生物制藥復(fù)習(xí)

1、生物技術(shù)制藥總復(fù)習(xí)（11級制藥工程）一、 名詞解釋1. 生物技術(shù):是以生命科學(xué)為基礎(chǔ)，利用生物體的特性和功能，設(shè)計構(gòu)建具有預(yù)期性狀的新物種或新品系，并與工程相結(jié)合，利用這樣的新物種（或品系）進(jìn)行加工生產(chǎn)，為社會提供商品和服務(wù)的一個綜合性技術(shù)體系。2. 生物技術(shù)制藥: 是指采用現(xiàn)代生物技術(shù)可以人為的創(chuàng)造一些條件，借助某些微生物、植物或動物來生產(chǎn)所需的醫(yī)用藥品。3. 生物技術(shù)藥物:是指采用DNA重組技術(shù)或其他生物新技術(shù)研制的蛋白質(zhì)或核酸類藥物。4. 細(xì)胞工程:以細(xì)胞為單位，按照人們的意志，應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等理論和技術(shù)，有目的地進(jìn)行精心設(shè)計，精心操作，使細(xì)胞的某些遺傳特性發(fā)生改變，從而達(dá)到

2、改良或產(chǎn)生新品種的目的，以及使細(xì)胞增加或重新獲得產(chǎn)生某種特定產(chǎn)物的能力，從而在離體條件下進(jìn)行大量培養(yǎng)、增殖，并提取出對人類有用的產(chǎn)品。5. cDNA文庫: cDNA文庫是指某種生物基因組轉(zhuǎn)錄的全部mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的cDNA片段分別與克隆載體重組，并將其引入到相應(yīng)的宿主細(xì)胞中繁殖和擴(kuò)增，理論上此群體就包含有該物種的全部mRNA信息，稱該生物基因組的cDNA文庫。6. 限制酶 : 是指限制性核酸內(nèi)切酶，是一類能識別雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列，并對核苷酸之間的磷酸二酯鍵進(jìn)行切割的核酸內(nèi)切酶。7. PCR :是指聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，由變性、退火、延伸三個基本反應(yīng)組成。8. 模擬酶：在分子水平上模

3、擬酶活性部位的形狀、大小及其微環(huán)境等結(jié)構(gòu)特征，以及酶的作用機(jī)制和立體化學(xué)等特性，用各種方法人為制造的具有酶性質(zhì)的催化劑。9. 抗體酶：抗體酶是抗體的高度選擇性和酶的高效催化能力巧妙結(jié)合的產(chǎn)物，本質(zhì)上是一類具有催化活力的免疫球蛋白，在其可變區(qū)賦予了酶的屬性。 10. 外植體：外植體是指用于植物組織（細(xì)胞）培養(yǎng)的器官或組織（的切段），植物的各部位如根、莖、葉、花、果、穗、胚珠、胚乳、花藥和花粉等均可作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)。11. 微生物和植物的原生質(zhì)體：是指去除細(xì)胞壁的微生物和植物細(xì)胞。12. 免疫：機(jī)體一種生理功能，機(jī)體依靠這一功能識別“自已”和“非已”成分，從而破壞與排拆進(jìn)入機(jī)體的抗原物質(zhì)或機(jī)

4、體產(chǎn)生的異構(gòu)物質(zhì) 。13. 抗原：凡能激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫或細(xì)胞免疫，并能與免疫應(yīng)答的產(chǎn)物抗體和致敏淋巴細(xì)胞相結(jié)合的物質(zhì)。對人有重要性的抗原包括微生物、寄生蟲、異物血清、異型紅細(xì)胞、異體組織等。14. 抗體：機(jī)體內(nèi)B淋巴細(xì)胞在抗原剌激下所合成的具特異性免疫功能的球蛋白；抗體與相應(yīng)抗原能發(fā)生特異性結(jié)合，從而促進(jìn)白細(xì)胞的吞噬作用，將抗原清除，或使微生物失去致病性。15. 單克隆抗體：由純一的單克隆細(xì)胞系產(chǎn)生的，結(jié)構(gòu)和特異性完全相同的高純度抗體。這種抗體是針對一個抗原決定簇的抗體，又是單一的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的，故稱為單克隆抗體。16. 基因：指存在于細(xì)胞內(nèi)有自體繁殖能力的遺傳單位，一個基因是核酸或核蛋

5、白的一個微小片斷，主要功能是編碼蛋白質(zhì)，是決定蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。17. 染色體：細(xì)胞有絲分裂時出現(xiàn)的，易被堿性染料著色的絲狀或棒狀小體，由細(xì)長的染色質(zhì)絲盤旋折疊而成，由核酸和蛋白質(zhì)組成，是遺傳的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。 18. 克?。╟lone）：即無性繁殖系19. 質(zhì)粒：原指一切染色體外的遺傳因子，但現(xiàn)在習(xí)慣上專指細(xì)菌等微生物細(xì)胞中的染色體外的遺傳因子，這些遺傳因子是能獨立復(fù)制的共價閉合環(huán)狀脫氧核糖核酸分子。20. 原核生物：細(xì)胞核無核膜，能進(jìn)行有絲分裂，細(xì)胞質(zhì)中存在稱為核區(qū)的裸露DNA的原始單細(xì)胞生物。如細(xì)菌、放線菌等。21. 真核生物：細(xì)胞核具有核膜，能進(jìn)行有絲分裂，細(xì)胞質(zhì)中存在線粒體或同時存在葉

6、綠體多種細(xì)胞器的生物。 22. 載體（Vector）系一種DNA片段，它可以在宿主細(xì)胞內(nèi)引致自身復(fù)制，其他DNA分子也可與之連接擴(kuò)增。很多載體是細(xì)菌質(zhì)粒，在某些情況下，一種質(zhì)粒在導(dǎo)入細(xì)胞后可與宿主細(xì)胞染色體整合，并在宿主細(xì)胞生長和繁殖過程中保持其模式。23. 細(xì)胞株（cell strains）系傳代復(fù)制能力有限的細(xì)胞群。24. 細(xì)胞庫：細(xì)胞系來源于經(jīng)充分鑒定并證明無外源因子的單一來源的均質(zhì)細(xì)胞。25. 抗原性：指在適宜的體外免疫學(xué)試驗中，某物質(zhì)和相應(yīng)抗體反應(yīng)的能力，如絮狀反應(yīng)陽性、凝膠免疫反應(yīng)陽性或酶聯(lián)免疫測定陽性等即證明某物質(zhì)具有抗原性。26. 免疫原性：指某一制品接種人體后誘生免疫應(yīng)答的能

