甘草中總黃酮的提取及含量測定

1、湖南工程學院應用技術學院專業(yè)綜合實驗甘草中總黃酮的提取及含量測定前言 甘草是我國傳統(tǒng)常用中草藥之一，也是我國重要的植物資源 。甘草黃酮類成分是甘草中最重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗腫瘤、增強一t5血管功能、增強免疫力等作用 。因此，開展甘草的深加工，使甘草資源得以充分利用，增加資源的附加值，前景十分可觀。為此，筆者以甘草為對象，研究了甘草黃酮的乙醇回流提取工藝，單因素試驗確定各因素對提取工藝的影響，正交試驗確定甘草黃酮提取的最正確工藝條件。1材料與方法1.1材料甘草，市售；試劑：亞硝酸鈉、碳酸鈉、石油醚、蒸餾水、氫氧化鈉、鹽酸、無水乙醇、蘆?。粌x器：燒杯、容量瓶、移液管、玻璃棒、量筒、回流

2、裝置、濾紙、HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋、分析天平、AB104N電子天平、布氏漏斗、SHZC型循環(huán)水多用真空泵、分光光度計。1.2方法標準曲線的繪制稱取蘆丁對照品10 mg，用95%的乙醇溶解，搖勻，定容至10 ml，使之成為濃度為1 mg/ml的蘆丁標準品溶液，作為貯備液備用。量取上述溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 ml，分別加水至3 ml，加5%亞硝酸鈉溶液0.5 ml，放置6 min，加10%的硝酸鋁溶液0.5 m1，搖勻、放置6 min后加5%的氫氧化鈉溶液2.5 m1，混勻、放置15 min后蒸餾水定容至10 ml。用紫外分光光度計在500 nm處測吸光度，以對照品濃度

3、為橫坐標，吸光度為縱坐標做標準曲線。 材料處理取甘草根莖粉(粉碎過40-60目篩)3 g置于燒杯中,按甘草粉末:乙醇(1:30)參加90ml濃度為70%的乙醇混合均勻.試驗設計按每組自己做的時候用的方法的具體過程寫第五組：1.配置蘆丁標液： 2.配置標準曲線所需不同濃度溶液 3.測吸光度，以對照品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標做標準曲線。 4.處理樣品 5.測出樣品吸光度，按照標準曲線，得出樣品總黃酮含量1.2.4甘草黃酮含量測定收集濾液并測量濾液體積，取樣按繪制標準曲線的方法測定其吸光度值，根據(jù)公式計算每克甘草中黃酮的含量。有稀釋的寫清稀釋了多少倍等2 結果與分析測出樣品吸光度為0.146.比

4、照出標準曲線得出濃度為0.0213mg/ml此濃度為10ml樣品處理液的濃度。那么3ml參比原液中物質的量為0.0213mg/ml*0.01L=0.000213mg那么參比原液的濃度為0.000213/0.003=0.071 mg/ml那么樣品原液的濃度為0.071*5=3.55 mg/ml提取原液有20ml，那么樣品中甘草黃酮含量為3.55*20/3=23.67mg/g3 結論經(jīng)過預試驗確定影響提取含量的主要因素為乙醇濃度、時間、溫度、料液比。因此先進行單因素試驗，根據(jù)單因素試驗的結果，以乙醇濃度、時間、溫度、料液比為因素、進行 (3 )正交試驗，根據(jù)正交試驗結果確定最正確工藝。根據(jù)其他幾組

5、同學的實驗結果做出如下分析乙醇濃度對提取含量的影響。由圖2可知，乙醇濃度的最優(yōu)水平為75 ，而在兩側的濃度范圍內提取含量都是隨之下降的。乙醇濃度越大，極性越小，增大極性小的黃酮類溶出，從而在一定乙醇濃度范圍內，提取含量呈上升趨勢；當乙醇濃度超過一定范圍，即極性過大，減少了黃酮糖苷類等的溶出，從而提取含量呈下降趨勢。因而在設計正交試驗時，將其濃度選在75 左右。溫度對提取含量的影響。由圖3可知，當溫度低于85時，隨著溫度的升高，從熱動力學方面增加了黃酮類的溶出，從而提取含量呈上升趨勢；當溫度高于85時，可能黃酮類發(fā)生水解、裂解或者黃酮類之間發(fā)生了一系列反響，從而使提取含量呈下降趨勢。因而在設計正

6、交試驗時，溫度選擇在85左右。 時間對提取含量的影響。由圖4可知，當時間少于3h時，由于時間的增大有助于黃酮類的溶出，從而提取含量呈上升趨勢；當時間超過3 h時，提取含量反而略微降低。理論上講在35 h提取含量應趨于一個平衡值，或者比3 h稍有上升趨勢，然后再趨于一個平衡值。這可能是由于加熱時間過長，造成黃酮糖苷類的水解，導致黃酮檢出量減少，從而提取含量呈下降趨勢。因此，在正交試驗設計時，時間應選擇在3 h左右。料液比對提取含量的影響。由圖5可知，當料液比小于1：30時，隨著料液比的增大提取含量呈上升趨勢；當料液比高于1：30時，隨著料液比的增大反而呈下降趨勢。料液比影響溶劑的極性，從而影響了

7、不同極性黃酮類的溶解性；同時能耗也隨著料液比的增大而增大，導致在后續(xù)試驗萃取過程中萃取劑用量也隨之增加。因此在設計正交試驗時，將料液比選擇在1：30左右。根據(jù)單因素試驗結果，設計k(3 )正交試驗。試驗結果見表1。由表1可以看出提取甘草黃酮的最優(yōu)方案為A。B C D ，即料液比為1：20，度為85 ，提取時間為4 h，乙醇濃度為75。由極差分析可知，各因素主次順序為DBAC，即乙醇濃度對甘草黃酮的提取含量影響最大，溫度對甘草黃酮提取含量影響次之，影響最小的因素是提取時間。而3 h時的甘草黃酮提取含量與4 h時的相差不大，而減少時間可以降低能耗，因而為了降低本錢，選提取時間為3 h。綜上所述，甘草黃酮的最正確提取工藝條件為A B C D：，即乙醇濃度75 ，溫度85 ，時間3 h，料液比1：20。4總結(1)單因素試驗說明，各因素對黃酮提取率的影響順序為：乙醇濃度溫度料液比提取時間。正交試驗結果說明，乙醇回流提取的最正確