生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定ppt

1、生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定一、實(shí)驗(yàn)原理一、實(shí)驗(yàn)原理1.可溶性還原糖可溶性還原糖 生物組織中普遍存在的可溶性糖類(lèi)較多，有葡萄糖、生物組織中普遍存在的可溶性糖類(lèi)較多，有葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖。前三種糖的分子內(nèi)都含有游離的果糖、麥芽糖和蔗糖。前三種糖的分子內(nèi)都含有游離的具還原性的半縮醛羥基，因此叫做還原糖；蔗糖分子內(nèi)具還原性的半縮醛羥基，因此叫做還原糖；蔗糖分子內(nèi)沒(méi)有，為非還原糖。實(shí)驗(yàn)中所用的斐林試劑，只能鑒定沒(méi)有，為非還原糖。實(shí)驗(yàn)中所用的斐林試劑，只能鑒定生物組織中可溶性還原糖，而不能鑒定可溶性非還原糖生物組織中可溶性還原糖，而不能鑒定可溶性非還原糖及不能溶解的糖。斐林試劑為及不能溶

2、解的糖。斐林試劑為0.1g/mL的的NaOH和和 0.05g/mL的的CuSO配制而成的淡藍(lán)色配制而成的淡藍(lán)色Cu(OH)2沉沉淀的懸濁液，葡萄糖溶液在加入斐林試劑后，在加熱條淀的懸濁液，葡萄糖溶液在加入斐林試劑后，在加熱條件下件下Cu(OH)2被還原為磚紅色的被還原為磚紅色的Cu2O沉淀，而葡萄沉淀，而葡萄糖氧化成葡萄糖酸。其反應(yīng)式為糖氧化成葡萄糖酸。其反應(yīng)式為:-CHO+Cu(OH)2-COOH+Cu2O磚紅色磚紅色2.脂肪的鑒定脂肪的鑒定 蘇丹蘇丹(蘇丹蘇丹)為一種脂肪染色劑為一種脂肪染色劑(易溶解于易溶解于酒精，不溶解于水酒精，不溶解于水)。蘇丹。蘇丹染液遇脂肪的顏色反染液遇脂肪的顏色

3、反應(yīng)為橘黃色，蘇丹應(yīng)為橘黃色，蘇丹染液遇脂肪的顏色反應(yīng)為紅染液遇脂肪的顏色反應(yīng)為紅色。其反應(yīng)式為色。其反應(yīng)式為: 脂肪脂肪蘇丹蘇丹 （蘇丹（蘇丹） 橘黃色橘黃色（紅色紅色）3.蛋白質(zhì)的鑒定蛋白質(zhì)的鑒定 將尿素加熱，兩分子尿素放出一分子氨而縮合成雙將尿素加熱，兩分子尿素放出一分子氨而縮合成雙縮脲。反應(yīng)式為縮脲。反應(yīng)式為: 雙縮脲在堿性環(huán)境中能和硫酸銅結(jié)合成紅紫色的雙縮脲在堿性環(huán)境中能和硫酸銅結(jié)合成紅紫色的絡(luò)化物。蛋白質(zhì)分子中含有的肽鍵結(jié)構(gòu)與雙縮脲結(jié)構(gòu)相絡(luò)化物。蛋白質(zhì)分子中含有的肽鍵結(jié)構(gòu)與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似，因此，蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)：似，因此，蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)：-CO N

4、H -（類(lèi)似雙縮尿（類(lèi)似雙縮尿H2NOC - NH - CONH2結(jié)構(gòu)）結(jié)構(gòu)）酸性條件下與酸性條件下與Cu2+作用形成作用形成紫色絡(luò)合物紫色絡(luò)合物雙縮尿反應(yīng)雙縮尿反應(yīng)選材：含糖量較高的選材：含糖量較高的白色或近于白色白色或近于白色，蘋(píng)果、梨最好，蘋(píng)果、梨最好 。 二、實(shí)驗(yàn)步驟與現(xiàn)象二、實(shí)驗(yàn)步驟與現(xiàn)象1.可溶性還原糖可溶性還原糖 制備組織樣液：制備組織樣液：制漿：去皮、切塊、研磨制漿：去皮、切塊、研磨過(guò)濾：（用單層紗布）過(guò)濾：（用單層紗布）取液：取液：（mL）顯色反應(yīng)顯色反應(yīng) 現(xiàn)象：現(xiàn)象： 2.脂肪的鑒定脂肪的鑒定 取材：花生種子（浸泡取材：花生種子（浸泡h），去皮，將子葉削成薄片），去皮，將子

