微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制

1、第三十六章微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制 微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制，包括室微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制，包括室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量控制評價(jià)。內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量控制評價(jià)。室內(nèi)質(zhì)量控制是由實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部制室內(nèi)質(zhì)量控制是由實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部制定并實(shí)施的，是質(zhì)量保證的核心定并實(shí)施的，是質(zhì)量保證的核心和基礎(chǔ)。和基礎(chǔ)。室間質(zhì)量控制評價(jià)是由實(shí)驗(yàn)室外室間質(zhì)量控制評價(jià)是由實(shí)驗(yàn)室外部的組織或機(jī)構(gòu)對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的部的組織或機(jī)構(gòu)對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的質(zhì)量評價(jià)。質(zhì)量評價(jià)。 第一節(jié) 室內(nèi)質(zhì)量控制 （一）人員與組織管理（一）人員與組織管理 經(jīng)過廣泛的基礎(chǔ)訓(xùn)練教育，包括微經(jīng)過廣泛的基礎(chǔ)訓(xùn)練教育，包括微生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)臨床醫(yī)學(xué)知識(shí)的生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)臨床醫(yī)學(xué)知識(shí)的學(xué)習(xí)，

2、專業(yè)化的實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)。學(xué)習(xí)，專業(yè)化的實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)。 參加醫(yī)務(wù)人員的繼續(xù)教育。參加醫(yī)務(wù)人員的繼續(xù)教育。配有一名經(jīng)嚴(yán)格訓(xùn)練并長期從事于配有一名經(jīng)嚴(yán)格訓(xùn)練并長期從事于微生物檢驗(yàn)的技術(shù)人員，全面負(fù)責(zé)微生物檢驗(yàn)的技術(shù)人員，全面負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室的工作。實(shí)驗(yàn)室的工作。 （二）操作手冊（二）操作手冊包括：包括：各級(jí)人員的職責(zé)和權(quán)限；各級(jí)人員的職責(zé)和權(quán)限；實(shí)驗(yàn)室安全措施；實(shí)驗(yàn)室安全措施；標(biāo)本采集和處理指南；標(biāo)本采集和處理指南；本室開展的檢驗(yàn)項(xiàng)目及最低鑒定要求；本室開展的檢驗(yàn)項(xiàng)目及最低鑒定要求；培養(yǎng)基和試劑的配制方法；培養(yǎng)基和試劑的配制方法；質(zhì)量控制方案；質(zhì)量控制方案；常用參考數(shù)據(jù)；常用參考數(shù)據(jù)；其他制度。其他制度。（

3、三）培養(yǎng)基的質(zhì)量控制（三）培養(yǎng)基的質(zhì)量控制培養(yǎng)基是分離培養(yǎng)微生物的必需品。培培養(yǎng)基是分離培養(yǎng)微生物的必需品。培養(yǎng)基質(zhì)量的好壞，直接關(guān)系到分離培養(yǎng)養(yǎng)基質(zhì)量的好壞，直接關(guān)系到分離培養(yǎng)的成敗。目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都使用干粉的成敗。目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都使用干粉培養(yǎng)基配制或使用成品培養(yǎng)基。對來自培養(yǎng)基配制或使用成品培養(yǎng)基。對來自著名的微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)公司的培養(yǎng)基，著名的微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)公司的培養(yǎng)基，質(zhì)量比較穩(wěn)定。只要按照說明書的要求質(zhì)量比較穩(wěn)定。只要按照說明書的要求貯存，在有效期內(nèi)使用可獲得滿意效果。貯存，在有效期內(nèi)使用可獲得滿意效果。測定羊血瓊脂平板的性能測定羊血瓊脂平板的性能 培養(yǎng)基培養(yǎng)基質(zhì)控菌株質(zhì)控菌株

