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1、會計(jì)學(xué)1蘇教生物選修三動物細(xì)胞工程的應(yīng)用蘇教生物選修三動物細(xì)胞工程的應(yīng)用克隆羊克隆羊“ 多利多利 ”第2頁/共34頁新華網(wǎng)2010.12.3.消息克隆羊多利重生克隆羊多利重生 這這4只克隆羊在遺傳上與多莉毫無差異。只克隆羊在遺傳上與多莉毫無差異。多莉誕生于多莉誕生于14年前,是第一個(gè)使用成熟細(xì)胞年前,是第一個(gè)使用成熟細(xì)胞克隆的哺乳動物??寺〉牟溉閯游?。克隆羊多莉克隆羊多莉(Dolly)已經(jīng)獲得已經(jīng)獲得“重生重生”。最初進(jìn)行此項(xiàng)克隆研究的英國科學(xué)家又培育最初進(jìn)行此項(xiàng)克隆研究的英國科學(xué)家又培育出出4只克隆羊,被形象地稱之為只克隆羊,被形象地稱之為“Dollies”(多莉的復(fù)數(shù)多莉的復(fù)數(shù))。它們是多
2、莉的復(fù)。它們是多莉的復(fù)制品,在遺傳上與多莉絲毫不差,多莉在制品,在遺傳上與多莉絲毫不差,多莉在7年前離開這個(gè)世界。年前離開這個(gè)世界。第3頁/共34頁第4頁/共34頁 問題問題 :2 2、許多動物細(xì)胞能夠分泌蛋白質(zhì),如抗體、許多動物細(xì)胞能夠分泌蛋白質(zhì),如抗體等。但是單個(gè)細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)的量是很等。但是單個(gè)細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)的量是很少的,怎樣才能獲得大量的分泌蛋白呢?少的,怎樣才能獲得大量的分泌蛋白呢?必須借助于大規(guī)模的必須借助于大規(guī)模的動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)1 1、在治療燒傷病人時(shí),通常采用的方法、在治療燒傷病人時(shí),通常采用的方法是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體移植。是取燒傷病人的健康皮膚進(jìn)行自體
3、移植。但對一個(gè)大面積燒傷的病人來說,自體健但對一個(gè)大面積燒傷的病人來說,自體健康皮膚非常有限,使用他人的皮膚來源不康皮膚非常有限,使用他人的皮膚來源不足,而且會產(chǎn)生排異反應(yīng)。那么。怎樣才足,而且會產(chǎn)生排異反應(yīng)。那么。怎樣才能獲得大量的自體健康皮膚呢?能獲得大量的自體健康皮膚呢?第5頁/共34頁1 1、動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)的概念?、動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)的概念?2 2、組織分散成單個(gè)細(xì)胞的方法是什么?、組織分散成單個(gè)細(xì)胞的方法是什么?3 3、如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)?、如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)?4 4、動物組織與細(xì)胞培養(yǎng)的條件?、動物組織與細(xì)胞培養(yǎng)的條件?閱讀課本閱讀課本P P6161-P-P62
4、62回答以下問題回答以下問題第6頁/共34頁一、動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)一、動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)在體外模擬動物體在體外模擬動物體內(nèi)環(huán)境內(nèi)環(huán)境,將動物體細(xì)胞,將動物體細(xì)胞或組織,在或組織,在無菌、溫度適宜和營養(yǎng)充足無菌、溫度適宜和營養(yǎng)充足條條件下培養(yǎng),使其繼續(xù)件下培養(yǎng),使其繼續(xù)生長、生長、增殖增殖并維持原并維持原有結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。有結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。1 1、概念、概念第7頁/共34頁2 2、條件、條件(1 1)無菌、無毒的環(huán)境:)無菌、無毒的環(huán)境: 添加一定量的抗生素;定期更換培養(yǎng)液,以便添加一定量的抗生素;定期更換培養(yǎng)液,以便清除代謝產(chǎn)物。清除代謝產(chǎn)物。(2 2)營養(yǎng)物質(zhì))營養(yǎng)物質(zhì)( (區(qū)分天然培養(yǎng)
5、基與合成培養(yǎng)基區(qū)分天然培養(yǎng)基與合成培養(yǎng)基) )無機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、促生長因子、維生無機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、促生長因子、維生素、動物血清等素、動物血清等(3 3)溫度和)溫度和pHpH: 37, 7.2-7.4 37, 7.2-7.4(4 4)氣體環(huán)境:)氣體環(huán)境: O O2 2和和COCO2 2(95%95%空氣和空氣和5% CO5% CO2 2 )第8頁/共34頁3 3、過程(圖、過程(圖2-132-13)(1 1)動物細(xì)胞培養(yǎng))動物細(xì)胞培養(yǎng)取動物組織塊取動物組織塊胰蛋白酶等處理胰蛋白酶等處理細(xì)胞懸液細(xì)胞懸液分散成單個(gè)細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)皿中培養(yǎng)培養(yǎng)皿中培養(yǎng)(原代培養(yǎng))(原代培養(yǎng))形成
