to sixteenth d, and finaly the bottom band merged with the surface layer and formed a plate-like scar tissue covering the surface of the local liver.The ICT in frozen area undergoes a chronic process from degenerative to gradual dissolu

6、tion and that around the frozen area experiences however a course from appearance, increase to cicatricial tissue.Key words：CryocareTM; Rabbit; Animal experiment; Hepatic tissue ; Connective tissue; Histomorphology1 引 言氬氦靶向治療技術(shù)已成為臨床治療實體腫瘤的重要手段，臨床應(yīng)用證明該技術(shù)對許多腫瘤都有效1。治療后會出現(xiàn)有別于一般炎癥的反應(yīng)和修復(fù)過程，且在不同組織器官其病理變化和修

7、復(fù)過程亦不同。研究氬氦刀靶向治療后不同時間冷凍灶及其周圍組織的病理變化特點將有助于該技術(shù)的合理應(yīng)用。本研究觀察了氬氦刀凍融兔肝后不同時間凍融區(qū)內(nèi)及其周圍結(jié)締組織的變化，旨在探討凍融后肝組織的修復(fù)過程，為臨床上氬氦刀治療肝臟腫瘤提供實驗依據(jù)。2 材料與方法2.1 氬氦刀美國恩多凱爾(endocare)公司產(chǎn)品，四刀系統(tǒng)。2.2 動物大耳白兔50只，雌雄不限，體重2.53 kg，實驗分正常對照組，凍融5、10 min組。實施凍融后，分別在1、2、4、8、16、30 d處死動物。2.3 氬氦刀實施過程經(jīng)耳靜脈注射氯胺酮5 ml麻醉動物，剪去胸腹部毛，活性碘局部皮膚消毒，于劍突下至臍部切開腹部，暴露肝

8、臟，以直徑2 mm的氬氦刀垂直于肝表面，輕壓約23 mm深，不刺破肝臟，先行氬氣冷凍5、10 min，后行氦氣熱融3 min，重復(fù)一次。縫合切口、消毒包扎后正常飼養(yǎng)動物。 2.4 組織處理與觀察在近肝門側(cè)取含冷凍區(qū)和正常區(qū)的肝組織一塊3 mm厚，以10%甲醛固定，石蠟包埋，組織切片，分別進(jìn)行蘇木素-伊紅(H-E)染色及膠原染色(VG)，在光鏡下觀察凍融區(qū)內(nèi)及其周圍的結(jié)締組織變化。3 結(jié)果3.1 冷凍區(qū)內(nèi)結(jié)締組織的變化冷凍后第1、2 d，冷凍區(qū)內(nèi)中央?yún)^(qū)肝竇內(nèi)皮、中央靜脈內(nèi)皮消失，其周圍的膠原收縮、移位呈斷續(xù)的不規(guī)則的點狀，著色性較正常區(qū)的弱。匯管區(qū)的血管內(nèi)皮、小膽管上皮脫落溶解消失，其周圍的膠原

9、部分萎縮，局部斷裂，走向紊亂。大的血管內(nèi)皮脫落，大的膽管上皮部分脫落及溶解消失，其周圍的膠原萎縮。在中央?yún)^(qū)外周的核碎片區(qū)及出血區(qū)內(nèi)2，中央靜脈內(nèi)皮脫落，匯管區(qū)內(nèi)血管的內(nèi)皮脫落，小膽管上皮部分脫落。大的匯管區(qū)中的血管內(nèi)皮和膽管上皮未脫落，該區(qū)域中的膠原未見明顯改變。在交界線上可見未冷凍的匯管區(qū)呈半島狀凸入冷凍區(qū)，其中的血管內(nèi)皮、膽管上皮存在，其周圍的膠原未見明顯改變。凍融后第4、8 d，中央靜脈周膠原明顯萎縮，走向紊亂并明顯減少;匯管區(qū)的血管內(nèi)皮消失，膽管上皮呈殘余狀堆積于腔中，其周圍的膠原萎縮、斷裂。較大匯管區(qū)的血管內(nèi)皮脫落并已溶解消失，膽管上皮脫落堆積于損傷的腔內(nèi)，其周圍的膠原明顯斷裂，散亂

10、，有明顯的溶解水化區(qū)(見圖1)。第16 d，中央靜脈周膠原接近消失。匯管區(qū)內(nèi)血管、膽管的形態(tài)結(jié)構(gòu)消失。僅存在明顯萎縮、紊亂、大部分已溶解消失的膠原殘余。較大匯管區(qū)的血管壁、膽管壁處的膠原萎縮、斷裂，大部分已消失。第30 d，凍融區(qū)內(nèi)的結(jié)締組織膠原完全消失，僅剩下含多泡狀巨噬細(xì)胞島的液化區(qū)。3.2 凍融區(qū)與未凍融區(qū)之間結(jié)締組織的變化凍融后第1、2 d，凍融后與未凍融區(qū)之間無結(jié)締組織產(chǎn)生。凍融后第4 d，在近肝門側(cè)交界線的凍融區(qū)側(cè)有約0.010.05 mm寬的由數(shù)條至數(shù)十條纖細(xì)膠原束及少量成纖維細(xì)胞組成的結(jié)締組織帶。第8 d時，近肝門側(cè)凍融區(qū)與未凍融區(qū)之間的交界帶寬約0.5 mm(見圖2)，在遠(yuǎn)離