4、判定標(biāo)準(zhǔn)判定標(biāo)準(zhǔn)生長試驗(yàn)生長試驗(yàn)金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌 ATCC25923ATCC25923生長生長溶血反應(yīng)溶血反應(yīng)肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌ATCC19615ATCC19615生長，生長，溶血溶血 化膿性鏈球菌化膿性鏈球菌 ATCC6305ATCC6305生長，生長，溶血溶血 桿菌肽敏感桿菌肽敏感（紙片法）（紙片法） 化膿性鏈球菌化膿性鏈球菌 ATCC6305ATCC630510mm10mm，敏感，敏感B B群鏈球菌群鏈球菌10mm10mm，耐藥，耐藥（四）試劑、抗血清和染色液質(zhì)量控制（四）試劑、抗血清和染色液質(zhì)量控制1 1試劑及染色液注明配制日期，試劑及染色液注明配制日期， 有效日期及貯存

5、條件。測試有效日期及貯存條件。測試 同時(shí)進(jìn)行陽性和陰性對照試同時(shí)進(jìn)行陽性和陰性對照試 驗(yàn)。驗(yàn)。2 2抗血清的質(zhì)量控制來源可靠，抗血清的質(zhì)量控制來源可靠， 根據(jù)使用說明使用與保存。根據(jù)使用說明使用與保存。 凍干制品還應(yīng)注明配成水溶凍干制品還應(yīng)注明配成水溶 液的日期。抗血清應(yīng)澄清。液的日期。抗血清應(yīng)澄清。 第一次使用時(shí)，應(yīng)用已知菌第一次使用時(shí)，應(yīng)用已知菌 效價(jià)和特異性進(jìn)行測定。合效價(jià)和特異性進(jìn)行測定。合 格者方可使用。格者方可使用。 （五）抗生素與抗生素紙片（五）抗生素與抗生素紙片 抗菌藥物敏感試驗(yàn)是臨床進(jìn)行抗抗菌藥物敏感試驗(yàn)是臨床進(jìn)行抗菌治療的指導(dǎo)性實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果的菌治療的指導(dǎo)性實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果的正確

6、性直接關(guān)系到抗菌治療的成正確性直接關(guān)系到抗菌治療的成敗。常用有紙片法和稀釋法，保敗。常用有紙片法和稀釋法，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性極為重要。證結(jié)果的準(zhǔn)確性極為重要。 舉例：紙片法質(zhì)量控制舉例：紙片法質(zhì)量控制培養(yǎng)基：應(yīng)使用合格的培養(yǎng)基：應(yīng)使用合格的MHMH瓊脂，瓊脂， 應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)菌株、已知藥敏紙應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)菌株、已知藥敏紙 片和標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行測試，符合片和標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行測試，符合 要求才可使用。要求才可使用。 菌懸液濃度標(biāo)準(zhǔn)：菌懸液濃度標(biāo)準(zhǔn)： 為為1.51.5108CFU108CFUml ml 。含藥紙片應(yīng)冷凍保存，含藥紙片應(yīng)冷凍保存，2020 可保存一年。新購紙片用標(biāo)準(zhǔn)可保存一年。新購紙片用標(biāo)準(zhǔn) 菌株和培養(yǎng)

7、基，用標(biāo)準(zhǔn)方法測菌株和培養(yǎng)基，用標(biāo)準(zhǔn)方法測 定，符合要求方可使用。定，符合要求方可使用。 實(shí)驗(yàn)過程及結(jié)果測量：菌懸液應(yīng)實(shí)驗(yàn)過程及結(jié)果測量：菌懸液應(yīng) 在在15min15min內(nèi)接種至平板，平放內(nèi)接種至平板，平放3min3min， 然后將藥物紙片貼到平板上，然后將藥物紙片貼到平板上， 100mm100mm的平皿不超過的平皿不超過5 5張，置張，置3535 孵育孵育18h18h，測量精確度，測量精確度1 110mm10mm。質(zhì)控菌株有：金黃色葡萄球菌質(zhì)控菌株有：金黃色葡萄球菌 ATCC25923ATCC25923；大腸；大腸 埃希菌埃希菌ATCC25922ATCC25922 等。等。抑菌環(huán)的質(zhì)控范圍

