白酒中鄰苯二甲酸酯類的測定

1、白酒中鄰苯二甲酸酯類的測定白酒中鄰苯二甲酸酯類的測定一、鄰苯二甲酸酯類一、鄰苯二甲酸酯類特性分析特性分析 n鄰苯二甲酸酯類鄰苯二甲酸酯類化合物化合物（PAEsPAEs），是指從鄰苯二甲酸二甲基酯到十），是指從鄰苯二甲酸二甲基酯到十三烷基酯，共三烷基酯，共2020多種化合物。多種化合物。n是目前最常用的是目前最常用的增塑劑增塑劑，主要，主要 用于聚氯乙烯材料，令聚氯乙烯用于聚氯乙烯材料，令聚氯乙烯 由硬塑膠變?yōu)橛袕椥缘乃苣z。由硬塑膠變?yōu)橛袕椥缘乃苣z。n其具有種類多、難以降解、生物富其具有種類多、難以降解、生物富 集性強(qiáng)的特點(diǎn)集性強(qiáng)的特點(diǎn), , 具有雌激素樣作用，具有雌激素樣作用， 是是全球環(huán)境污

2、染最為嚴(yán)重物質(zhì)之一全球環(huán)境污染最為嚴(yán)重物質(zhì)之一。PAEs性質(zhì)性質(zhì)v鄰苯二甲酸酯的一般化學(xué)結(jié)構(gòu)是由一個(gè)剛性平面鄰苯二甲酸酯的一般化學(xué)結(jié)構(gòu)是由一個(gè)剛性平面芳烴和兩個(gè)可塑的非線性脂肪側(cè)鏈組成芳烴和兩個(gè)可塑的非線性脂肪側(cè)鏈組成, ,常溫下呈常溫下呈無色油狀粘稠液體。一般難溶于水無色油狀粘稠液體。一般難溶于水, ,易溶于有機(jī)溶易溶于有機(jī)溶劑劑, ,屬中等極性物質(zhì)。屬中等極性物質(zhì)。v該類化合物的液態(tài)溫度范圍相當(dāng)寬該類化合物的液態(tài)溫度范圍相當(dāng)寬, , 具有非常大具有非常大的流動(dòng)性和較小的揮發(fā)性和水溶性的流動(dòng)性和較小的揮發(fā)性和水溶性, ,這些理化性質(zhì)這些理化性質(zhì)決定了決定了PAEsPAEs的行為特點(diǎn)。的行為特

3、點(diǎn)。幾種重點(diǎn)關(guān)注的幾種重點(diǎn)關(guān)注的PAEs性質(zhì)性質(zhì)DMP:沸點(diǎn)282。與乙醇、乙醚混溶，溶于苯、丙酮等多種有機(jī)溶劑20水中溶解度小于0.1g/L。logP=1.56。DEP：沸點(diǎn)350。與乙醇、乙醚混溶，溶于丙酮、苯等有機(jī)溶劑，20水中溶解度1g/L。logP=3.3。DBP：沸點(diǎn)340。水溶性及揮發(fā)性都很低，但易溶于乙醇、乙醚、丙酮和苯等有機(jī)溶劑也能與大多數(shù)烴類互溶。 logP=4.72。 DIBP：沸點(diǎn)327。在水中溶解度0.05g/L（25）。logP=4.11。 DEHP：沸點(diǎn)386。不溶于水，溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑和烴類。 logP=7.19。 PAEs特性總結(jié)與分析思路特性總結(jié)與分析思路

4、v PAEs具有較高的沸點(diǎn)，對光熱穩(wěn)定。大部分PAEs具有親脂性，易溶于非極性溶劑。其中DMP、DEP等有一定的親水性。v 適合用液液萃取、固相萃取等方式進(jìn)行凈化、富集，但須照顧到具有一定親水性的組分DMP、DEP、DMEP、DEEP。二、二、白酒中白酒中PAEsPAEs的檢測方法的檢測方法概述概述1 1、方法和標(biāo)準(zhǔn)、方法和標(biāo)準(zhǔn)v 試劑盒法試劑盒法v 氣相色譜法氣相色譜法(GC)(GC)、氣質(zhì)聯(lián)用法（氣質(zhì)聯(lián)用法（GC-MSGC-MS）。）。v 液相色譜法液相色譜法(LC(LC），液質(zhì)聯(lián)用法（），液質(zhì)聯(lián)用法（L LC-MSC-MS/MS/MS）。）。 GB/T 21911-2008 GB/T 2