7、力。接種疫苗后，此種反應(yīng)導(dǎo)致出現(xiàn)理想的特異性體液免疫（由B細(xì)胞產(chǎn)生抗體）或細(xì)胞免疫應(yīng)答（各種T細(xì)胞增殖）或二者兼有之，一般情況下使被接種個體獲得保護(hù)，以免受相應(yīng)傳染原的感染。27. 藥品：是指用于預(yù)防、治療、診斷人的疾病，有目的地調(diào)節(jié)人的生理機(jī)能并規(guī)定有適應(yīng)癥或者功能主治、用法和用量的物質(zhì)，包括中藥材、中藥飲片、中成藥、化學(xué)原料藥及其制劑、抗生素、生化藥品、放射性藥品、血清、疫苗、血液制品和診斷藥品等。（藥品管理法）28. 藥品制造：藥品、生物制品生產(chǎn)過程中的全部操作步驟。29. 生物制品：生物制品是以微生物、細(xì)胞、動物或人源組織和體液等為原料，應(yīng)用傳統(tǒng)技術(shù)或現(xiàn)代生物技術(shù)制成，用于人類疾病的預(yù)

8、防治療和診斷。人用生物制品包括：細(xì)菌類疫苗（含類毒素）、病毒類疫苗、抗毒素及抗血清、血液制品、細(xì)胞因子、生長因子、酶、體內(nèi)及體外診斷制品，及其他生物活性制劑，如毒素、抗原、變態(tài)反應(yīng)原、單克隆抗體、抗原抗體復(fù)合物，免疫調(diào)節(jié)劑及微生態(tài)制劑等。 30. 細(xì)胞融合：是指在自然條件下或用人工方法使兩個或兩個以上的細(xì)胞合并形成一個雙核或多核細(xì)胞的過程。31. 批：在同一生產(chǎn)周期中，同一批原料、同一方法生產(chǎn)出來的一定數(shù)量的一批制品，在規(guī)定限度內(nèi)，它具有同一性質(zhì)（均一性）和同質(zhì)量。32. 失效期：指在特定條件下保存的制品，到此日期后一般已不可能繼續(xù)符合相應(yīng)規(guī)程的各項要求，特別是效價要求，故不能繼續(xù)使用。失效日

9、期應(yīng)注明在成品容器上。并按國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門許可的有效期確定天數(shù)、月數(shù)或年數(shù)。33. 有效期：指由國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門許可用以簽發(fā)制品供臨床使用的最大有效期限。該有效量根據(jù)在產(chǎn)品開發(fā)過程中進(jìn)行穩(wěn)定性研究獲得的貯存壽命而確定。34. 繼代培養(yǎng)：由最初的外植體的組織，培養(yǎng)一代時間而稱為第一代培養(yǎng)。連續(xù)多代的培養(yǎng)即為繼代培養(yǎng)。35. 原料：生物制品生產(chǎn)過程中使用的所有生物材料和化學(xué)材料，不包括輔料36. 輔料：生物制品在制過程中所使用的輔助材料，如佐劑、穩(wěn)定劑、賦形劑等。37. 包裝材料：指成品內(nèi)外包裝物料、標(biāo)簽、防偽標(biāo)志和藥品說明書38. 原始細(xì)胞庫（Master Cell Bank，MCB

10、）：源自單一組織或細(xì)胞，經(jīng)過充分鑒定的一定量的人、動物或其他來源的細(xì)胞懸液分裝于容器內(nèi)，組成應(yīng)均一，凍存于130或以下，用于制備主細(xì)胞庫，由本細(xì)胞庫移出的細(xì)胞無論開瓶與否，均不得再返回貯存。對二倍體細(xì)胞應(yīng)該是群體倍增盡可能低的細(xì)胞建立的細(xì)胞庫。從原始細(xì)胞庫中取一定數(shù)量容器的細(xì)胞制備生產(chǎn)用細(xì)胞庫或稱工作細(xì)胞庫貯存于的細(xì)胞應(yīng)該是從來的，或從單一安瓿來的，或從多個安瓿在融化即刻混合在一起的，然后經(jīng)培養(yǎng)擴(kuò)增達(dá)一定數(shù)量后，在分裝貯存形成的細(xì)胞庫。第一章 緒論1. 生物技術(shù):是以生命科學(xué)為基礎(chǔ)，利用生物體、生物組織、細(xì)胞及其組分的特性和功能，設(shè)計構(gòu)建具有預(yù)期性狀的新物種或新品系，并與工程相結(jié)合，利用這樣的

11、新物種（或品系）進(jìn)行加工生產(chǎn)，為社會提供商品和服務(wù)的一個綜合性技術(shù)體系。2. 生物技術(shù)制藥: 是指采用現(xiàn)代生物技術(shù)可以人為的創(chuàng)造一些條件，借助某些微生物、植物或動物來生產(chǎn)所需的醫(yī)用藥品。3. 生物技術(shù)制藥的特點:高技術(shù)、高投入、長周期、高風(fēng)險、高收益。4. 生物技術(shù)藥物：是指采用DNA重組技術(shù)或其他生物新技術(shù)研制的蛋白質(zhì)或核酸類藥物。5. 生物技術(shù)藥物的特性：分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜穩(wěn)定性差基因穩(wěn)定性不易保持體內(nèi)半衰期短具有免疫原性具有種屬特異性檢驗的特殊性多效性和網(wǎng)絡(luò)效應(yīng)具有受體效應(yīng)療針對性強(qiáng)、療效高。6. 藥品：是指用于預(yù)防、治療、診斷人的疾病，有目的地調(diào)節(jié)人的生理機(jī)能并規(guī)定有適應(yīng)癥或者功能主治、用法

12、和用量的物質(zhì)，包括中藥材、中藥飲片、中成藥、化學(xué)原料藥及其制劑、抗生素、生化藥品、放射性藥品、診斷藥品、血清、血液制品和疫苗等。7. 失效期：指在特定條件下保存的制品，到此日期后一般已不可能繼續(xù)符合相應(yīng)規(guī)程的各項要求，特別是效價要求，故不能繼續(xù)使用。失效日期應(yīng)注明在成品容器上。并按國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門許可的有效期確定天數(shù)、月數(shù)或年數(shù)。8. 有效期：指由國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門許可用以簽發(fā)制品供臨床使用的最大有效期限。該有效量根據(jù)在產(chǎn)品開發(fā)過程中進(jìn)行穩(wěn)定性研究獲得的貯存壽命而確定。9. 批：在同一生產(chǎn)周期中，同一批原料、同一方法生產(chǎn)出來的一定數(shù)量的一批制品，在規(guī)定限度內(nèi)，它具有同一性質(zhì)（均一性）