8、：在抑菌環(huán)的質(zhì)控范圍：在2020個(gè)試驗(yàn)個(gè)試驗(yàn) 結(jié)果中只能有結(jié)果中只能有1 1個(gè)結(jié)果超出所列的個(gè)結(jié)果超出所列的 范圍。范圍。 質(zhì)控測定次數(shù)：每批新的質(zhì)控測定次數(shù)：每批新的MHMH瓊脂和瓊脂和 含藥紙片必須用質(zhì)控菌株進(jìn)行檢測含藥紙片必須用質(zhì)控菌株進(jìn)行檢測 3030日，日，3030個(gè)抑菌環(huán)直徑只有少于個(gè)抑菌環(huán)直徑只有少于3 3個(gè)個(gè) 結(jié)果超出范圍。達(dá)到要求后，每周結(jié)果超出范圍。達(dá)到要求后，每周 檢測一次。檢測一次。 （六）儀器（六）儀器 1 1高壓滅菌器和干熱滅菌器最好高壓滅菌器和干熱滅菌器最好 在滅菌器裝上溫度記錄裝置，在滅菌器裝上溫度記錄裝置， 以保證整個(gè)滅菌過程中保持合以保證整個(gè)滅菌過程中保持合

9、 適的溫度。為了保證滅菌的徹適的溫度。為了保證滅菌的徹 底，可用生物指示劑嗜熱脂肪底，可用生物指示劑嗜熱脂肪 芽胞桿菌芽胞桿菌ATCC7953ATCC7953監(jiān)視滅菌效監(jiān)視滅菌效 果。果。2 2培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱 應(yīng)在每應(yīng)在每 日工作開始和結(jié)束時(shí)記錄溫度。日工作開始和結(jié)束時(shí)記錄溫度。 3 3二氧化碳培養(yǎng)箱二氧化碳培養(yǎng)箱 每天檢查每天檢查CO2CO2含量。含量。4 4厭氧罐或厭氧箱厭氧罐或厭氧箱 美籃為指示劑，美籃為指示劑， 無氧時(shí)應(yīng)無色。無氧時(shí)應(yīng)無色。5 5生物安全柜生物安全柜 更換濾網(wǎng)由專門更換濾網(wǎng)由專門 技術(shù)人員進(jìn)行。技術(shù)人員進(jìn)行。6 6細(xì)菌培養(yǎng)儀細(xì)菌培養(yǎng)儀 對每批培

10、養(yǎng)瓶進(jìn)對每批培養(yǎng)瓶進(jìn) 行生長試驗(yàn)。保證在有效期內(nèi)行生長試驗(yàn)。保證在有效期內(nèi) 使用。使用。7 7微生物鑒定儀微生物鑒定儀 應(yīng)及時(shí)更新系應(yīng)及時(shí)更新系 統(tǒng)操作軟件，使之能識(shí)別最新統(tǒng)操作軟件，使之能識(shí)別最新 認(rèn)識(shí)的微生物。認(rèn)識(shí)的微生物。 （七）標(biāo)本檢驗(yàn)過程的質(zhì)量控制（七）標(biāo)本檢驗(yàn)過程的質(zhì)量控制微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室除了上述儀器、試微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室除了上述儀器、試劑、人員等進(jìn)行質(zhì)量控制外，還應(yīng)劑、人員等進(jìn)行質(zhì)量控制外，還應(yīng)對標(biāo)本檢驗(yàn)過程中涉及的每個(gè)環(huán)節(jié)對標(biāo)本檢驗(yàn)過程中涉及的每個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行全程質(zhì)量控制。包括從標(biāo)本采進(jìn)行全程質(zhì)量控制。包括從標(biāo)本采集集 ，直接涂片檢查，直接涂片檢查 ，分離培養(yǎng)到，分離培養(yǎng)到鑒定的全過程。

11、鑒定的全過程。使用自動(dòng)化鑒定儀或編碼方式鑒定，使用自動(dòng)化鑒定儀或編碼方式鑒定，必須進(jìn)行核對以防錯(cuò)誤。必須進(jìn)行核對以防錯(cuò)誤。 （八）室內(nèi)全面質(zhì)量控制（八）室內(nèi)全面質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室人員要對以上各項(xiàng)的質(zhì)量實(shí)驗(yàn)室人員要對以上各項(xiàng)的質(zhì)量控制內(nèi)容進(jìn)行全面實(shí)施。由個(gè)人控制內(nèi)容進(jìn)行全面實(shí)施。由個(gè)人負(fù)責(zé)全面的質(zhì)量控制，自我核對，負(fù)責(zé)全面的質(zhì)量控制，自我核對，定期與參考實(shí)驗(yàn)室核對并接受考定期與參考實(shí)驗(yàn)室核對并接受考評。評。 （九）標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存（九）標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源和保存l l標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源 標(biāo)準(zhǔn)菌株是標(biāo)準(zhǔn)菌株是 指具有典型的、穩(wěn)定的生理生指具有典型的、穩(wěn)定的生理生 化特征，并被國際社會(huì)所認(rèn)可化特

