實(shí)驗(yàn)二魚(yú)類急性毒性實(shí)驗(yàn)

1、魚(yú)類急性毒性實(shí)驗(yàn)魚(yú)類急性毒性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介魚(yú)類是水生食物鏈的頂級(jí)生物，也是水體中最為重要的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物。魚(yú)類是水生食物鏈的頂級(jí)生物，也是水體中最為重要的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物。在污染水體中，當(dāng)污染物達(dá)到一定濃度時(shí)，就會(huì)引起魚(yú)類各種中毒反應(yīng)，在污染水體中，當(dāng)污染物達(dá)到一定濃度時(shí)，就會(huì)引起魚(yú)類各種中毒反應(yīng)，例如行為失常，組織器官病變，生理功能紊亂乃至死亡。在人為控制條件例如行為失常，組織器官病變，生理功能紊亂乃至死亡。在人為控制條件下，進(jìn)行各種魚(yú)類毒性實(shí)驗(yàn)，不僅用于化學(xué)品毒性強(qiáng)度測(cè)定、水體污染程下，進(jìn)行各種魚(yú)類毒性實(shí)驗(yàn)，不僅用于化學(xué)品毒性強(qiáng)度測(cè)定、水體污染程度、廢水及其處度、廢水及其處 理效果檢查，而且也為制

2、定水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)、評(píng)價(jià)環(huán)境質(zhì)量和理效果檢查，而且也為制定水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)、評(píng)價(jià)環(huán)境質(zhì)量和管理廢水排放提供科學(xué)依據(jù)。因此，開(kāi)展魚(yú)類急性毒性實(shí)驗(yàn)的研究，對(duì)實(shí)管理廢水排放提供科學(xué)依據(jù)。因此，開(kāi)展魚(yú)類急性毒性實(shí)驗(yàn)的研究，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果給出正確合理的評(píng)價(jià)，對(duì)于我國(guó)水資源保護(hù)具有重要意義。驗(yàn)結(jié)果給出正確合理的評(píng)價(jià)，對(duì)于我國(guó)水資源保護(hù)具有重要意義。 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 o在規(guī)定條件下，使魚(yú)類接觸含不同濃度受試物的水在規(guī)定條件下，使魚(yú)類接觸含不同濃度受試物的水溶液，以溶液，以96h為一實(shí)驗(yàn)周為一實(shí)驗(yàn)周 期，在期，在24h、48h、72h和和96h時(shí)記錄實(shí)驗(yàn)魚(yú)的死亡率，確定魚(yú)類死亡時(shí)記錄實(shí)驗(yàn)魚(yú)的死亡率，確定魚(yú)類死亡50%時(shí)的受時(shí)的

3、受試物濃度，半數(shù)致死濃度用試物濃度，半數(shù)致死濃度用24h LC50、48h LC50、72h LC50和和96h LC50表示，并記錄無(wú)死亡的最大濃表示，并記錄無(wú)死亡的最大濃度和導(dǎo)致魚(yú)類全部死亡的最小實(shí)驗(yàn)濃度。度和導(dǎo)致魚(yú)類全部死亡的最小實(shí)驗(yàn)濃度。 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料1.實(shí)驗(yàn)常用儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)常用儀器設(shè)備o溫度控制儀；溫度控制儀；o（溶氧儀）（溶氧儀）opH試紙?jiān)嚰坥（分光光度計(jì)）（分光光度計(jì)）o玻璃水槽玻璃水槽o抄網(wǎng)：尼龍制，對(duì)照和實(shí)驗(yàn)容器分用。抄網(wǎng)：尼龍制，對(duì)照和實(shí)驗(yàn)容器分用。 實(shí)驗(yàn)溶液的制備實(shí)驗(yàn)溶液的制備o以重鉻酸鉀為實(shí)驗(yàn)毒物，實(shí)驗(yàn)溶液的母液由蒸餾水配制以重鉻酸鉀為實(shí)驗(yàn)毒物，實(shí)驗(yàn)溶液的母液由蒸

4、餾水配制而成。母液最好每日配各而成。母液最好每日配各1次，比較穩(wěn)定的物質(zhì)也可以次，比較穩(wěn)定的物質(zhì)也可以兩日配制兩日配制1次，配好后，次，配好后， 最好低溫保存。配制好的母最好低溫保存。配制好的母液可以稀釋為進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)的溶液，以等比或等對(duì)數(shù)液可以稀釋為進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)的溶液，以等比或等對(duì)數(shù) 間距設(shè)置濃度系列，相臨濃度比值不得超過(guò)間距設(shè)置濃度系列，相臨濃度比值不得超過(guò)2.2。 實(shí)驗(yàn)用魚(yú)的選擇實(shí)驗(yàn)用魚(yú)的選擇o實(shí)驗(yàn)魚(yú)類一般選擇對(duì)污染物敏感，在生態(tài)類群中具實(shí)驗(yàn)魚(yú)類一般選擇對(duì)污染物敏感，在生態(tài)類群中具有有 代表性，經(jīng)濟(jì)價(jià)值比較高，來(lái)源豐富、取材方代表性，經(jīng)濟(jì)價(jià)值比較高，來(lái)源豐富、取材方便、遺傳穩(wěn)定，生物學(xué)背

