藥典微生物限度修訂培訓(xùn)知識

1、中國藥典中國藥典20102010年版年版“微生物限度檢查法修微生物限度檢查法修訂版訂版”及及“WHOWHO藥品微藥品微生物實驗室規(guī)范生物實驗室規(guī)范”實施實施細則培訓(xùn)知識細則培訓(xùn)知識主要內(nèi)容主要內(nèi)容一一中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整二二新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念三三實驗室規(guī)劃與建設(shè)實驗室規(guī)劃與建設(shè)四四（仲裁）中檢院判斷藥品污染的方案（仲裁）中檢院判斷藥品污染的方案五五培訓(xùn)總結(jié)培訓(xùn)總結(jié)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整 1. 1.調(diào)整內(nèi)容調(diào)整內(nèi)容章節(jié)內(nèi)容章節(jié)內(nèi)容目的目的無菌檢查法質(zhì)量標準體系基本與國外接軌微生物限度檢查法滅菌法 強調(diào)

2、微生物檢驗的驗證及過程控制抑菌效力檢查法指導(dǎo)原則藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則對滴眼劑的質(zhì)控水平大幅度提高微生物限度檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則 部分品種特別是抗生素品質(zhì)的無藥品微生物實驗室規(guī)范指導(dǎo)原則菌檢查法由附錄走入各論 2. 2.具體內(nèi)容具體內(nèi)容無菌檢查無菌檢查一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整整 中國藥典中國藥典20102010版無菌檢查法修訂方案版無菌檢查法修訂方案 無菌檢查法中對以真菌為檢查目的改良馬丁培養(yǎng)基修訂為以需氧菌為檢查目的地的胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)基（TSB）為研究工作已由上海市藥檢所牽頭完成。 WHO規(guī)程在取樣量取樣量、培養(yǎng)基培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件等

3、主要方面與現(xiàn)行USP、EP無菌檢查法一致。 WHO規(guī)程的并沒有明確規(guī)定硫乙醇培養(yǎng)基必須雙份雙溫度分別培養(yǎng)，相反倒是推薦單一的硫乙醇培養(yǎng)基在20 25 培養(yǎng)。一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整整 比較比較 2. 2.具體內(nèi)容具體內(nèi)容微生物限度檢查微生物限度檢查一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整整 將與ICH、(USP/EP/JP)全面接軌 2010版中國藥典第二增補本將于2013年10月1日頒布 微生物限度檢查法修訂方案肯定會在2015年版中國藥中國藥典典收載，擬提前頒布，爭取必要的過渡期 1）檢驗體系變更； 2）限度標準變更，有“數(shù)量”向

4、“數(shù)量級”轉(zhuǎn)變； 3）控制菌結(jié)果判斷趨向多樣化； 4）以“OOS”代替復(fù)試一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整整 比較比較計數(shù)法計數(shù)法藥典2010版Chp.修訂版2010版Chp.分類依據(jù)營養(yǎng)條件微生物類別項目1需氧菌總數(shù)胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA)細菌數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基項目2霉菌及酵母菌總數(shù)沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA)霉菌及酵母菌數(shù)玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基特點客觀、嚴謹檢驗條件不能滿足控制要求微生物計數(shù)定義變化微生物計數(shù)定義變化修訂前修訂后細菌數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基細菌修訂為需氧菌總數(shù)（TAMC)霉菌和酵母菌玫瑰

5、紅鈉瓊脂培養(yǎng)基霉菌和酵母菌數(shù)修訂為霉菌和酵母菌總數(shù)(TYMC)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整整 需氧菌總數(shù)：生長在胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）上所有的菌落（包括霉菌和酵母菌）。霉菌和酵母菌總數(shù)：一般指生長在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上的所有菌落（包括細菌）。控制菌檢查法控制菌檢查法編號2010版Chp.修訂版2010版Chp.1*耐膽鹽的革蘭氏陰性菌大腸菌群2*大腸埃希菌大腸埃希菌3*沙門菌沙門菌4*銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌5*金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌6梭菌梭菌7白色念珠菌白色念珠菌*：培養(yǎng)基體系有明顯變化一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體

6、系的調(diào)整結(jié)果判斷結(jié)果判斷項目2010版Chp.修訂版2010版Chp.微生物計數(shù)法控制標準（接受限度）101（20）10 (10)102（200)100 (100)控制菌檢查法結(jié)果較少的生化實驗或采用其他事宜方法進一步鑒定應(yīng)進行分離、純化及適宜的鑒定實驗一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整整 增加新的計數(shù)方法MPN法 最可能計數(shù)法（最可能計數(shù)法（MPN法）法） 用于微生物計數(shù)時精確度較差，僅在供試品需氧菌總數(shù)沒有適宜計數(shù)方法時使用，不適用霉菌計數(shù)。 3. 3.調(diào)整背景調(diào)整背景一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)