12、征，并被國際社會(huì)所認(rèn)可 的菌株。來源于專門的機(jī)構(gòu)，的菌株。來源于專門的機(jī)構(gòu)， 如衛(wèi)生部藥物生物制品鑒定所如衛(wèi)生部藥物生物制品鑒定所 菌種保藏中心。菌種保藏中心。2 2標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存（l l）一般保存法：將菌種于半固體培）一般保存法：將菌種于半固體培 養(yǎng)基中，養(yǎng)基中，3535培養(yǎng)培養(yǎng) 18h18h時(shí)后封蓋無菌石時(shí)后封蓋無菌石 蠟油，置蠟油，置44保存。保存。（2 2）冷凍干燥法：是最可靠的菌種）冷凍干燥法：是最可靠的菌種 保藏方法，它具保藏方法，它具 有不改變菌種性有不改變菌種性 狀和保存時(shí)間長狀和保存時(shí)間長 等優(yōu)點(diǎn)，但需有等優(yōu)點(diǎn)，但需有 專門的冷凍干燥專門的冷凍干燥 設(shè)備。設(shè)備。

13、 第二節(jié) 空間質(zhì)量控制（一）機(jī)構(gòu)（一）機(jī)構(gòu) 我國負(fù)責(zé)臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制我國負(fù)責(zé)臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制 的部門是各級(jí)臨床檢驗(yàn)中心和參考實(shí)驗(yàn)的部門是各級(jí)臨床檢驗(yàn)中心和參考實(shí)驗(yàn) 室，負(fù)責(zé)定期或不定期地通過各項(xiàng)熟練室，負(fù)責(zé)定期或不定期地通過各項(xiàng)熟練 程度考核和盲點(diǎn)試驗(yàn)檢查各實(shí)驗(yàn)室的工程度考核和盲點(diǎn)試驗(yàn)檢查各實(shí)驗(yàn)室的工 作質(zhì)量和水平，進(jìn)行總結(jié)和評估。各級(jí)作質(zhì)量和水平，進(jìn)行總結(jié)和評估。各級(jí) 實(shí)驗(yàn)室可同時(shí)接受國內(nèi)、國際多個(gè)質(zhì)量實(shí)驗(yàn)室可同時(shí)接受國內(nèi)、國際多個(gè)質(zhì)量 控制機(jī)構(gòu)或參考實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量評價(jià)?？刂茩C(jī)構(gòu)或參考實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量評價(jià)。 （二）一般性檢查項(xiàng)目（二）一般性檢查項(xiàng)目 包括有否制定各種制度及其執(zhí)行

14、情況。包括有否制定各種制度及其執(zhí)行情況。1 1培養(yǎng)基和試劑的配制記錄、培養(yǎng)基的保存培養(yǎng)基和試劑的配制記錄、培養(yǎng)基的保存 方法、滅菌質(zhì)量、有效期。方法、滅菌質(zhì)量、有效期。2 2室內(nèi)全面質(zhì)量控制的建立，室內(nèi)工作人員室內(nèi)全面質(zhì)量控制的建立，室內(nèi)工作人員 的熟練程度的考核和盲點(diǎn)試驗(yàn)的進(jìn)行情況，的熟練程度的考核和盲點(diǎn)試驗(yàn)的進(jìn)行情況， 細(xì)菌檢驗(yàn)的操作手冊及操作的規(guī)范性。細(xì)菌檢驗(yàn)的操作手冊及操作的規(guī)范性。3 3設(shè)備的操作卡，操作人員的操作水平，設(shè)設(shè)備的操作卡，操作人員的操作水平，設(shè) 備的使用保養(yǎng)、維修記錄。備的使用保養(yǎng)、維修記錄。（三）熟練程度的考核（三）熟練程度的考核由質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)（檢驗(yàn)中心或參考實(shí)由質(zhì)控