5、1911-2008 食品中鄰苯二甲酸酯的測定食品中鄰苯二甲酸酯的測定 2 2、試劑盒法、試劑盒法v 基于ELISA原理 v 針對鄰苯二甲酸酯一類全部物質(zhì)的試劑盒 v 專門針對DBP的試劑盒 v 檢測限多在0.05ppm1ppm之間v 多達(dá)數(shù)十種應(yīng)用分析應(yīng)用分析v最為關(guān)注的就是DBP。由于DBP限量低，其余兩種成分限量要求高，還可能有其他沒有限量要求的組分存在。因此，試劑盒篩查發(fā)現(xiàn)有檢出的，并不能確認(rèn)合格與否。v專門針對DBP檢測的試劑盒，存在同類物質(zhì)的交叉反應(yīng)，特別是作為異構(gòu)體的DIBP，交叉反應(yīng)率較高，多數(shù)試劑盒都在30%上，存在較高的誤判可能。3 3、氣相色譜檢測方法、氣相色譜檢測方法 氣

6、相色譜法：氣相色譜法使用FID檢測器，可以對鄰苯二甲酸類物質(zhì)進(jìn)行檢測。但是受靈敏度的限制，對于酒類中的微量DBP不能滿足檢測要求。若采用濃縮富集、以及使用大體積進(jìn)樣的方式雖可提高靈敏度，但考慮到塑化劑類物質(zhì)在各種試劑乃至器具中都存在本底值，濃縮富集可能加劇這種影響，實(shí)際操作中應(yīng)當(dāng)慎用。三、三、白酒中白酒中PAEsPAEs氣質(zhì)聯(lián)用檢測方法氣質(zhì)聯(lián)用檢測方法1、方法原理v 白酒中的PAEs以正己烷提取，使用HP-5MS石英毛細(xì)管柱，經(jīng)氣相色譜分離后，使用帶EI源的單四極桿質(zhì)譜儀，選擇離子模式（SIM）監(jiān)測，以各組分保留時(shí)間和特征離子的豐度比定性，外標(biāo)法定量。2 2、試劑、材料、儀器、試劑、材料、儀器

7、v 正己烷（色譜純或重蒸分析純）、氯化鈉；正己烷（色譜純或重蒸分析純）、氯化鈉；v 具塞玻璃離心管、玻璃膠頭滴管、渦旋混合器、水浴鍋；具塞玻璃離心管、玻璃膠頭滴管、渦旋混合器、水浴鍋；v 1616種鄰苯二甲酸酯類化合物標(biāo)樣，正己烷稀釋至濃度為種鄰苯二甲酸酯類化合物標(biāo)樣，正己烷稀釋至濃度為0.020.02、0.050.05、0.10.1、0.20.2、0.50.5、1.0g/mL1.0g/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液待用；待用；v 氣相色譜氣相色譜- -質(zhì)譜聯(lián)用儀，具有電子轟擊電離源。質(zhì)譜聯(lián)用儀，具有電子轟擊電離源。3 3、白酒樣品的處理、白酒樣品的處理3.1 3.1 標(biāo)準(zhǔn)方法標(biāo)準(zhǔn)方法稱取白

8、酒樣品稱取白酒樣品5.00g5.00g（精確至（精確至1mg1mg）于）于10mL10mL具塞玻璃離心管具塞玻璃離心管中，加入中，加入2.00mL2.00mL正己烷，振蕩正己烷，振蕩1 min1 min，再加適量氯化鈉，靜，再加適量氯化鈉，靜置或離心分層；置或離心分層；取上層正己烷進(jìn)取上層正己烷進(jìn)GC-MSGC-MS分析。分析。問題：問題： 部分組分，如部分組分，如DMPDMP、DEPDEP、DMEPDMEP、DEEPDEEP等，回收率差，僅等，回收率差，僅為為30%60%。3.2 3.2 改進(jìn)的方法改進(jìn)的方法方法一方法一 稱取白酒樣品稱取白酒樣品2.00g2.00g（精確至（精確至1mg1m