7、一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整整 醫(yī)藥產(chǎn)品的發(fā)展醫(yī)藥產(chǎn)品的發(fā)展 一百多年來人們努力提高在“有菌的環(huán)境”生成“無菌的產(chǎn)品”的能力，事實證明這一努力至今充滿挑戰(zhàn)！2006年，齊二藥亮菌甲素注射液導(dǎo)致多名患者腎功能衰竭，13名患者死亡；2006年，安徽華源生物藥業(yè)公司克林霉素注射液導(dǎo)致11名患者死亡；2008年，江西博雅生物制藥公司靜脈注射用人免疫球蛋白，6人注射后死亡；2009年至今一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整整1 1）國內(nèi)）國內(nèi) 20062006年年7 7月月8 8月發(fā)生震驚全國的月發(fā)生震驚全國的“欣弗事件欣弗事件”一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)一、中國藥典微

8、生物檢查體系的調(diào)整整奪命的奪命的“欣弗欣弗”“欣弗事件”對我國藥品生成監(jiān)管產(chǎn)生了深遠的影響，直接推動了新的藥典方案和新版GMP規(guī)定的出臺。一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整整“欣弗事件”將永遠成為無菌藥品生成的典 型反面教材！ 2 2）國際）國際2012年10月，美國新英格蘭合成制藥中心生成的注射用類固醇霉菌污染，造成數(shù)百人感染真菌腦炎，至年底統(tǒng)計已死亡39人。一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整整 在50支密封藥瓶中檢測出曲霉菌和突臍蠕孢菌兩種真菌。一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整整 3）發(fā)展趨勢全球化的微生

9、物檢驗 新的GPM 新的藥典方案 新的ISO標準 WHO微生物實驗室PQ認證You do right the wrong thing !You do right the wrong thing !一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整整 Pre-Qualification of quality control laboratories WHO PQ 認證認證 WHO 自2004年建立預(yù)認證程序，聯(lián)合國機構(gòu)評價使用質(zhì)控實驗室的指導(dǎo)原則（2004年發(fā)布 WHO TRS，No. 917，Annex 4，2007年修訂 WHO TRS，No. 943，Annex 5，目前仍在修

10、訂中） 蓋茨全球基金項目蓋茨全球基金項目一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整 WHO good practices for pharmaceutical microbiology laboratories (GPML)1.Personnel 人員2.Environment 環(huán)境3.Validation of test methods 檢測方法驗證4.Equipment 儀器設(shè)備5.Reagents and culture media 試劑和培養(yǎng)基6.Reference materials and reference cultures 菌株7.Sampling 抽樣8

11、.Sample handling and identification 樣本處理和判斷9.Disposal of contaminated waste 污染廢棄物處理一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整 WHO good practices for pharmaceutical microbiology laboratories (GPML)10.Quality assurance of results and quality control of performance 檢測結(jié)果質(zhì)量保證和檢測過程質(zhì)量

12、控制11.Testing procedures 檢測方法12.Test reports 檢測報告（原始記錄） ICH 人用藥注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會人用藥注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會 歐盟、美國和日本三方的藥品管理部門和制藥企業(yè)協(xié)會1990年發(fā)起 三方的制藥產(chǎn)品占世界市場份額的70%80%一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整 ICH工作內(nèi)容工作內(nèi)容協(xié)調(diào)質(zhì)量（Q)、安全（S）、療效（E）的技術(shù)要求。建立統(tǒng)一的質(zhì)量技術(shù)要求：質(zhì)量控制、檢驗技術(shù)、檢驗標準等；減少國際貿(mào)易的障礙；統(tǒng)一醫(yī)藥產(chǎn)品進入國際市場的技術(shù)門檻，促進國際間藥品在同一技術(shù)平臺的公平競爭；ICH 4QB （藥典互認）

13、附錄（藥典互認）附錄4A、4B、4C已經(jīng)得出結(jié)論：美國、歐已經(jīng)得出結(jié)論：美國、歐盟和日本藥典中的盟和日本藥典中的微生物限度檢驗方法微生物限度檢驗方法協(xié)調(diào)統(tǒng)一！協(xié)調(diào)統(tǒng)一！一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整 PDG（Pharmacopoeial Discussion Group) 藥典討論組 1989年，由歐洲藥品質(zhì)量管理局。美國藥典委員會和日本藥局方三方代表組成了PDG； 宗旨：使三方藥典的科技水平保持一致，服務(wù)ICH，保證公眾用藥安全； 角色：ICH的重要技術(shù)支撐一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整 各國藥典對微生物限度檢查協(xié)調(diào)的內(nèi)容及