13、和同質(zhì)量。10. GMP的主要內(nèi)容和特點有哪些?1) GMP的總體內(nèi)容包括機(jī)構(gòu)與人員、廠房和設(shè)施、設(shè)備、衛(wèi)生管理、文件管理、物料控制、生產(chǎn)控制、質(zhì)量控制、貯存和銷售管理等方面內(nèi)容；2) 從專業(yè)化管理角度，GMP可以分為質(zhì)量控制和質(zhì)量保證系統(tǒng)；3) 從硬件和軟件系統(tǒng)的角度，GMP可分為硬件和軟件系統(tǒng)。4) 其特點有：時效性、原則性、多樣性、基礎(chǔ)性、層次性。11. 實施GMP的重點：a) 要全面、正確地理解和認(rèn)識GMP；b) 建立合適的廠房設(shè)施，引進(jìn)先進(jìn)而實用的工藝設(shè)備；c) 逐步完善軟件管理；d) 實施價值工程是實施GMP的關(guān)鍵。12. 簡述新藥研究和開發(fā)的主要過程及內(nèi)容：a) 確定研究計劃：要

14、綜合考慮醫(yī)療、市場、化學(xué)的評估結(jié)果，文獻(xiàn)和專利的檢索、結(jié)構(gòu)的選擇、合成的前景等因素。b) 準(zhǔn)備化合物：研究文獻(xiàn)，合成或分離化合物、結(jié)構(gòu)鑒定、標(biāo)準(zhǔn)化、專利申請、對研究目標(biāo)的復(fù)核等。c) 藥理篩選：a) 藥理學(xué)：研究藥物的治療作用，合理用藥，減少毒副反應(yīng)。b) 藥效學(xué)：研究藥物對機(jī)體的有益的治療效應(yīng)。c) 毒理學(xué)：研究藥物對機(jī)體的有害的不良效應(yīng)。d) 化學(xué)試驗：活性成分分析.e) 臨床前I期：進(jìn)一步藥理研究包括毒性(2種動物)及活性成分的穩(wěn)定性研究。f) 臨床前II期：在前研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步藥理研究包括急性、亞急性、慢性毒性研究(2種動物), 畸胎學(xué)研究,藥物動力學(xué)(動物體內(nèi)的吸收和排泄),劑型的

15、研究與開發(fā)，包裝與保存期的研究。g) I 期臨床試驗：I期為新藥在人體內(nèi)初試，內(nèi)容為藥物耐受性試驗與藥代動力學(xué)研究。其目的是在健康志愿者中研究人體對藥物的耐受程度并通過藥代動力學(xué)研究，了解藥物在人體內(nèi)的吸收、分布、消除的規(guī)律，為新藥期臨床試驗提供安全有效的合理試驗方案?？疾殳熜?、適應(yīng)癥、不良反應(yīng)。提交研究報告，審核通過后進(jìn)入期臨床試驗。h) 期臨床試驗：進(jìn)一步的人體藥理試驗，包括計劃并開始慢性毒性實驗，致癌性和對生殖與后代的影響，藥物動力學(xué)研究（不同種動物），確定試驗藥品是否安全有效；通過試驗確定適應(yīng)癥；找出最佳的治療方案；對本品有何不良反應(yīng)及危險性作出評價并提供防治方法。藥物的分析檢定，保存

16、，臨床藥品的制備。此期為主要臨床試驗時期,分2個階段進(jìn)行。期臨床試驗應(yīng)符合“四性”原則。i) III期臨床：為新藥上市后的臨床試驗，即在新藥上市后，臨床廣泛使用的最初一段時間內(nèi)，對新藥的藥效、適應(yīng)癥、不良反應(yīng)、合理治療方案等作進(jìn)一步擴(kuò)大臨床試驗，以期對新藥的臨床應(yīng)用價值作出進(jìn)一步的評價，并根據(jù)進(jìn)一步了解的療效、適應(yīng)癥與不良反應(yīng)情況，指導(dǎo)臨床合理用藥。j) 大約3-5年后，注冊申請上市13. 什么是臨床試驗的四原則？a) 代表性：樣品的抽樣應(yīng)符合總體規(guī)律的原則。b) 重復(fù)性：試驗結(jié)果正確可靠、經(jīng)得起反復(fù)驗證。c) 隨機(jī)性：試驗中二組病人的分配是均勻的，不隨主觀意志為轉(zhuǎn)移的。如在隨機(jī)對照試驗中，普

17、遍采用盲法試驗。d) 合理性：設(shè)計既要符合專業(yè)要求與統(tǒng)計學(xué)要求，又要切實可行。14. 制藥企業(yè)實施GMP的三要素分別為：硬件、軟件、人員第二章 基因工程制藥1. 原核生物：是指細(xì)胞核無核膜，能進(jìn)行有絲分裂，細(xì)胞質(zhì)中存在稱為核區(qū)的裸露DNA的原始單細(xì)胞生物。如細(xì)菌、放線菌等。2. 真核生物：細(xì)胞核具有核膜，能進(jìn)行有絲分裂，細(xì)胞質(zhì)中存在線粒體或同時存在葉綠體多種細(xì)胞器的生物。 3. 基因：指存在于細(xì)胞內(nèi)有自體繁殖能力的遺傳單位，一個基因是核酸或核蛋白的一個微小片斷，主要功能是編碼蛋白質(zhì)，決定蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。4. 染色體：細(xì)胞有絲分裂時出現(xiàn)的，易被堿性染料著色的絲狀或棒狀小體，由細(xì)長的染色質(zhì)絲盤旋

18、折疊而成，由核酸和蛋白質(zhì)組成，是遺傳的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。 5. 克?。╟lone）：即無性繁殖系6. 質(zhì)粒：原指一切染色體外的遺傳因子，但現(xiàn)在習(xí)慣上專指細(xì)菌等微生物細(xì)胞中的染色體外的遺傳因子，這些遺傳因子是能獨立復(fù)制的共價閉合環(huán)狀脫氧核糖核酸分子。7. 載體：系一種DNA片段，它可以在宿主細(xì)胞內(nèi)自身復(fù)制，其他DNA分子也可與之連接擴(kuò)增。很多載體是細(xì)菌質(zhì)粒，在某些情況下，一種質(zhì)粒在導(dǎo)入細(xì)胞后可與宿主細(xì)胞染色體整合，并在宿主細(xì)胞生長和繁殖過程中保持其模式。8. 反轉(zhuǎn)錄法制取目的基因的主要過程。答：mRNA的純化cDNA第一鏈的合成cDNA第二鏈的合成cDNA克隆重組體導(dǎo)入宿主細(xì)胞 cDNA文庫的鑒定目