15、管理機(jī)構(gòu)（檢驗(yàn)中心或參考實(shí)驗(yàn)室）發(fā)放模擬標(biāo)本或菌種，接收的驗(yàn)室）發(fā)放模擬標(biāo)本或菌種，接收的實(shí)驗(yàn)室知道菌株的來源、檢驗(yàn)的內(nèi)容實(shí)驗(yàn)室知道菌株的來源、檢驗(yàn)的內(nèi)容和時(shí)間。實(shí)驗(yàn)室完成鑒定后在規(guī)定時(shí)和時(shí)間。實(shí)驗(yàn)室完成鑒定后在規(guī)定時(shí)間內(nèi)將結(jié)果反饋至檢驗(yàn)中心或參考實(shí)間內(nèi)將結(jié)果反饋至檢驗(yàn)中心或參考實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行評價(jià)。驗(yàn)室，進(jìn)行評價(jià)。分析結(jié)果錯(cuò)誤的原因，提供有關(guān)的分析結(jié)果錯(cuò)誤的原因，提供有關(guān)的教育資料或舉辦學(xué)習(xí)班，不斷培養(yǎng)教育資料或舉辦學(xué)習(xí)班，不斷培養(yǎng)和訓(xùn)練技術(shù)人員，提高了解決類似和訓(xùn)練技術(shù)人員，提高了解決類似問題的技術(shù)水平。但受試實(shí)驗(yàn)室通問題的技術(shù)水平。但受試實(shí)驗(yàn)室通常對這些菌株特別重視，采用超過常對這些菌株特別

16、重視，采用超過常規(guī)操作標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行鑒定，使常規(guī)操作標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行鑒定，使上報(bào)結(jié)果不能準(zhǔn)確反映實(shí)驗(yàn)室的真上報(bào)結(jié)果不能準(zhǔn)確反映實(shí)驗(yàn)室的真實(shí)水平。實(shí)水平。（四）盲點(diǎn)試驗(yàn)（四）盲點(diǎn)試驗(yàn)為了準(zhǔn)確反映受控實(shí)驗(yàn)室日常處理為了準(zhǔn)確反映受控實(shí)驗(yàn)室日常處理臨床標(biāo)本的實(shí)際水平及能力，較好臨床標(biāo)本的實(shí)際水平及能力，較好的方法是進(jìn)行未知標(biāo)本的盲點(diǎn)質(zhì)量的方法是進(jìn)行未知標(biāo)本的盲點(diǎn)質(zhì)量控制。由質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)將模擬標(biāo)本控制。由質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)將模擬標(biāo)本混入臨床普通標(biāo)本，送人實(shí)驗(yàn)室進(jìn)混入臨床普通標(biāo)本，送人實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)測定。行常規(guī)測定。實(shí)驗(yàn)室主管及實(shí)驗(yàn)操作者不知道實(shí)驗(yàn)室主管及實(shí)驗(yàn)操作者不知道哪一個(gè)標(biāo)本是來自質(zhì)控機(jī)構(gòu)的。哪一個(gè)標(biāo)本是來自質(zhì)控機(jī)構(gòu)的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果由質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)收實(shí)驗(yàn)結(jié)果由質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)收回，進(jìn)行評價(jià)?；?，進(jìn)行評價(jià)。（五）質(zhì)控結(jié)果的分析與評價(jià)（五）質(zhì)控結(jié)果的分析與評價(jià)質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)對每次質(zhì)控結(jié)果進(jìn)質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)對每次質(zhì)控結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，將每一實(shí)驗(yàn)室的結(jié)行統(tǒng)計(jì)分析，將每一實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較。根據(jù)參加的果與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較。根據(jù)參加的規(guī)模和鑒定的正確數(shù)，計(jì)算鑒定規(guī)模和鑒定的正確數(shù)，計(jì)算鑒定正確率及所有參加實(shí)驗(yàn)室的平均正確率及所有參加實(shí)驗(yàn)室的平均分，以及每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的得分。分，以及每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的得分。世界衛(wèi)生組織對每一個(gè)正確的鑒世界衛(wèi)生組織對每一個(gè)正確的鑒定得定得3 3分；部分正確但可