9、g）于）于10mL10mL具塞玻璃離心管具塞玻璃離心管中，置于中，置于9595水浴中水浴中3030分鐘，驅(qū)除乙醇；分鐘，驅(qū)除乙醇； 離心管取出冷至室溫，補(bǔ)加水至離心管取出冷至室溫，補(bǔ)加水至2mL2mL，加入，加入5.00mL5.00mL正己烷正己烷，渦旋提取，渦旋提取2min2min，再加，再加1g1g氯化鈉，振搖氯化鈉，振搖0.5min0.5min，靜置或離，靜置或離心分層；心分層； 取上層正己烷進(jìn)取上層正己烷進(jìn)GC-MSGC-MS分析。分析。方法二方法二 稱取白酒樣品稱取白酒樣品2.00g2.00g（精確至（精確至0.1mg0.1mg）于）于10mL10mL具塞玻璃離心具塞玻璃離心管中；管

10、中； 加入加入4.00mL4.00mL正己烷，渦旋提取正己烷，渦旋提取2min2min，再加，再加1g1g氯化鈉，振搖氯化鈉，振搖0.5min0.5min，靜置或離心分層；，靜置或離心分層； 用玻璃滴管將上層正己烷相轉(zhuǎn)移至另一用玻璃滴管將上層正己烷相轉(zhuǎn)移至另一10mL10mL刻度管中，再刻度管中，再依次用依次用3mL3mL、2mL2mL正己烷萃取正己烷萃取2 2次，合并三次萃取液，正己次，合并三次萃取液，正己烷定容至烷定容至10mL10mL，搖勻后進(jìn)，搖勻后進(jìn)GC-MSGC-MS分析。分析。4 4、儀器操作參數(shù)、儀器操作參數(shù)v 進(jìn)樣口：溫度進(jìn)樣口：溫度250250，進(jìn)樣量，進(jìn)樣量1 1不分流進(jìn)

11、樣；不分流進(jìn)樣；v 柱溫程序：初始溫度柱溫程序：初始溫度6060，保持，保持1min1min，以，以20/min20/min升溫至升溫至220220，保持，保持1 min1 min，再以，再以5/min5/min升溫至升溫至280280，保持，保持4 4 minmin；v 傳輸線溫度：傳輸線溫度：280280；v 載氣：氦氣載氣：氦氣( (純度純度99.99999.999），流速），流速1mL/min1mL/min；v 色譜柱：色譜柱：HP-5MSHP-5MS石英毛細(xì)管柱石英毛細(xì)管柱30m30m0.25mm0.25mm0.25m0.25mv 離子源為離子源為EIEI模式，質(zhì)譜調(diào)諧參數(shù)根據(jù)儀器的

12、特點(diǎn)進(jìn)行調(diào)整，模式，質(zhì)譜調(diào)諧參數(shù)根據(jù)儀器的特點(diǎn)進(jìn)行調(diào)整，確保充分滿足方法的檢出限要求。確保充分滿足方法的檢出限要求。v 各組分監(jiān)測離子附后。各組分監(jiān)測離子附后。標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖 5 5、陽性樣品定性驗(yàn)證、陽性樣品定性驗(yàn)證v 試樣待測液與標(biāo)準(zhǔn)品的選擇離子色譜峰在相同保留時(shí)間處偏差不超過0.5%，并且對應(yīng)質(zhì)譜碎片離子的質(zhì)荷比與標(biāo)準(zhǔn)品一致，其豐度對與標(biāo)準(zhǔn)品相比應(yīng)符合：v 相對豐度50%時(shí)，允許10%偏差；v 相對豐度20%50%時(shí)，允許15%偏差；v 相對豐度10%20%時(shí)，允許20%偏差；v 相對豐度10%，允許50%偏差，此時(shí)可定性確證目標(biāo)分析物。6 6、檢出限、線性范圍、檢出限、線性范