19、的cDNA克隆的分離和鑒定。9. 在大腸桿菌表達(dá)目的基因，對載體有哪些要求？b) 能獨立地復(fù)制；c) 有位于啟動子序列后的靈活的克隆位點和方便的篩選標(biāo)記；d) 有很強(qiáng)的啟動子能為大腸桿菌RNA聚合酶所識別。 e) 有阻遏子，使啟動子受控，可以人為選擇啟動子起始轉(zhuǎn)錄m-RNA的時機(jī)；f) 有很強(qiáng)的終止子，產(chǎn)生m-RNA較穩(wěn)定；g) 具有翻譯的起始信號，即起始密碼AUG和SD序列。10. 有哪些因素影響目的基因在大腸桿菌中的表達(dá)？1) 外源基因的數(shù)量 ：高拷貝的表達(dá)質(zhì)粒會導(dǎo)致外源基因拷貝數(shù)的增加，對提高外源基因的總體表達(dá)水平非常有利2) 外源基因的表達(dá)效率a) 啟動子的強(qiáng)弱：必須把真核基因編碼區(qū)置

20、于大腸桿菌RNA聚合酶能識別的強(qiáng)啟動子控制下；b) 核糖體結(jié)合位點的有效性：消除在結(jié)合位點及其附近的潛在二級結(jié)構(gòu)；c) SD序列和ATG之間的距離是表達(dá)非融合蛋白的關(guān)鍵；d) 密碼子的組成:應(yīng)選擇使用大腸桿菌偏愛的密碼子。3) 表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性：a) 組建融合基因產(chǎn)生融合蛋白 b) 利用大腸桿菌的信號肽或某些真核多肽中自身的信號肽，把真核基因產(chǎn)物搬動到胞漿周質(zhì)的空隙中。不易被細(xì)菌酶類所降解。c) 采用位點特異性突變的方法，改變真核蛋白質(zhì)中二硫鍵的位置，從而增加蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。d) 選用蛋白酶缺陷型菌株，減少表達(dá)產(chǎn)物的降解。4) 細(xì)胞的代謝負(fù)荷:減輕宿主細(xì)胞的代謝負(fù)荷，提高外源基因的表達(dá)水平。5

21、) 工程菌的培養(yǎng)條件：優(yōu)化基因工程菌的培養(yǎng)條件，提高基因表達(dá)水平。11. 質(zhì)粒不穩(wěn)定分哪兩類，如何解決質(zhì)粒不穩(wěn)定性？1) 質(zhì)粒的不穩(wěn)定性：分裂不穩(wěn)定、結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。2) 提高質(zhì)粒穩(wěn)定性的方法：A. 選擇合適的宿主菌B. 選擇合適的載體C. 選擇壓力D. 分階段控制培養(yǎng)E. 控制培養(yǎng)條件F. 固定化12.影響基因工程菌發(fā)酵的因素有哪些？如何控制發(fā)酵的各種參數(shù)？1) 影響因素主要有：培養(yǎng)基、接種量、溫度、溶解氧、誘導(dǎo)時機(jī)、誘導(dǎo)表達(dá)程序、pH的影響。2) 溫度：利用自動控制或手動調(diào)整的閥門，將冷卻水通入發(fā)酵罐的夾層或蛇形管中，通過熱交換來降溫，保持恒溫發(fā)酵。3) pH：a) 使發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎(chǔ)配方有個

22、適當(dāng)?shù)呐浔龋拱l(fā)酵過程中的PH變化在合適的范圍內(nèi)（分批發(fā)酵） b) 在發(fā)酵過程中直接加酸或堿和補(bǔ)料的方式來控制。4) 溶氧：c) 在供氧方面，主要是設(shè)法提高氧傳遞的推動力和液相體積氧傳遞系數(shù)值，如調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速或通氣速率來控制供氧。d) 在需氧方面，可以控制菌的比生長速率比臨界點略高一點的水平，達(dá)到最適濃度。e) 調(diào)節(jié)溫度（降低培養(yǎng)溫度可以提高溶氧濃度）、液化培養(yǎng)基、中間補(bǔ)水、添加表面活性劑。5) 攪拌：6) 進(jìn)出液流量13.什么是高密度發(fā)酵？影響高密度發(fā)酵的因素有哪些？可采取哪些方法來實現(xiàn)高密度發(fā)酵？1) 高密度發(fā)酵是指培養(yǎng)液中工程菌的菌體濃度在50gDCW/L以上，理論上的最高值可達(dá)200g

23、DCW/L.2) 影響高密度發(fā)酵的因素有:f) 培養(yǎng)基:需投入幾倍于生物量的物質(zhì)，需要進(jìn)行優(yōu)化，以滿足細(xì)菌大量繁殖和外源蛋白表達(dá)對基質(zhì)中的營養(yǎng)物質(zhì)的選擇和配比的需要。g) 溶氧濃度：維持較高濃度的溶氧水平，不僅有利于菌體的生長，而且有利于外源蛋白的表達(dá)。h) pH：在發(fā)酵工程中，及時調(diào)節(jié)pH使其保持于細(xì)菌的最適pH范圍。i) 溫度：培養(yǎng)溫度是影響細(xì)菌生長和調(diào)控細(xì)胞代謝的重要因素。較高的溫度有利于細(xì)菌生長。j) 代謝副產(chǎn)物：為降低培養(yǎng)過程中的代謝副產(chǎn)物額積累，可在保持高溶氧的同時，采用流加補(bǔ)料的措施，或保持適當(dāng)?shù)谋壬L速率。此外，在培養(yǎng)基中添加某些氨基酸（甘氨酸，甲硫氨酸），也可以減輕乙酸的抑制

24、作用。3）可采取以下方法來實現(xiàn)高密度發(fā)酵：1、發(fā)酵條件的改進(jìn)a) 培養(yǎng)基的選擇：選擇容易被工程菌利用的營養(yǎng)物質(zhì)，選用6g/L的甘油作為培養(yǎng)基的碳源，各組分濃度比普通培養(yǎng)基高23倍。b) 建立流加式培養(yǎng)方式c) 提高供氧能力2、構(gòu)建出產(chǎn)乙酸能力低的工程化宿主菌（1）阻斷乙酸產(chǎn)生的主要途徑（2）對碳代謝流進(jìn)行分流（3）限制進(jìn)入糖酵解途徑的碳代謝流（4）引入血紅蛋白基因3、構(gòu)建蛋白水解酶活力低的工程菌 14.離子交換層析、凝膠過濾層析、親和層析的工作原理和基本操作？6) 離子交換層析基本原理：離子交換層析介質(zhì)常稱為離子交換劑。離子交換劑由載體、活性基團(tuán)、平衡離子三部分組成。依據(jù)流動相中組分離子與交換