6、一層細(xì)胞形成一層細(xì)胞移到新培養(yǎng)液中培養(yǎng)移到新培養(yǎng)液中培養(yǎng)(傳代培養(yǎng))(傳代培養(yǎng))(2 2)動物組織培養(yǎng))動物組織培養(yǎng)剪取動物組織塊剪取動物組織塊生理鹽水沖洗生理鹽水沖洗、自然沉降自然沉降移入培養(yǎng)瓶移入培養(yǎng)瓶(貼壁培養(yǎng))(貼壁培養(yǎng))第9頁/共34頁4 4、相關(guān)概念、相關(guān)概念原代培養(yǎng)原代培養(yǎng):是指從供體獲取是指從供體獲取組織或細(xì)胞組織或細(xì)胞后的初次培養(yǎng)。后的初次培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng):將原代培養(yǎng)的細(xì)胞分離稀釋后轉(zhuǎn)入新的培將原代培養(yǎng)的細(xì)胞分離稀釋后轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶中養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)繼續(xù)培養(yǎng),稱為傳代培養(yǎng)。,稱為傳代培養(yǎng)。第10頁/共34頁細(xì)胞株:細(xì)胞株:原代細(xì)胞一般傳至原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)代左右
7、細(xì)胞生長停滯,大部分細(xì)胞衰老死亡,少數(shù)細(xì)胞胞生長停滯,大部分細(xì)胞衰老死亡,少數(shù)細(xì)胞存活到存活到4050代,這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。代,這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。 細(xì)胞系:細(xì)胞系:細(xì)胞株傳代至細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài),只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的生長停滯狀態(tài),只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變,使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代,這改變,使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代,這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。 細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別:細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別: 細(xì)胞系的遺傳細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變,具有癌細(xì)胞的特點(diǎn),失去接觸抑制物質(zhì)改變,具有癌細(xì)胞的特點(diǎn),失去接觸抑制,容易傳代培養(yǎng)。,容
8、易傳代培養(yǎng)。第11頁/共34頁第12頁/共34頁細(xì)胞的接觸抑制細(xì)胞的接觸抑制: 當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí),細(xì)胞就會停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱時(shí),細(xì)胞就會停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。為細(xì)胞的接觸抑制。第13頁/共34頁如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等5 5、應(yīng)用、應(yīng)用培養(yǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植培養(yǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植第14頁/共34頁1 1、為什么要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞?、為什么要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞?2 2、為什么選用胰蛋白酶做上述處理?、為什么選用胰蛋白酶做上述處理?3 3、動物細(xì)胞培