14、結(jié)構(gòu)示例各國藥典對微生物限度檢查協(xié)調(diào)的內(nèi)容及結(jié)構(gòu)示例 USP36 Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests (非無菌產(chǎn)品的微生物檢查：微生物計數(shù)法) Microbiological Examination of Nonsterile Product: Tests for specified microorganisms (非無菌產(chǎn)品的微生物檢查：控制菌檢查法) Microbiological Attributes of Nonsterile Pharmaceutical Pro

15、duct (非無菌產(chǎn)品的微生物限度標準)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整 各國藥典對微生物限度檢查協(xié)調(diào)的內(nèi)容及結(jié)構(gòu)示例各國藥典對微生物限度檢查協(xié)調(diào)的內(nèi)容及結(jié)構(gòu)示例 EP7.0 Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests (非無菌產(chǎn)品的微生物檢查：微生物計數(shù)法) Microbiological Examination of Nonsterile Product: Tests for specified microorganisms (非無菌產(chǎn)品的微生

16、物檢查：控制菌檢查法) Microbiological Attributes of Nonsterile Pharmaceutical Product (非無菌產(chǎn)品的微生物限度標準)一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整中國藥典中國藥典重大事項重大事項1995年版首次收載微生物限度檢查法，沿用86版&89版衛(wèi)生部部頒標準2000年版首次收載微生物限度檢查標準2005年版首次收載方法驗證，標準分列在三部藥典，對含生藥原粉制劑增加大腸菌群的控制，用于深部組織的制劑增加厭氧菌檢查。PDG完成微生物檢查的方法&標準統(tǒng)一2010年版首次收載培養(yǎng)基適用性檢查，眼用

17、制劑修訂為無菌要求，陰道&尿道給藥制劑增加白色念珠菌的控制。ICH成員國收載協(xié)調(diào)方法&標準2010年修訂版基本與ICH微生物檢查法接軌，涵蓋標準和方法的整體變化一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整 中國藥典與中國藥典與ICH接軌接軌 原因：中國雖然不是ICH成員國，但與國外制藥行業(yè)交往日益增多，且中國想進入國際市場，藥品檢驗方法和標準的統(tǒng)一勢在必行，微生物檢查法亦如此。 國內(nèi)現(xiàn)狀已具備與ICH接軌的技術(shù)基礎(chǔ)： 2005年版Chp.收載方法 驗證； 2010版Chp.收載培養(yǎng)基適用性要求。一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整一、中國藥典微生物檢查體系的調(diào)整

18、 檢驗結(jié)果判斷：結(jié)果 過程控制（注重環(huán)節(jié)）二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念環(huán)境保證培養(yǎng)基保證無菌性檢查靈敏度檢查過程控制SOP操作方法驗證有效的方法有效的結(jié)果可靠的結(jié)論結(jié)果判斷 過程監(jiān)控是溯源的基礎(chǔ)二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念廠房與設(shè)施廠房與設(shè)施物料物料驗證驗證質(zhì)量管理質(zhì)量管理機構(gòu)與人員機構(gòu)與人員設(shè)備設(shè)備衛(wèi)生管理衛(wèi)生管理生產(chǎn)管理生產(chǎn)管理空氣凈化技術(shù) 生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生 公用工程衛(wèi)生原料衛(wèi)生 輔料衛(wèi)生 包裝材料衛(wèi)生清潔驗證 滅菌驗證 設(shè)備驗證工藝衛(wèi)生監(jiān)測 環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測 個人衛(wèi)生監(jiān)測 體檢管理 生產(chǎn)人員衛(wèi)生衛(wèi)生培訓(xùn) 工藝用水衛(wèi)生 設(shè)備清潔 清潔規(guī)程 衛(wèi)生管理制度 防止污染與混

19、淆的措施微生物控制微生物控制 MDD系統(tǒng)系統(tǒng) 實驗室檢驗結(jié)果偏離規(guī)定標準一般屬于OOS情況，但是，涉及微生物相關(guān)檢驗項目的偏差處理，F(xiàn)DA的OOS指南已經(jīng)明確說明并不適用。 MDD是英文Microbial Data Deviations的簡寫，意思就是實驗室微生物相關(guān)檢驗數(shù)據(jù)偏差。由于微生物相關(guān)檢驗項目固有的復(fù)雜性，F(xiàn)DA的OOS指南避開了這個話題。二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念 USP專論Best Microbiological Practice第三部分關(guān)于分析結(jié)果的解釋，列出了涉及微生物數(shù)據(jù)偏差（MDD）的疑難問題。二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念 微生物是無處不