13、圍v檢出限 按照GB/T 21911-2008，白酒屬于不含油脂的樣品，檢出限為0.05mg/kg?？赏ㄟ^空白值分析、標(biāo)準(zhǔn)添加確定是否滿足。改進(jìn)的處理方法均可滿足0.05mg/kg的檢出限。v線性范圍 0.02g/mL1g/mL。四、關(guān)鍵控制點(diǎn)四、關(guān)鍵控制點(diǎn)1 1、玻璃器皿的洗滌、玻璃器皿的洗滌 所用玻璃器皿洗凈后，用重蒸水洗三次，丙酮中浸泡所用玻璃器皿洗凈后，用重蒸水洗三次，丙酮中浸泡1h1h，在，在200200下烘烤下烘烤2h2h，冷卻至室溫備用。全部器皿單獨(dú)存，冷卻至室溫備用。全部器皿單獨(dú)存放，避免誤用。另外，接觸過標(biāo)準(zhǔn)品的玻璃器皿應(yīng)單獨(dú)洗放，避免誤用。另外，接觸過標(biāo)準(zhǔn)品的玻璃器皿應(yīng)單獨(dú)

14、洗滌，防止交叉污染滌，防止交叉污染。2 2、其他可能導(dǎo)致污染的因素、其他可能導(dǎo)致污染的因素v 標(biāo)樣的儲存、配置標(biāo)準(zhǔn)系列的過程v 蒸餾水洗瓶v 滴管的膠頭v 試劑瓶的內(nèi)蓋v 氣相色譜自動(dòng)進(jìn)樣器針、洗針液和廢液瓶v 氣相色譜系統(tǒng)，進(jìn)樣隔墊v3 3、試劑、器具的選擇與評價(jià)、試劑、器具的選擇與評價(jià)v 正己烷、水：PAEs背景低，含量穩(wěn)定；v 杜絕使用塑料材質(zhì)的器具；v 所有的器具和試劑應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格的評價(jià)；v 來自不同瓶的試劑均需做空白試驗(yàn)試劑評價(jià)結(jié)果試劑評價(jià)結(jié)果RT: 10.20 - 19.03111213141516171819Time (min)050100050100050100050100Rel

15、ative Abundance05010005010011.6818.5510.7912.6118.4116.4114.1017.5713.0715.6814.9411.6810.7818.5514.2812.03 12.5014.9013.2516.4015.7317.8917.1311.6710.7918.5512.0314.2812.6314.9116.4213.1817.7315.3918.5511.6810.7917.7012.4517.2812.8216.0714.9213.5818.5510.7911.6812.7818.4816.4018.0613.0114.4215.2911

16、.6810.8018.5611.2211.9616.4017.8916.0712.5613.7117.1114.99NL:2.39E5TIC MS HUANJIWANNL:1.87E8TIC MS shiyoumi-30-60NL:1.55E7TIC MS shiyoumi-chongzhengNL:1.09E7TIC MS yisuanyizhiNL:8.87E4TIC MS zhengjiwan2NL:5.53E4TIC MS zhengjiwan-nongcanji3環(huán)己烷環(huán)己烷石油醚石油醚重蒸石油醚重蒸石油醚乙酸乙酯乙酸乙酯色譜級正己烷色譜級正己烷農(nóng)殘級正己烷農(nóng)殘級正己烷在溶劑中存在的

17、鄰苯酯類主要有三種，鄰苯二甲酸二異丁酯在溶劑中存在的鄰苯酯類主要有三種，鄰苯二甲酸二異丁酯（DIBP）、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）、）、鄰苯二甲酸二（鄰苯二甲酸二（2- -乙基）己酯乙基）己酯（DEHP）。）。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制，注意選取空白值實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制，注意選取空白值低的溶劑。低的溶劑。4 4、質(zhì)控措施、質(zhì)控措施v空白試驗(yàn)：每批測定時(shí)，須帶至少一個(gè)空白試樣，除不加樣品外，其空白試驗(yàn)：每批測定時(shí)，須帶至少一個(gè)空白試樣，除不加樣品外，其他操作同樣品處理步驟一致，考察背景空白影響。他操作同樣品處理步驟一致，考察背景空白影響。v質(zhì)控樣：使用質(zhì)控樣。沒有質(zhì)控樣可采用加標(biāo)回收，在陰