25、劑上平衡離子進(jìn)行可逆交換時的結(jié)合力大小的差別而進(jìn)行分離的一種層析方法。當(dāng)溶液中存在著A、B兩種或兩種以上的離子，并通過離子交換層析柱時，原來吸附在離子交換介質(zhì)上的離子與溶液中高濃度的A、B離子發(fā)生交換作用，脫離離子交換介質(zhì)，游離在流動相中，并隨流動相流出來。由于A、B兩種離子在同一溶液中的解離度不同，它們所帶的凈電荷有差異，因此兩者在層析柱內(nèi)的遷移速度不同。從上樣起始點至A、B兩離子的層析峰間的距離在加大，最終完全分離。選擇合適的洗脫液和洗脫方式完成分離。離子交換層析基本操作：a) 離子交換劑的選擇：陰陽離子交換劑的選擇、強(qiáng)弱離子交換劑的選擇、不同離子型交換劑的選擇、不同基質(zhì)離子交換劑的選擇。

26、 b) 離子交換劑的預(yù)處理、再生和保存c) 選擇合適的層析柱d) 平衡緩沖液的選擇e) 上樣f) 洗脫g) 樣品的濃縮與脫鹽7) 凝膠過濾層析的基本原理：以多孔的凝膠填料為固定相，按分子大小對溶液中各組分進(jìn)行分離的液相層析方法。利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來進(jìn)行分離。相對分子質(zhì)量大的生物分子由于不能進(jìn)入或不能完全進(jìn)入凝膠內(nèi)部的網(wǎng)孔，沿著凝膠顆粒間的空隙或大的網(wǎng)狀孔通過，大分子相對于小分子遷移的路徑短，保留值小，所以在層析過程中遷移速度最快，先從柱中流出；反之，分子量小的生物分子保留值大，后從柱中流出。分子量從大到小順序先后流出，達(dá)到分離的目的。凝膠過濾層析的

27、基本操作1. 凝膠的選擇2. 凝膠的處理和保存3. 層析柱的選擇4. 加樣5. 洗脫速度8) 親和層析的基本原理：親和層析就是通過具有親和力的兩個分子中的一個固定在不溶性的基質(zhì)上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對另一個分子進(jìn)行分離純化。配體和基質(zhì)是共價結(jié)合的，構(gòu)成親和層析的固定相。親和層析時首先選擇與待分離的生物大分子有親和力物質(zhì)作為配體，并將配體共價結(jié)合在適當(dāng)?shù)牟蝗苄曰|(zhì)上。將制備的親和吸附劑裝柱平衡，當(dāng)樣品溶液通過親和層析柱時，待分離的生物分子就與配體發(fā)生特異性的結(jié)合，從而留在固定相上；而其它雜質(zhì)不能與配體結(jié)合，仍留在流動相中，并隨洗脫液流出，這樣層析柱中就只有待分離的生物分子。通過適

28、當(dāng)?shù)南疵撘簩⑵鋸呐潴w上洗脫下來，就得到了純化的待分離物質(zhì)。親和層析的基本操作：a) 上樣，選擇適當(dāng)?shù)臈l件，包括上樣流速、緩沖液種類、pH、離子強(qiáng)度及溫度等，以使待分離物質(zhì)能夠充分結(jié)合在親和吸附劑上。b) 洗脫，選用某種能削弱專一性吸附作用的條件（包括：pH值、溫度、離子強(qiáng)度、替代物。適量的氫鍵破壞劑如脲、鹽酸胍等），將目的物洗脫下來。洗脫方法可分為：特異性洗脫和非特異性洗脫。c) 親和吸附劑的再生和保存，一般可用大量洗脫液或較高濃度的鹽溶液洗滌，再用平衡液重新平衡15.簡述干擾素工程菌組建的過程。 提取誘生的白細(xì)胞或成纖維細(xì)胞全RNA，通過寡dt纖維素柱得獲mRNA，經(jīng)過5%-23%蔗糖密度梯

29、度離心提取12S的mRNA，自mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，雙鏈cDNA用末端DNA轉(zhuǎn)移酶接上dT或dG尾，與經(jīng)過pBR322質(zhì)粒DNA的Pstl酶切割加上dA或dC的pBR322質(zhì)粒DNA退火獲得雜交質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌K12，擴(kuò)增雜交質(zhì)粒，篩選抗四環(huán)素但對氨芐青霉素敏感的細(xì)菌克隆，用已知干擾素的DNA片段作為探針挑選富有干擾素CDNA的克隆將干擾素cDNA克隆入表達(dá)載體在大腸干菌中進(jìn)行高效表達(dá)。16. 對由基因重組技術(shù)所獲得的蛋白質(zhì)藥物產(chǎn)品進(jìn)行鑒定時常做哪些項目分析？答：生物活性測定、理化性質(zhì)鑒定、蛋白質(zhì)含量測定、蛋白質(zhì)純度分析、雜質(zhì)檢測、穩(wěn)定性考察、產(chǎn)品一致性的保證第三章 動物細(xì)胞工程制藥1.

30、 細(xì)胞工程:以細(xì)胞為單位，按照人們的意志，應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等理論和技術(shù)，有目的地進(jìn)行精心設(shè)計，精心操作，使細(xì)胞的某些遺傳特性發(fā)生改變，從而達(dá)到改良或產(chǎn)生新品種的目的，以及使細(xì)胞增加或重新獲得產(chǎn)生某種特定產(chǎn)物的能力，從而在離體條件下進(jìn)行大量培養(yǎng)、增殖，并提取出對人類有用的產(chǎn)品。2. 細(xì)胞株（cell strains）系傳代復(fù)制能力有限的細(xì)胞群。3. 細(xì)胞庫：細(xì)胞系來源于經(jīng)充分鑒定并證明無外源因子的單一來源的均質(zhì)細(xì)胞。4. 原始細(xì)胞庫（Master Cell Bank，MCB）：源自單一組織或細(xì)胞，經(jīng)過充分鑒定的一定量的人、動物或其他來源的細(xì)胞懸液分裝于容器內(nèi)，組成應(yīng)均一，凍存于130或