20、在的微生物是無處不在的，也是污染的主要來源。 分析人員污染分析人員污染微生物檢驗項目的分析結(jié)果也是可能的。 在不同樣品之間或者樣品不同部位之間，微生物可能沒有均勻分布沒有均勻分布。 微生物檢驗項目具有顯著的內(nèi)在變異性顯著的內(nèi)在變異性。 微生物數(shù)據(jù)有時不容易理解微生物數(shù)據(jù)有時不容易理解 與人類相關(guān)的微生物群落被廣泛用于許多測試。 人員污染是始終被關(guān)心的問題。 樣品或環(huán)境中的微生物并非均勻分布。 微生物檢測可變范圍大：可能在0.5lg左右 因此，得到的結(jié)果與期望會有差異因此，得到的結(jié)果與期望會有差異二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念 例如 重復(fù)性誤差：7.5%（RSD） 方法局限性 計數(shù)

21、偏差：2530cfu/皿，RSD為20%18% （USP34) 稱量誤差： 取 10g 9.910.1g 1% 容量誤差： 取1ml 1% 培養(yǎng)基差異： 10% 二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念 MDD調(diào)查需要涉及的范圍調(diào)查需要涉及的范圍 MDD涉及的微生物類別的鑒別； 實驗室樣品和相關(guān)材料； 實驗室相關(guān)記錄； 生產(chǎn)環(huán)境的監(jiān)控 人員培訓(xùn)和健康情況； 產(chǎn)品滅菌前的生物負荷； 批生產(chǎn)記錄和輔助記錄； 生產(chǎn)歷史（包括培養(yǎng)基灌裝歷史）二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念 原料藥來源和質(zhì)量； 輔料來源和質(zhì)量（包括工藝用水和工藝用氣）； 生產(chǎn)現(xiàn)場。二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢

22、驗理念 實驗室偏差調(diào)查示意圖 二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念儀器儀器/ /設(shè)備設(shè)備試管失誤疲憊人員失誤人員失誤滅菌釜操作培訓(xùn)培養(yǎng)基污染培養(yǎng)基污染更換供應(yīng)商HEPA泄漏無合格證環(huán)境條件環(huán)境條件無菌服破裂檢驗結(jié)果超標檢驗結(jié)果超標 MDD調(diào)查結(jié)果分析和評價 實驗室分析錯誤 修訂完善的SOP、校驗儀器、更換物料或消毒環(huán)境等 分析方法變更 制定替代檢驗方法SOP用于解決不確定的結(jié)果 批次產(chǎn)品失敗 對于不合格產(chǎn)品按規(guī)程處理 二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念 MDD調(diào)查結(jié)果分析和評價 人員或者環(huán)境因素影響 啟動CAPA糾偏措施 沒有發(fā)現(xiàn)根

23、本原因 1）基于MDD發(fā)生的可能原因采取CAPA措施； 2）基于風險分析，對相關(guān)批次產(chǎn)品做出最后處理決定 新的檢驗環(huán)境 1）ICH要求：適宜的潔凈度環(huán)境； 2）2010版GPM環(huán)境分級以A（百級）、B（千級）、C（萬級）、D（十萬級）定義； 3）2010版Chp.修訂要求：微生物限度檢查應(yīng)在受控潔凈環(huán)境下的局部潔凈度不低于B級的單向流空氣區(qū)域（D+B）； 二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念 4）發(fā)展趨勢：檢驗過程及環(huán)境，既要求防止樣品受污染，又要防止對環(huán)境和人員造成危害。合理劃分活動區(qū)域以提高微生物實驗室操作的安全性和可靠性。二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念 生物安全 感

24、染性微生物的危險度等級 危險度1級（無或極低的個體和群體危害） 危險度危險度2 2級（個體危害中等，群體危害低）級（個體危害中等，群體危害低） 病原體能夠?qū)θ嘶騽游镏虏。珜嶒炇夜ぷ魅藛T、社區(qū)、環(huán)境病原體能夠?qū)θ嘶騽游镏虏。珜嶒炇夜ぷ魅藛T、社區(qū)、環(huán)境不易導(dǎo)致嚴重危害。實驗室暴露也許會引起嚴重感染，但對感染不易導(dǎo)致嚴重危害。實驗室暴露也許會引起嚴重感染，但對感染有有效預(yù)防和治療措施，疾病傳播危害有限。有有效預(yù)防和治療措施，疾病傳播危害有限。二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念 生物安全 感染性微生物的危險度等級 危險度3級（個體危害高，群體危害低） 危險度4級（個體和群體危害均高） 相應(yīng)的生物安全水平二、二、新的微生物檢驗理念新的微生物檢驗理念危險度等級生物安全水平實驗室類型實驗室操作安全設(shè)施2級基礎(chǔ)實驗室二級生物安全水平初級衛(wèi)生服務(wù)