9、養(yǎng)能否象植物組培那樣最終培養(yǎng)、動物細(xì)胞培養(yǎng)能否象植物組培那樣最終培養(yǎng)成生物個(gè)體?成生物個(gè)體?使每個(gè)細(xì)胞能與培養(yǎng)液接觸使每個(gè)細(xì)胞能與培養(yǎng)液接觸因?yàn)閯游锛?xì)胞間隙中有彈性纖維等蛋白因?yàn)閯游锛?xì)胞間隙中有彈性纖維等蛋白質(zhì)和一些其它物質(zhì)。質(zhì)和一些其它物質(zhì)。不能,不能, 因?yàn)閯游锛?xì)胞的全能性受到抑制。因?yàn)閯游锛?xì)胞的全能性受到抑制。第15頁/共34頁思考與探究思考與探究:如何用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),為燒傷病人如何用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),為燒傷病人植皮?植皮?取該患者的皮膚進(jìn)取該患者的皮膚進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)行細(xì)胞培養(yǎng), ,獲得足獲得足量的細(xì)胞后再移植量的細(xì)胞后再移植第16頁/共34頁動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用這只老鼠身
10、上的這只老鼠身上的“人耳人耳”是是由由我國我國科學(xué)家科學(xué)家曹誼林曹誼林教授利教授利用細(xì)胞工程技術(shù)復(fù)制出來的。用細(xì)胞工程技術(shù)復(fù)制出來的。器官克隆器官克隆一例一例第17頁/共34頁二、動物細(xì)胞核移植技術(shù)與體細(xì)胞克隆二、動物細(xì)胞核移植技術(shù)與體細(xì)胞克隆克隆克隆遺傳上完全相同的分子、細(xì)胞或來自同一遺傳上完全相同的分子、細(xì)胞或來自同一祖先的生物個(gè)體的無性繁殖群體。祖先的生物個(gè)體的無性繁殖群體。用體細(xì)胞核移植技術(shù)進(jìn)行的克隆稱為用體細(xì)胞核移植技術(shù)進(jìn)行的克隆稱為體細(xì)體細(xì)胞克隆胞克隆原原理:理:動物體細(xì)胞核的全能性動物體細(xì)胞核的全能性第18頁/共34頁克隆羊克隆羊“多利多利”的產(chǎn)生過程的產(chǎn)生過程: :第19頁/共
11、34頁在治療人類疾病時(shí),轉(zhuǎn)基因克隆動物細(xì)在治療人類疾病時(shí),轉(zhuǎn)基因克隆動物細(xì)胞、組織和器官可以作為異體移植的供體。胞、組織和器官可以作為異體移植的供體。(1 1)醫(yī)藥衛(wèi)生:)醫(yī)藥衛(wèi)生:轉(zhuǎn)基因克隆動物可以作為生物反應(yīng)器,轉(zhuǎn)基因克隆動物可以作為生物反應(yīng)器,生產(chǎn)許多珍貴的醫(yī)用蛋白;生產(chǎn)許多珍貴的醫(yī)用蛋白;研究克隆動物和克隆細(xì)胞可使人類更深研究克隆動物和克隆細(xì)胞可使人類更深入地了解胚胎發(fā)育及衰老過程;入地了解胚胎發(fā)育及衰老過程;用克隆動物做疾病模型,能使人們更好用克隆動物做疾病模型,能使人們更好的追蹤研究疾病的發(fā)展過程和治療疾病。的追蹤研究疾病的發(fā)展過程和治療疾病。應(yīng)用應(yīng)用第20頁/共34頁(2 2)畜
12、牧業(yè):)畜牧業(yè):利用體細(xì)胞克隆技術(shù)可以加速家畜遺利用體細(xì)胞克隆技術(shù)可以加速家畜遺傳改良進(jìn)程,促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育;傳改良進(jìn)程,促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育;在保護(hù)瀕危物種方面,可望利用體細(xì)胞核在保護(hù)瀕危物種方面,可望利用體細(xì)胞核移植技術(shù)增加這些動物的存活數(shù)量。移植技術(shù)增加這些動物的存活數(shù)量。第21頁/共34頁三、動物細(xì)胞融合和單克隆抗體三、動物細(xì)胞融合和單克隆抗體抗體:能夠與抗原發(fā)生抗體:能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的特異性結(jié)合的免疫球蛋免疫球蛋白白。能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是漿漿細(xì)胞(即效應(yīng)細(xì)胞(即效應(yīng)B細(xì)胞)細(xì)胞)。第22頁/共34頁抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗抗原原 反復(fù)注射動物反復(fù)注射
13、動物從動物的從動物的血清血清中分離抗體中分離抗體該法制備抗體的缺點(diǎn):該法制備抗體的缺點(diǎn):產(chǎn)量低、純度低,且產(chǎn)量低、純度低,且抗體的特異性差、靈抗體的特異性差、靈敏度低。敏度低。第23頁/共34頁提示提示1 1:對:對B B細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎?細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎?提示提示2 2:我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以:我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的?無限增殖的?問題:如何大量生產(chǎn)單克隆抗體?問題:如何大量生產(chǎn)單克隆抗體?請嘗試設(shè)計(jì)一個(gè)方案。請嘗試設(shè)計(jì)一個(gè)方案。第24頁/共34頁為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白?為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白?會有幾種融合方式?會有幾種融合方式? 雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)?