5、景資料豐便、遺傳穩(wěn)定，生物學(xué)背景資料豐 富，大小適中，富，大小適中，在室內(nèi)條件下易于飼養(yǎng)和繁殖的種類。在室內(nèi)條件下易于飼養(yǎng)和繁殖的種類。o斑馬魚(yú)是國(guó)際上通用的魚(yú)類急性毒性實(shí)驗(yàn)魚(yú)種。建斑馬魚(yú)是國(guó)際上通用的魚(yú)類急性毒性實(shí)驗(yàn)魚(yú)種。建議的實(shí)驗(yàn)溫度議的實(shí)驗(yàn)溫度21-25， 建議實(shí)驗(yàn)魚(yú)的全長(zhǎng)建議實(shí)驗(yàn)魚(yú)的全長(zhǎng)2.0士士1cm。試驗(yàn)方法與步驟試驗(yàn)方法與步驟 1.實(shí)驗(yàn)條件實(shí)驗(yàn)條件 o(1)實(shí)驗(yàn)用水實(shí)驗(yàn)用水 使用高質(zhì)量的自然水或標(biāo)準(zhǔn)稀釋水使用高質(zhì)量的自然水或標(biāo)準(zhǔn)稀釋水(見(jiàn)本節(jié)附見(jiàn)本節(jié)附錄錄)，也可以使用飲用水，也可以使用飲用水(必要時(shí)應(yīng)除氯。水的總硬度為必要時(shí)應(yīng)除氯。水的總硬度為10-250mg/L (以以CaC

6、O3計(jì)計(jì))， pH為為 6.0-8.5。 o(2)實(shí)驗(yàn)周期實(shí)驗(yàn)周期 96h。 o(3)實(shí)驗(yàn)負(fù)荷實(shí)驗(yàn)負(fù)荷 靜態(tài)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)最大承載量為靜態(tài)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)最大承載量為1.0 g魚(yú)魚(yú)/L。o(4)光照每天光照每天 12-16h.o(5)溫度與實(shí)驗(yàn)魚(yú)種相適宜，變化范圍土溫度與實(shí)驗(yàn)魚(yú)種相適宜，變化范圍土2。 o(6)溶解氧不低于空氣飽和值的溶解氧不低于空氣飽和值的60%。曝氣時(shí)不能使受試。曝氣時(shí)不能使受試物明顯受損。物明顯受損。 2.實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法 o正式實(shí)驗(yàn)前必須對(duì)實(shí)驗(yàn)用魚(yú)進(jìn)行馴養(yǎng)，然后根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)得正式實(shí)驗(yàn)前必須對(duì)實(shí)驗(yàn)用魚(yú)進(jìn)行馴養(yǎng)，然后根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)得出出 的結(jié)果的結(jié)果(以上部分內(nèi)容可另行安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間以上部分內(nèi)容

7、可另行安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間)，在包括，在包括使魚(yú)全部死亡的最低濃度和使魚(yú)全部死亡的最低濃度和96h魚(yú)類全部存活的最高濃度魚(yú)類全部存活的最高濃度之間至少應(yīng)設(shè)置之間至少應(yīng)設(shè)置5個(gè)濃度組。每個(gè)實(shí)驗(yàn)濃度組應(yīng)至少設(shè)個(gè)濃度組。每個(gè)實(shí)驗(yàn)濃度組應(yīng)至少設(shè)3個(gè)平行系列，每一系列設(shè)一個(gè)空白對(duì)照。如使用了助溶劑，個(gè)平行系列，每一系列設(shè)一個(gè)空白對(duì)照。如使用了助溶劑，應(yīng)增設(shè)溶劑驗(yàn)量對(duì)照，其濃度與試液中的最高溶劑濃度相應(yīng)增設(shè)溶劑驗(yàn)量對(duì)照，其濃度與試液中的最高溶劑濃度相同。每一濃度組及對(duì)照組至少使用同。每一濃度組及對(duì)照組至少使用7尾魚(yú)。尾魚(yú)。 o實(shí)驗(yàn)前魚(yú)應(yīng)馴養(yǎng)。用水需曝氣。實(shí)驗(yàn)前魚(yú)應(yīng)馴養(yǎng)。用水需曝氣。o實(shí)驗(yàn)分組：實(shí)驗(yàn)分組：4 4組組