31、以下，用于制備主細(xì)胞庫，由本細(xì)胞庫移出的細(xì)胞無論開瓶與否，均不得再返回貯存。對二倍體細(xì)胞應(yīng)該是群體倍增盡可能低的細(xì)胞建立的細(xì)胞庫。從原始細(xì)胞庫中取一定數(shù)量容器的細(xì)胞制備生產(chǎn)用細(xì)胞庫或稱工作細(xì)胞庫貯存于的細(xì)胞應(yīng)該是從來的，或從單一安瓿來的，或從多個安瓿在融化即刻混合在一起的，然后經(jīng)培養(yǎng)擴(kuò)增達(dá)一定數(shù)量后，在分裝貯存形成的細(xì)胞庫。5. 生產(chǎn)用動物細(xì)胞有哪些種類？它們各具有什么特點？a) 原代細(xì)胞：是直接取自動物組織、器官，經(jīng)過粉碎、消化而獲得的細(xì)胞懸液。用原代細(xì)胞生產(chǎn)生物制品需要大量的動物，費錢費勞力。b) 二倍體細(xì)胞系：原代細(xì)胞經(jīng)過傳代篩選克隆，從多種細(xì)胞成分的組織中，挑選并純化出某種具有一定特征

32、的細(xì)胞株。它具備“正?！奔?xì)胞的特點，即染色體組型仍是2n的核型；具有明顯的貼壁依賴型和接觸抑制的特性；只有有限的增殖能力，一般可連續(xù)傳代培養(yǎng)50代；無致瘤性。c) 轉(zhuǎn)化細(xì)胞系：通過某個轉(zhuǎn)化過程形成的，常由于染色體斷裂變成異倍體，失去正常細(xì)胞特點，而獲得無限增殖能力。轉(zhuǎn)化過程可以是自發(fā)的，和人工的，從腫瘤組織中建立。d) 融合細(xì)胞系：用人工方法使離體的兩個不同的細(xì)胞融合并成一個細(xì)胞，從而培養(yǎng)出一系列有其特性的雜種細(xì)胞和新的物種。e) 重組工程細(xì)胞系：有以上這些細(xì)胞進(jìn)行融合和重組的工程細(xì)胞系。6. 動物細(xì)胞培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基有哪些？1) 天然培養(yǎng)基：在細(xì)胞培養(yǎng)早期階段多采用該類材料做培養(yǎng)基，如血漿凝

33、塊、血清、淋巴液、胚胎浸液以及羊水、腹水等。由于該類材料成分復(fù)雜，組分不穩(wěn)定，來源有限，因此不適合大量培養(yǎng)和生產(chǎn)的需要。2) 合成培養(yǎng)基：主要含氨基酸、維生素、糖類、無機(jī)鹽、核酸前體，氧化還原劑（谷胱甘肽），動物血清；它的優(yōu)點是成分明確，組分穩(wěn)定，可大量生產(chǎn)，3) 無血清培養(yǎng)基：無血清培養(yǎng)基都是在上述的合成培養(yǎng)基中加入不同種類的添加劑所構(gòu)成。7. DNA載體導(dǎo)入動物細(xì)胞有哪幾種常用方法？答：構(gòu)建載體后導(dǎo)入動物細(xì)胞大致有四類方法，融合法（細(xì)胞融合、原生質(zhì)體融合、微細(xì)胞介導(dǎo)、脂質(zhì)體介導(dǎo)）、化學(xué)法（DNA磷酸鈣沉淀法、染色體介導(dǎo)法、DEAE葡聚糖法）、物理法（電穿孔、顯微注射法、基因槍法）、病毒法。

34、其中使用最普遍的是磷酸鈣沉淀法和電穿孔法8.試述動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法有哪些？并加以說明。1) 懸浮培養(yǎng)：細(xì)胞自由地懸浮于培養(yǎng)基內(nèi)生長增殖。大規(guī)模培養(yǎng)可采用通氣攪拌罐式和氣升式生物反應(yīng)器。對設(shè)備的要求簡單，培養(yǎng)條件比較均一，傳質(zhì)和傳氧較好，容易擴(kuò)大培養(yǎng)規(guī)模。不足之處是由于細(xì)胞體積小，較難采用灌流培養(yǎng)，因此懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞密度較低。許多動物細(xì)胞屬于貼壁依賴性，不能進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。2) 貼壁培養(yǎng)：細(xì)胞貼附在某種基質(zhì)上生長繁殖的培養(yǎng)方法。它適合于一切貼附依賴性細(xì)胞和兼性貼壁細(xì)胞。優(yōu)點是適用細(xì)胞種類廣，較容易采用灌流培養(yǎng)方式使細(xì)胞達(dá)到高密度；不足之處是操作比較麻煩，需要合適的貼附材料和足夠的面積，培養(yǎng)條

35、件不易均一，傳質(zhì)和傳氧較差。在傳代或擴(kuò)大培養(yǎng)時常常需要用酶將其從基質(zhì)上先消化下來，分離成單個細(xì)胞后再進(jìn)行培養(yǎng)。3) 貼壁-懸浮培養(yǎng)，或稱假懸浮培養(yǎng)a) 微載體培養(yǎng)：由于載體體積小，比表面積大，比重輕，在輕度攪拌下即可攜帶細(xì)胞自由懸浮在培養(yǎng)基內(nèi)，充分發(fā)揮了懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的一切優(yōu)點。如容易控制和檢測細(xì)胞的生長情況、培養(yǎng)基利用率高、采樣重復(fù)性好、收獲過程簡單、放大容易、勞動強(qiáng)度小、占用空間小等。b) 包埋和微囊培養(yǎng); 細(xì)胞被包埋或包裹在膠囊內(nèi)。包埋細(xì)胞的載體最普遍采用的是：瓊脂糖和海藻酸鈣。微囊的制備常常是形成凝膠后，再用另一種電荷相反的材料與之作用，使在載體上形成一層聚合膜，然后再使膜內(nèi)的載體液化而

36、成。 如海藻酸鈣聚賴氨酸（ALG-PLL）包埋技術(shù)：動物細(xì)胞海藻酸鈣包埋（1-2膠粒） 聚賴氨酸處理（包上一層PLL薄膜） 泡在檸檬酸鈉溶液中（ALG溶解） 微囊微膠囊培養(yǎng)的優(yōu)點：A. 細(xì)胞可獲得保護(hù)，避免了剪切力的損害；B. 獲得較高細(xì)胞密度；C. 控制微膠囊的孔徑，可使產(chǎn)品濃縮在微囊內(nèi)，有利于下游產(chǎn)物的純化；D. 可采用多種生物反應(yīng)器進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。4）結(jié)團(tuán)培養(yǎng):用細(xì)胞本身作為基質(zhì)，相互貼附后，再用懸浮的方法進(jìn)行培養(yǎng)?？稍谂囵B(yǎng)基中先加入一些直徑較小的微粒，促使細(xì)胞先附著其上，再相互附著。9.類淋巴細(xì)胞干擾素由細(xì)胞產(chǎn)生并在同種細(xì)胞上具有廣譜抗病毒作用的物質(zhì)，它同時具有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)的作用。