11、肝門的凍融區(qū)的周圍的結(jié)締組織帶寬為0.1 mm，此期結(jié)締組織帶已完全包圍凍融區(qū)。第16 d，近肝門側(cè)的交界帶寬達(dá)24 mm，周圍的結(jié)締組織帶寬達(dá)0.20.5 mm。在第8、16 d組中，在近肝門側(cè)的交界帶的外側(cè)與正常肝組織相鄰面較整齊，細(xì)胞成分少，膠原成分多(見圖2);而交界帶的內(nèi)側(cè)多不整齊，膠原成分少，膠原密度小，細(xì)胞成分多，多見成纖維細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮及膠原向凍融區(qū)浸潤，穿行于死亡的肝細(xì)胞殘體之間(見圖3)。在遠(yuǎn)離肝門側(cè)的凍融區(qū)的周圍，結(jié)締組織帶平行貼于壞死的肝組織表面，未見帶內(nèi)側(cè)向壞死區(qū)生長的構(gòu)象。第30 d時凍融區(qū)的肝組織已消失，其底層的結(jié)締組織帶與表面的帶接近相貼，形成一個圓盤狀疤痕

12、覆蓋于新生的肝組織表面(見圖4)。4 討論4.1 氬氦刀凍融后凍融區(qū)內(nèi)結(jié)締組織的變化從觀察結(jié)果看，氬氦刀凍融后凍融區(qū)內(nèi)原有的結(jié)締組織包括肝竇周、中央靜脈周、各級匯管區(qū)中的結(jié)締組織不再增生，而是經(jīng)歷一個逐漸變性，緩慢被溶解吸收的過程。其中，肝竇周、中央靜脈周的結(jié)締組織先消失，匯管區(qū)及較大匯管區(qū)的結(jié)締組織在16 d之后逐漸消失。30 d時凍融區(qū)內(nèi)原有的結(jié)締組織全部消失。本研究證明：同肝實質(zhì)一樣，凍融區(qū)內(nèi)的結(jié)締組織經(jīng)歷一個逐漸變性、壞死并被溶解吸收的過程3，但與肝實質(zhì)相比，在缺血缺氧的條件下結(jié)締組織有更強(qiáng)的耐受性。4.2 凍融區(qū)周圍結(jié)締組織的變化本研究證明：在近肝門側(cè)的凍融區(qū)與未凍融區(qū)之間的交界線的

13、凍融區(qū)側(cè)最先有成纖維細(xì)胞增生，有膠原產(chǎn)生，并且該處結(jié)締組織增生的速度亦最快，交界帶最寬，膠原密度最大。而在遠(yuǎn)離肝門的交界線處膠原產(chǎn)生較遲，增生速度亦慢，結(jié)締組織層較薄，膠原密度亦輕、稀疏。這進(jìn)一步證明交界線上的結(jié)締組織增生的時間、增生速度、程度都與局部血液供應(yīng)有關(guān)4。在近肝門側(cè)，凍融后仍有充足的血液供應(yīng)，有足夠的代謝底物，所以該處修復(fù)反應(yīng)出現(xiàn)的最早、速度亦最快，是結(jié)締組織增生反應(yīng)最活躍的區(qū)域。而在遠(yuǎn)離肝門的交界線上凍融后很可能破壞了局部的血液供應(yīng)5，阻斷了營養(yǎng)物質(zhì)的運送，要待局部血液供應(yīng)恢復(fù)后，才能發(fā)生修復(fù)性反應(yīng)，因而這些部位結(jié)締組織出現(xiàn)的晚、速度亦慢，是增生反應(yīng)相對不活躍的部位。我們觀察結(jié)締

14、組織最先發(fā)生于近肝門側(cè)交界線的凍融區(qū)側(cè)，隨著時間延長，成纖維細(xì)胞及其分泌的膠原不斷增多，一方面不斷充實已形成的結(jié)締組織帶，另一方面則繼續(xù)長入凍融區(qū)。因此，結(jié)締組織帶的外側(cè)較整齊，而內(nèi)側(cè)面多不整齊，增生的成纖維細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及膠原纖維會伸向凍融區(qū)，占居凍融區(qū)的肝實質(zhì)、間質(zhì)壞死液化形成的空隙，并逐漸取代原來的血管、膽管及膠原。交界線上結(jié)締組織的增生是損傷區(qū)修復(fù)的一個方面，其意義在于包圍凍融后壞死的肝組織，使清除壞死肝組織殘體的過程局限在結(jié)締組織包圍的范圍內(nèi)，限制壞死有害物質(zhì)的擴(kuò)散。然而，交界線上結(jié)締組織增生是有限的。修復(fù)過程的主要方面是隨著凍融區(qū)內(nèi)肝組織殘余的溶解、吸收，原凍融區(qū)逐漸變小，

15、其交界帶外圍肝組織會逐漸增生，趨向恢復(fù)原來的肝葉形狀，這使深部的結(jié)締組織層向表層靠近并相貼，形成一個圓盤狀疤痕覆蓋于新生的肝組織表面。該疤痕的消失可能是一個相當(dāng)緩慢的過程3，甚至在肝臟結(jié)構(gòu)與功能恢復(fù)后相當(dāng)長的時間里存在。【參考文獻(xiàn)】1Zhang Jiren. A new challenge on clinical oncology : argon-helium targeted ablation therapy J . International Journal of morden cancer therapy , 2002, 5(1): 20-23.2李德忠，宋華志，易峰濤，等. 氬氦刀冷凍兔肝后局部組織變化及超微病理研究J. 華南國防醫(yī)學(xué)雜志，2006, 20(3): 4-6.3張積仁. Cryocare 氬氦靶向腫瘤治療技術(shù)J. 生物醫(yī)學(xué)工程研究，2005，24(2)：128-132.4羅保明，劉建平，文艷玲，等. 肝門部冷凍對肝臟血