14、雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)? 是否所有的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生專一是否所有的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生專一性抗體?性抗體?如何大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到大量的單克如何大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體?隆抗體?閱讀課本閱讀課本P P6666回答以下問題回答以下問題第25頁/共34頁免疫小鼠免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)注射到小注射到小鼠體內(nèi)鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)單克隆抗體單克隆抗體具有能產(chǎn)生特具有能產(chǎn)生特定抗體的雜交定抗體的雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞細(xì)胞雜交細(xì)胞克隆產(chǎn)生特定克隆產(chǎn)生特定抗體的雜交細(xì)抗體的雜交細(xì)胞胞多種雜交
15、細(xì)胞多種雜交細(xì)胞融合融合第26頁/共34頁 思考思考 :1、本過程利用了哪些原理?、本過程利用了哪些原理?免疫原理,細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞免疫原理,細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理。培養(yǎng)原理。2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)細(xì)胞融合?胞融合?這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞,繼承了雙這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞,繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì),不僅具有親細(xì)胞的遺傳物質(zhì),不僅具有B細(xì)胞分細(xì)胞分泌抗體的能力,而且還有無限增殖的泌抗體的能力,而且還有無限增殖的本領(lǐng),因而可以獲得大量單克隆抗體。本領(lǐng),因而可以獲得大量單克隆抗體。第27頁/共34頁單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn):單克隆抗體最主要的優(yōu)點(diǎn):化
16、學(xué)性質(zhì)單一化學(xué)性質(zhì)單一特異性強(qiáng),靈敏度高,能大量制備。特異性強(qiáng),靈敏度高,能大量制備。應(yīng)用主要有:應(yīng)用主要有:1、臨床診斷、臨床診斷2、作為載體,運(yùn)載抗癌藥物,形成、作為載體,運(yùn)載抗癌藥物,形成“生物導(dǎo)生物導(dǎo)彈彈”治療腫瘤治療腫瘤生物導(dǎo)彈:生物導(dǎo)彈:單克隆抗體作為載體分子,同抗癌藥物相結(jié)單克隆抗體作為載體分子,同抗癌藥物相結(jié)合,將他們運(yùn)載到腫瘤部位,殺死癌細(xì)胞,這種抗體合,將他們運(yùn)載到腫瘤部位,殺死癌細(xì)胞,這種抗體藥物結(jié)合物稱之為生物導(dǎo)彈。它能定向殺滅癌細(xì)胞,藥物結(jié)合物稱之為生物導(dǎo)彈。它能定向殺滅癌細(xì)胞,避免或減少對正常細(xì)胞的傷害,大大減輕了抗癌藥物的避免或減少對正常細(xì)胞的傷害,大大減輕了抗癌
17、藥物的副作用。副作用。第28頁/共34頁總結(jié)一、動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)二、動物細(xì)胞核移植技術(shù)與體細(xì)胞克隆三、動物細(xì)胞融合和單克隆抗體第29頁/共34頁第30頁/共34頁3 、(多選題)將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與一種、(多選題)將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與一種B淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞融合,可使融合的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生單克隆抗體胞融合,可使融合的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生單克隆抗體,其依據(jù)是,其依據(jù)是( ) AB淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體,但不能無限增殖淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體,但不能無限增殖BB淋巴細(xì)胞只有與骨髓瘤細(xì)胞融合后才能產(chǎn)生抗淋巴細(xì)胞只有與骨髓瘤細(xì)胞融合后才能產(chǎn)生抗體體 C骨隨瘤細(xì)胞可以無限增殖,但不能產(chǎn)生抗體骨隨瘤細(xì)胞可以無限增殖,但不能產(chǎn)
18、生抗體D骨髓瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體,但不能無限增殖骨髓瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體,但不能無限增殖A C第31頁/共34頁(1)(1)若若A A細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞,則細(xì)胞是小鼠骨髓瘤細(xì)胞,則B B細(xì)胞是取自小細(xì)胞是取自小鼠體內(nèi)的鼠體內(nèi)的 細(xì)胞,細(xì)胞,從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞從小鼠體內(nèi)提取分離該細(xì)胞之前,應(yīng)給小鼠注射之前,應(yīng)給小鼠注射_類物質(zhì)。類物質(zhì)。(2)d過程是一個(gè)過程是一個(gè)_過程,該過程過程,該過程的進(jìn)行常用的進(jìn)行常用_或或_的誘導(dǎo)的誘導(dǎo)。(3)(3)假設(shè)僅考慮某兩個(gè)細(xì)胞的融合,則可形成假設(shè)僅考慮某兩個(gè)細(xì)胞的融合,則可形成 種類型的種類型的C C細(xì)胞,因此需用細(xì)胞,因此需用_培養(yǎng)基篩選出培養(yǎng)基篩選出D D細(xì)胞用于培養(yǎng),細(xì)胞用于培養(yǎng),D D細(xì)胞的名稱是細(xì)胞的名稱是 ,其特,其特點(diǎn)是點(diǎn)是_。效應(yīng)效應(yīng)B抗原抗原細(xì)胞融合細(xì)胞融合聚乙二醇聚乙二醇 滅活的病毒滅活的病毒選擇性選擇性 3既
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