37、縮寫字為IFN。已發(fā)現(xiàn)IFN、IFN、IFN三類干擾素。干擾素是第一個獲準(zhǔn)用腫瘤細(xì)胞系生產(chǎn)的人用藥品。10.組織纖溶酶原激活劑（t-PA)t-PA作為第二代特異性溶栓藥，也是第一個用動物細(xì)胞大規(guī)模生產(chǎn)的基因工程產(chǎn)品?？捎糜谥委熌X梗死的溶栓藥，也可通過人黑色素瘤細(xì)胞株培養(yǎng)后大量產(chǎn)生。優(yōu)點在于它對血栓有特異性溶栓作用，t-PA對纖維蛋白具有很強(qiáng)的親和力，與纖維蛋白結(jié)合后t-PA對纖溶酶原的激活作用比游離的t-PA強(qiáng)100倍。t-PA主要結(jié)合與血栓局部，進(jìn)而激活纖溶酶原， 形成纖溶酶，水解纖維蛋白 使血栓溶解。11.促紅細(xì)胞生成素（EPO）促紅細(xì)胞生成素（EPO），又稱血細(xì)胞生成素、紅細(xì)胞刺激因子，

38、是一種酸性糖蛋白。它可與骨髓內(nèi)紅系前體細(xì)胞表面的特異性EPO受體結(jié)合，促進(jìn)其血紅蛋白的合成并使之分化增殖成紅細(xì)胞，從而調(diào)節(jié)體內(nèi)紅細(xì)胞和血紅蛋白的生理平衡。胎兒時期，EPO主要有肝臟合成，成人后主要由腎臟內(nèi)皮質(zhì)區(qū)近腎小管周圍對氧壓敏感的間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生。EPO是第一個被發(fā)現(xiàn)并批準(zhǔn)用于臨床的造血因子，也是迄今為止產(chǎn)值最高的基因工程產(chǎn)品。主要用于多種貧血，包括慢性腎衰性貧血、惡性腫瘤放療和化療引起的貧血、愛滋病繼發(fā)性貧血、早產(chǎn)兒貧血等12乙肝疫苗：· 乙肝病毒的基因組為部分雙鏈環(huán)狀DNA，有4個蛋白編碼區(qū)，其中S區(qū)基因編碼的S蛋白是表面抗原的主要成分，乙肝的基因工程疫苗主要是利用這些表面抗原蛋

39、白。兩種宿主表達(dá)：酵母表達(dá)，CHO細(xì)胞表達(dá)。第四章 抗體制藥1. 免疫：機(jī)體一種生理功能，機(jī)體依靠這一功能識別“自已”和“非已”成分，從而破壞與排拆進(jìn)入機(jī)體的抗原物質(zhì)或機(jī)體產(chǎn)生的異構(gòu)物質(zhì) 。2. 抗原：凡能激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫或細(xì)胞免疫，并能與免疫應(yīng)答的產(chǎn)物抗體和致敏淋巴細(xì)胞相結(jié)合的物質(zhì)。對人有重要性的抗原包括微生物、寄生蟲、異物血清、異型紅細(xì)胞、異體組織等。3. 抗體：機(jī)體內(nèi)B淋巴細(xì)胞在抗原剌激下所合成的具特異性免疫功能的球蛋白；抗體與相應(yīng)抗原能發(fā)生特異性結(jié)合，從而促進(jìn)白細(xì)胞的吞噬作用，將抗原清除，或使微生物失去致病性。4. 單克隆抗體：由純一的單克隆細(xì)胞系產(chǎn)生的，結(jié)構(gòu)和特異性完全相同的高純

40、度抗體。這種抗體是針對一個抗原決定簇的抗體，又是單一的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的，故稱為單克隆抗體。5. 抗原性：指在適宜的體外免疫學(xué)試驗中，某物質(zhì)和相應(yīng)抗體反應(yīng)的能力，如絮狀反應(yīng)陽性、凝膠免疫反應(yīng)陽性或酶聯(lián)免疫測定陽性等即證明某物質(zhì)具有抗原性。6. 免疫原性：指某一制品接種人體后誘生免疫應(yīng)答的能力。接種疫苗后，此種反應(yīng)導(dǎo)致出現(xiàn)理想的特異性體液免疫（由B細(xì)胞產(chǎn)生抗體）或細(xì)胞免疫應(yīng)答（各種T細(xì)胞增殖）或二者兼有之，一般情況下使被接種個體獲得保護(hù)，以免受相應(yīng)傳染原的感染。7. 簡述單克隆抗體及其制備技術(shù)1) 由經(jīng)過特定的抗原處理過的效應(yīng)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞雜交得到的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的具有特異性識別某抗原上的某一

41、個特定抗原決定簇的抗體。由于是由單一雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的純抗體，故稱單克隆抗體。2) 不足：生成的抗體只針對一種抗原決定簇，比較單一。單克隆抗體均是鼠源性抗體，運(yùn)用于人體可產(chǎn)生人抗鼠抗體，加速了排斥反應(yīng)，在人體內(nèi)半衰期只有56小時，難以維持有效藥物作用靶組織時間。完整的抗體分子的相對分子質(zhì)量過大，難以穿透實體腫瘤組織，達(dá)不到有效的治療效果。改進(jìn)：降低單克隆抗體的免疫原性；降低單克隆抗體的分子質(zhì)量。3) 單克隆抗體制備方法： 1.首先制備用于免疫的適當(dāng)抗原，再用抗原對動物進(jìn)行免疫，.取免疫鼠的B淋巴細(xì)與鼠的骨髓瘤細(xì)胞用PEG細(xì)胞融合4，在多孔板上篩選雜交瘤細(xì)胞，把已克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行大量培養(yǎng)或注

42、入純系小鼠腹腔內(nèi)制備大量的單克隆抗體。最后對單克隆抗體進(jìn)行純化。8. 簡述HAT選擇系統(tǒng)的原理。答：HAT選擇系統(tǒng)由次黃嘌呤（H）、氨甲喋呤（A)、胸腺嘧啶（T）組成，其中A-氨甲喋呤（MTX)，能阻斷DNA主要合成途徑，由于SP2/0骨髓瘤細(xì)胞都是次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）缺乏株，瘤-瘤融合細(xì)胞和瘤細(xì)胞因不能合成DNA而死亡，脾細(xì)胞因壽命有限也死亡。雜交細(xì)胞則依靠脾細(xì)胞中的次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT），用次黃嘌呤和胸腺嘧啶合成DNA，使雜交瘤細(xì)胞得以生長9. 基因工程抗體研究的主要目的有哪些？什么是Fab抗體和scFv抗體？基因工程抗體研究的主要目的：一、降低鼠