8、o濃度系列：每組分別取濃度系列：每組分別取0 0，3535，7070，140140，280ml280ml母液加母液加入魚(yú)缸水中，充分混勻，則得到實(shí)驗(yàn)濃度入魚(yú)缸水中，充分混勻，則得到實(shí)驗(yàn)濃度0 0，0.250.25，0.50.5，1 1，2g/L2g/L重鉻酸鉀（母液重鉻酸鉀（母液3L 3L ，50g/L50g/L重鉻酸鉀，重鉻酸鉀，每組每組600mL600mL）o高濃度用小魚(yú)缸，高濃度用小魚(yú)缸，7L7L水，水，8 8條魚(yú)（大小均勻）。空白用條魚(yú)（大小均勻）?？瞻子么篝~(yú)缸，大魚(yú)缸，14L14L水，水，1616條魚(yú)條魚(yú)o實(shí)驗(yàn)控制溫度實(shí)驗(yàn)控制溫度1515C C。緩慢曝氣。緩慢曝氣。2.實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方

9、法 o實(shí)驗(yàn)溶液調(diào)節(jié)至相應(yīng)溫度后，從馴養(yǎng)魚(yú)群中隨機(jī)取出魚(yú)實(shí)驗(yàn)溶液調(diào)節(jié)至相應(yīng)溫度后，從馴養(yǎng)魚(yú)群中隨機(jī)取出魚(yú)并隨機(jī)迅速放入各實(shí)驗(yàn)容器中。轉(zhuǎn)移期間處理不當(dāng)?shù)聂~(yú)并隨機(jī)迅速放入各實(shí)驗(yàn)容器中。轉(zhuǎn)移期間處理不當(dāng)?shù)聂~(yú)均應(yīng)棄除。同一實(shí)驗(yàn)，所有實(shí)驗(yàn)用魚(yú)應(yīng)在均應(yīng)棄除。同一實(shí)驗(yàn)，所有實(shí)驗(yàn)用魚(yú)應(yīng)在30min 內(nèi)分內(nèi)分組完畢。實(shí)驗(yàn)期間，不要對(duì)溶液強(qiáng)烈充氣，溶解氧含量組完畢。實(shí)驗(yàn)期間，不要對(duì)溶液強(qiáng)烈充氣，溶解氧含量應(yīng)高于空氣飽和值的應(yīng)高于空氣飽和值的 60%。同時(shí)避免產(chǎn)生對(duì)魚(yú)類行。同時(shí)避免產(chǎn)生對(duì)魚(yú)類行為的干擾。實(shí)驗(yàn)期間不投餌。為的干擾。實(shí)驗(yàn)期間不投餌。o在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后3h或或6h觀察各處理組魚(yú)的狀況，并記錄觀察各處

10、理組魚(yú)的狀況，并記錄實(shí)驗(yàn)魚(yú)的異常行為如魚(yú)體側(cè)翻、失去平衡，游泳能力實(shí)驗(yàn)魚(yú)的異常行為如魚(yú)體側(cè)翻、失去平衡，游泳能力和呼吸功能減弱，色素沉積等。和呼吸功能減弱，色素沉積等。o至少在至少在24h、48h、72h和和96h后檢查受試魚(yú)的狀況，后檢查受試魚(yú)的狀況，并做記錄。如果受試魚(yú)沒(méi)有任何肉眼可見(jiàn)的運(yùn)動(dòng)，如鰓并做記錄。如果受試魚(yú)沒(méi)有任何肉眼可見(jiàn)的運(yùn)動(dòng)，如鰓的扇動(dòng)、碰觸尾柄后無(wú)反應(yīng)，即可判斷該魚(yú)已死亡。觀的扇動(dòng)、碰觸尾柄后無(wú)反應(yīng)，即可判斷該魚(yú)已死亡。觀察并記錄死魚(yú)數(shù)目后，將死魚(yú)從容器中取出。察并記錄死魚(yú)數(shù)目后，將死魚(yú)從容器中取出。o每天至少測(cè)定一次每天至少測(cè)定一次pH、溶解氧和溫度。實(shí)驗(yàn)開(kāi)、溶解氧和溫度

