《實驗性缺氧》實驗手冊

1、實驗性缺氧（一）實驗?zāi)康模?.復(fù)制低張性、血液性和組織中毒性缺氧動物模型，了解缺氧的原因及發(fā)病機制。2.觀察不同類型缺氧的實驗動物，注意其呼吸、皮膚黏膜、血液及肝顏色等變化。（二）實驗原理：1.由于組織細胞供氧不足或用氧障礙導(dǎo)致機體代謝、功能甚至形態(tài)結(jié)構(gòu)等發(fā)生異常變化的病理過程，稱為缺氧。2.根據(jù)原因和發(fā)病機制，缺氧可分為4類。低張性缺氧：其特點是動脈血氧分壓明顯下降，主要是由于動脈血的氧氣供給不足引起；血液性缺氧：多見于血紅蛋白量的減少或者質(zhì)的改變，從而引起運氧能力下降并伴有動脈血氧含量的降低；循環(huán)性缺氧：由于血液循環(huán)障礙，含氧豐富的動脈血不能順利、及時送達組織細胞；組織性缺氧：組織細胞利用

2、氧的能力下降引起的缺氧。3.不同類型的缺氧，機體的血氧指標、循環(huán)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)及皮膚與黏膜的顏色等均有不同的表現(xiàn)，而不同的內(nèi)外因素也可以影響機體對缺氧的耐受性。（三）實驗方法：（1）實驗準備：取小白鼠5只，準備實驗裝置與器材。（2）實驗?zāi)Ｐ停?.乏氧性缺氧：取鈉石灰少許及小白鼠1只放入缺氧瓶內(nèi)。觀察、記錄小白鼠的呼吸頻率、深度，口唇的顏色，同時用測氧儀測定瓶中的氧濃度（海平面空氣氧濃度約21%）塞緊瓶塞，記錄時間，每隔5min重復(fù)觀察上述指標一次直到動物死亡，記錄死亡時間，并測定死亡時瓶中的氧濃度。尸檢。小白鼠死亡后盡快打開腹腔，觀察血液和肝顏色。2.一氧化碳中毒性缺氧：將小白鼠1只放入廣口瓶

3、中，觀察其正常表現(xiàn)。取甲酸9ml放入燒瓶內(nèi)，緩慢加入濃硫酸6ml，塞緊后與裝有小白鼠的廣口瓶相連。尸檢。方式同1。3.亞硝酸鈉中毒性缺氧：取體重相近的小白鼠2只，觀察正常表現(xiàn)后，向腹腔注射5%亞硝酸鈉0.3ml。其中一只注入亞硝酸鈉后，立即再向腹腔注入0.5%亞甲藍0.150.30ml，另一只注入等量生理鹽水。觀察指標同實驗2，比較兩只小白鼠表現(xiàn)及死亡時間有無差異。（四）實驗結(jié)果：1.不同時間瓶中的氧濃度記錄 10min 死亡時（45min）瓶中的氧濃度（%） 20.6% 19.7%2.實驗2和實驗3小鼠死亡時間對比 CO中毒性缺氧 亞硝酸鈉中毒性缺氧時間（min）10min 4min3.實驗

4、1、實驗2、實驗3四只小白鼠及對照組小白鼠腹腔解剖后的內(nèi)部觀察：（五）實驗討論：1.乏氧性缺氧：實驗1缺氧而死的小鼠初始較活躍，行動正常。5min后觀察其活躍度稍有下降，面色觀察無變化。15min后活躍度明顯下降，行為安靜，停留原地，觀其外表稍有發(fā)紫。25min后小鼠完全安靜，陷入無自覺狀態(tài)，眼睛微合，面容發(fā)紺。35min后小鼠肌肉抽搐，出現(xiàn)幻覺。45min后小鼠呼吸消失，四肢逐漸僵硬，完全死亡。由于吸入氣體氧分壓降低而使肺泡氧分壓降低，導(dǎo)致血液從肺攝取的氧減少而引起的供氧不足，稱為乏氧性缺氧。乏氧性缺氧時，動脈血的氧分壓、氧含量和氧飽和度均降低，皮膚、粘膜呈現(xiàn)青紫色，稱為發(fā)紺。血紅蛋白中的二

5、價鐵（Fe2+）可在亞硝酸鹽等氧化劑作用下被氧化而形成高鐵血紅蛋白。二價鐵變成三價鐵因與羥基牢固結(jié)合而失去攜氧能力，加上血紅蛋白分子的四個二價鐵中有一部分氧化為三價鐵后還能使剩余的Fe2與氧的親和力增高，即通過變構(gòu)效應(yīng)使氧離曲線左移， 血紅蛋白結(jié)合和釋放的氧量都減少，導(dǎo)致組織缺氧。高鐵血紅蛋白呈棕褐色，故亞硝酸鹽中毒時皮膚、粘膜呈現(xiàn)類似發(fā)紺的青紫色，稱為腸源性發(fā)紺。2.一氧化碳中毒性缺氧： 實驗2一氧化碳小鼠死亡較快。小鼠剛放入瓶內(nèi)時較安靜，量筒內(nèi)有氣泡冒出時表明已有CO通入瓶內(nèi)，此時計時。1min30s后，開始劇烈跳躍掙扎，3min30s后，趴在瓶底四肢抽搐，仍在呼吸，4min時死亡。尸體全

6、身發(fā)紅，解剖后肝臟，黏膜等呈櫻桃紅色。 一氧化碳與血紅蛋白的親和力遠遠大于氧與血紅蛋白的親和力，因此當大量血紅蛋白與CO結(jié)合形成碳氧血紅蛋白時，血紅蛋白便失去了攜帶氧的能力。另一方面CO和血紅蛋白的結(jié)合可使氧離曲線左移，導(dǎo)致HbO2釋放氧減少，加重組織缺氧。因為碳氧血紅蛋白為鮮紅色，所以CO中毒時皮膚，粘膜呈現(xiàn)櫻桃紅色。3.亞硝酸鈉中毒性缺氧： 實驗3中分別給兩只小鼠注射亞硝酸鈉溶液及生理鹽水與解藥亞甲藍，注射亞硝酸鈉的小鼠開始無明顯中毒跡象，行為活躍，5min后活動逐漸減少，呼吸開始微弱，8min鐘后靜止于籠中，四肢及面部變青，10min后完全死亡。注射解藥的小鼠無中毒跡象，活動自如且正常。尸檢后，亞硝酸鈉中毒小鼠全身皮膚黏膜青紫，肝臟呈深咖啡色。注射亞甲藍的小鼠腹部青藍色，內(nèi)部器官均被染藍，肝臟呈咖啡色。血紅蛋白所含的鐵是亞鐵，它能跟氧結(jié)合隨著血液循環(huán)，將氧輸送到身體各部。當亞硝酸鈉進入機體后，在血液中發(fā)生了化學(xué)反應(yīng)，使血紅蛋白中的二價鐵