43、源性單克隆抗體分子的免疫原性，先后研制出多種人源化的單克隆抗體，如人-鼠嵌合抗體、改型抗體等；二、降低抗體的相對分子質(zhì)量，以增加組織的透過性。先后研制出多種類型的小分子抗體（如單鏈抗體、單域抗體等）。三、雙（多）價及雙特異性抗體的構(gòu)建，克服了scFv在體內(nèi)清除過快的不足，具有高親和力性能，由于具有多個結(jié)合價，可同時與細(xì)胞膜上相鄰的兩個或多個靶抗原結(jié)合，與腫瘤細(xì)胞表面抗原的多價結(jié)合有利于腫瘤的影像分析及治療。四、抗體融合蛋白的構(gòu)建，如近年來最受關(guān)注的CTLA4-Ig，抑制T細(xì)胞依賴的抗體反應(yīng)。Fab抗體：抗原結(jié)合片段，由于保持抗體分子的立體構(gòu)型，在人體仍然很穩(wěn)定，成為小分子抗體的雛形。scFv抗

44、體：一種截短的Fab抗體片段，只有重鏈的V區(qū)和輕鏈的V區(qū)通過一段合成的肽鏈相連接而成。10免疫酶抗體診斷試劑工作原理1) 免疫組化用抗體診斷試劑：酶標(biāo)抗體與抗原發(fā)生特異結(jié)合，當(dāng)加入酶的底物時，底物在酶的催化作用下，發(fā)生組化反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。在光學(xué)顯微鏡下就可以觀察。常用的酶是辣根過氧化物酶（HRP），底物為二氨基聯(lián)苯胺（DAB）2) 酶免疫測定用抗體診斷試劑：用酶標(biāo)記已知抗體或抗免疫球蛋白，與待查配體抗原混合反應(yīng)形成抗原抗體結(jié)合物后，再用適當(dāng)方法分離出來，加入酶的底物進(jìn)行顯色，根據(jù)呈色程度使用分光光度計測知待測物的含量。11.抗體導(dǎo)向酶-前藥療法的工作原理答：前藥是一類本身無活性或活性很低，

45、但在體內(nèi)可轉(zhuǎn)化為活性物質(zhì)的藥物，單抗與前藥專一性活化酶交聯(lián)并將其選擇性地結(jié)合于腫瘤部位，使前藥可以區(qū)域特異性地在腫瘤組織內(nèi)轉(zhuǎn)化為活性細(xì)胞毒分子，有效解決了藥物在腫瘤組織內(nèi)濃度過低和對正常組織損傷問題。ADEPT的關(guān)鍵在于選擇適當(dāng)?shù)幕罨盖八帉Α５谖逭?植物細(xì)胞工程制藥1.外植體：外植體是指用于植物組織（細(xì)胞）培養(yǎng)的器官或組織（的切段），植物的各部位如根、莖、葉、花、果、穗、胚珠、胚乳、花藥和花粉等均可作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)。2.繼代培養(yǎng)：由最初的外植體的組織，培養(yǎng)一代時間而稱為第一代培養(yǎng)。連續(xù)多代的培養(yǎng)即為繼代培養(yǎng)。3.什么是誘導(dǎo)子？答：誘導(dǎo)子（elicitor）是植物抗病過程中誘發(fā)植物產(chǎn)生植

46、物抗毒素（植保素、后感染防御物質(zhì)）和引起植物過敏反應(yīng)的因子，包括侵染植物的微生物及植物細(xì)胞內(nèi)的分子。誘導(dǎo)子在植物與微生物的相互作用中，能快速、高度專一性地誘導(dǎo)特定基因的表達(dá)。4.各種植物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器的特點是什么？1) 機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器：反應(yīng)器內(nèi)的溫度pH、溶氧及營養(yǎng)物濃度較其他反應(yīng)器更易控制2) 鼓泡塔式生物反應(yīng)器：優(yōu)點沒有運(yùn)動部件，操作不易染菌，在無機(jī)械能輸入情況下，提供了較高的熱量和質(zhì)量傳遞，適于對剪切敏感的細(xì)胞的培養(yǎng)，放大相對容易，缺點為流體流動形式難以確定，混合不均，缺乏有關(guān)反應(yīng)器內(nèi)的非牛頓流體的流動與傳遞特性的數(shù)據(jù)等。3) 氣升式生物反應(yīng)器：結(jié)構(gòu)簡單，沒有泄露點和死角，運(yùn)

47、動部件不易染菌。流動性較為均勻，較高的氧傳遞效果，其缺點為高密度發(fā)酵時混合不夠均勻。4) 轉(zhuǎn)鼓式生物反應(yīng)器：用過轉(zhuǎn)動促進(jìn)反應(yīng)器內(nèi)的氧及營養(yǎng)物質(zhì)的混合，設(shè)置擋板有助于提高氧傳遞，在高密度培養(yǎng)時有高的傳氧能力，其缺點為難于大規(guī)模操作，放大困難。5) 固定化細(xì)胞生物反應(yīng)器：可保護(hù)細(xì)胞免受剪切；細(xì)胞可以長時間重復(fù)使用；易于實現(xiàn)高密度培養(yǎng)；細(xì)胞間接觸良好，易于分化，有利于次級代謝產(chǎn)物的合成；減少細(xì)胞的遺傳不穩(wěn)定性；易于實現(xiàn)連續(xù)化操作第六、七章 酶及發(fā)酵工程制藥1. 限制酶 : 是指限制性核酸內(nèi)切酶，是一類能識別雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列，并對核苷酸之間的磷酸二酯鍵進(jìn)行切割的核酸內(nèi)切酶。2. PCR :是指聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，由變性、退火、延伸三個基本反應(yīng)組成。3. 模擬酶：在分子水平上模擬酶活性部位的形狀、大小及其微環(huán)境等結(jié)構(gòu)特征，以及酶的作用機(jī)制和立體化學(xué)等特性，用各種方法人為制造的具有酶性質(zhì)的催化劑。4. 抗體酶：抗體酶是抗體的高度選擇性和酶的高效催化能力巧妙結(jié)合的產(chǎn)物，本質(zhì)上是一類具有催化活力的免疫球蛋白，在其可變區(qū)賦予了酶的屬性。 5. 酶的化學(xué)修飾：通過主鏈的切割、剪接和側(cè)鏈基團(tuán)的化學(xué)修飾對酶蛋白進(jìn)行分子改造，以改變其理化性質(zhì)及生物活性。稱為酶分