18、性樣品中加質(zhì)控樣：使用質(zhì)控樣。沒有質(zhì)控樣可采用加標(biāo)回收，在陰性樣品中加入入乙醇乙醇配制的標(biāo)樣溶液，按相同方法處理后，計(jì)算回收率。加標(biāo)水平應(yīng)配制的標(biāo)樣溶液，按相同方法處理后，計(jì)算回收率。加標(biāo)水平應(yīng)包含檢出限、兩倍檢出限和十倍檢出限。對于結(jié)果存有疑問需確證的樣包含檢出限、兩倍檢出限和十倍檢出限。對于結(jié)果存有疑問需確證的樣品，還應(yīng)做樣品加標(biāo)。品，還應(yīng)做樣品加標(biāo)。v在儀器運(yùn)行高含量的標(biāo)樣或樣品后，應(yīng)進(jìn)行空白溶劑分析，驗(yàn)證儀器在儀器運(yùn)行高含量的標(biāo)樣或樣品后，應(yīng)進(jìn)行空白溶劑分析，驗(yàn)證儀器的交叉污染水平。的交叉污染水平。v在樣品分析過程中，按照一定頻次加入質(zhì)控樣，驗(yàn)證測試系統(tǒng)的穩(wěn)定在樣品分析過程中，按照一定

19、頻次加入質(zhì)控樣，驗(yàn)證測試系統(tǒng)的穩(wěn)定性。性。五、檢驗(yàn)結(jié)果的分析五、檢驗(yàn)結(jié)果的分析1 1、結(jié)果定性、結(jié)果定性 在相同條件下，試樣和標(biāo)樣選擇離子色譜峰的相同保留在相同條件下，試樣和標(biāo)樣選擇離子色譜峰的相同保留時(shí)間偏差不超過時(shí)間偏差不超過0.5%0.5%，對應(yīng)質(zhì)譜碎片離子的質(zhì)荷比一致，對應(yīng)質(zhì)譜碎片離子的質(zhì)荷比一致，其豐度比與標(biāo)準(zhǔn)品的偏差符合要求，可定性確證目標(biāo)物。其豐度比與標(biāo)準(zhǔn)品的偏差符合要求，可定性確證目標(biāo)物。 保留時(shí)間和離子豐度比超出但接近定性的正常偏差范圍保留時(shí)間和離子豐度比超出但接近定性的正常偏差范圍怎么辦？怎么辦？問題分析問題分析v 保留時(shí)間的偏差是否基質(zhì)差異導(dǎo)致？多次進(jìn)樣偏差是單向性還是隨機(jī)性的？再加標(biāo)確認(rèn)v 同一化合物，各碎片離子質(zhì)量色譜圖中的保留時(shí)間、峰形是否一致？v 每個(gè)組分色譜峰采集的數(shù)據(jù)點(diǎn)數(shù)是否滿足定量要求？15個(gè)點(diǎn)以上方可準(zhǔn)確定量。v 所用儀器定性離子豐度比的RSD是多少？ 3%二、二、白酒中白酒中PAEsPAEs的檢測方法的檢測方法概述概述1 1、方法和標(biāo)準(zhǔn)、方法和標(biāo)準(zhǔn)v 試劑盒法試劑盒法v 氣相色譜法氣相色譜法(GC)(GC)、氣質(zhì)聯(lián)用法（氣質(zhì)聯(lián)用法（GC-MSGC-MS）。）。v 液相色譜法液相色譜法(LC(LC），液質(zhì)聯(lián)用法（），液質(zhì)聯(lián)用法（L LC-MSC-MS/MS/MS）。）。 GB