11、。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)亦要測(cè)定。至少在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束始和結(jié)束時(shí)亦要測(cè)定。至少在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)，測(cè)定實(shí)驗(yàn)容器中實(shí)驗(yàn)液的受試物濃度。時(shí)，測(cè)定實(shí)驗(yàn)容器中實(shí)驗(yàn)液的受試物濃度。o pH：試紙：試紙o（溶解氧：溶氧儀）（溶解氧：溶氧儀）o溫度：溫度計(jì)溫度：溫度計(jì)o（六價(jià)鉻：二苯碳酰二肼分光光度法）（六價(jià)鉻：二苯碳酰二肼分光光度法）3.數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理o(1)在對(duì)數(shù)在對(duì)數(shù)-概率坐標(biāo)紙上，繪制處理濃度對(duì)死亡率的曲概率坐標(biāo)紙上，繪制處理濃度對(duì)死亡率的曲線。用直線內(nèi)插法或常用統(tǒng)計(jì)程序計(jì)算出線。用直線內(nèi)插法或常用統(tǒng)計(jì)程序計(jì)算出24h、48h、72h、96h的的LC50值，并用標(biāo)準(zhǔn)方法計(jì)算值，并用標(biāo)準(zhǔn)方法計(jì)算95%的的

12、 置信置信限。限。 o(2)如果實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不適于用標(biāo)淮方法計(jì)算如果實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不適于用標(biāo)淮方法計(jì)算LC50，可用不，可用不引起死亡的最高濃度和引起引起死亡的最高濃度和引起100%死亡的最低死亡濃度死亡的最低死亡濃度估算估算LC50的近似值，即這兩個(gè)濃度的幾何平均值。的近似值，即這兩個(gè)濃度的幾何平均值。結(jié)果與評(píng)價(jià)結(jié)果與評(píng)價(jià)o目前，根據(jù)魚(yú)類急性毒性實(shí)驗(yàn)的目前，根據(jù)魚(yú)類急性毒性實(shí)驗(yàn)的LCso值，評(píng)判毒物的危值，評(píng)判毒物的危害等級(jí)，在國(guó)內(nèi)還沒(méi)有統(tǒng)一的規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)。害等級(jí)，在國(guó)內(nèi)還沒(méi)有統(tǒng)一的規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)。1990年國(guó)家環(huán)年國(guó)家環(huán)保局的保局的環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范中給出了污中給出了污 染物對(duì)魚(yú)類急性毒染物

13、對(duì)魚(yú)類急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，見(jiàn)表性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，見(jiàn)表5-4。1994年，針對(duì)新化學(xué)品管理，國(guó)年，針對(duì)新化學(xué)品管理，國(guó)家環(huán)保局又制定了家環(huán)保局又制定了新化學(xué)物質(zhì)危害評(píng)估準(zhǔn)則新化學(xué)物質(zhì)危害評(píng)估準(zhǔn)則，其中給出，其中給出了新化學(xué)品對(duì)魚(yú)類急性毒性的危害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，參見(jiàn)表了新化學(xué)品對(duì)魚(yú)類急性毒性的危害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，參見(jiàn)表5-5。根據(jù)下列標(biāo)準(zhǔn)，可以初步評(píng)判化學(xué)品或污染物根據(jù)下列標(biāo)準(zhǔn)，可以初步評(píng)判化學(xué)品或污染物 的環(huán)境危害性。的環(huán)境危害性。附錄標(biāo)準(zhǔn)稀釋水的配制方法附錄標(biāo)準(zhǔn)稀釋水的配制方法 用于配制標(biāo)準(zhǔn)稀釋水的試劑應(yīng)為分析純，去離子水或蒸餾用于配制標(biāo)準(zhǔn)稀釋水的試劑應(yīng)為分析純，去離子水或蒸餾水的電導(dǎo)率應(yīng)水的電導(dǎo)率應(yīng)10S/cm

14、10S/cm。具體配制方法如下。具體配制方法如下: : o制備標(biāo)準(zhǔn)稀釋水前先按照下列要求配制制備標(biāo)準(zhǔn)稀釋水前先按照下列要求配制4 4種溶液種溶液 氯化鈣溶液氯化鈣溶液 將將11.76g CaC12 2H2O11.76g CaC12 2H2O溶解于水中，稀釋至溶解于水中，稀釋至1L1L。 硫酸鎂溶液硫酸鎂溶液 將將4.93g MgSO4 7H2O4.93g MgSO4 7H2O溶解于水中，稀釋至溶解于水中，稀釋至1L1L。 碳酸氫鈉溶液碳酸氫鈉溶液 將將2. 59g NaHCO32. 59g NaHCO3溶解于水中，稀釋至溶解于水中，稀釋至1L1L。 氯化鉀溶液氯化鉀溶液 將將0.23g KCl0.23g KCl溶解于水中，稀釋至溶解于水中，稀釋至1L1L。 o將這將這4 4種溶液各種溶液各25mL25mL加