5、葉削成薄片 制片：制片：選取最薄的薄片移至載玻片中央選取最薄的薄片移至載玻片中央在薄片上滴加蘇丹在薄片上滴加蘇丹 染液染液2 3滴，染色滴，染色min滴加體積分?jǐn)?shù)為滴加體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精溶液的酒精溶液12滴，洗去浮色滴，洗去浮色吸去余液，滴吸去余液，滴1-2滴蒸餾水，蓋上蓋玻片滴蒸餾水，蓋上蓋玻片觀察：觀察：先在低倍鏡下找到已著色的薄片，后用高倍鏡觀察先在低倍鏡下找到已著色的薄片，后用高倍鏡觀察結(jié)果：結(jié)果：有被染成有被染成橘黃色橘黃色的脂肪微粒的脂肪微粒3.蛋白質(zhì)的鑒定蛋白質(zhì)的鑒定 選材與制備選材與制備組織樣液：組織樣液：黃豆組織樣液（或雞蛋白稀釋液）黃豆組織樣液（或雞蛋白稀釋液）黃豆浸泡

6、黃豆浸泡 去皮去皮切片切片研磨研磨過(guò)濾過(guò)濾濾液濾液 顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)現(xiàn)象：現(xiàn)象：無(wú)色無(wú)色紫色或紫紅色紫色或紫紅色三、實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵與注意事項(xiàng)：三、實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵與注意事項(xiàng)：1.實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于實(shí)驗(yàn)材料的選擇：實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于實(shí)驗(yàn)材料的選擇： 在做可溶性還原糖的鑒定實(shí)驗(yàn)中，最理想的實(shí)驗(yàn)在做可溶性還原糖的鑒定實(shí)驗(yàn)中，最理想的實(shí)驗(yàn)材料是含糖量較高的生物組織材料是含糖量較高的生物組織(或器官或器官)，而且組織的顏，而且組織的顏色較淺，最好是白色或近于白色的植物組織，這樣可以避色較淺，最好是白色或近于白色的植物組織，這樣可以避免材料自身顏色對(duì)實(shí)驗(yàn)變化顏色的掩蓋。經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較，顏免材料自身顏色對(duì)實(shí)驗(yàn)變化

7、顏色的掩蓋。經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較，顏色反應(yīng)的明顯程度依次為蘋(píng)果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜。色反應(yīng)的明顯程度依次為蘋(píng)果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜。 在做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)材料最好選用富含在做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)材料最好選用富含脂肪的種子，且徒手切片要成功，要求實(shí)驗(yàn)技能較高，不脂肪的種子，且徒手切片要成功，要求實(shí)驗(yàn)技能較高，不妨改成刮取花生子葉泥制作臨時(shí)裝片，易做，效果又好。妨改成刮取花生子葉泥制作臨時(shí)裝片，易做，效果又好。 在做糖和蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)時(shí)，最好選用富含蛋白質(zhì)在做糖和蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)時(shí)，最好選用富含蛋白質(zhì)的生物組織，植物材料常用的是大豆，動(dòng)物材料常用的是的生物組織，植物材料常用的是大豆，動(dòng)物材料常用的

8、是雞蛋，鑒定之前需要留出一部分樣液，以便與鑒定后的樣雞蛋，鑒定之前需要留出一部分樣液，以便與鑒定后的樣液的顏色做比較，這樣可增強(qiáng)說(shuō)服力。液的顏色做比較，這樣可增強(qiáng)說(shuō)服力。 (1)斐林試劑很不穩(wěn)定，故應(yīng)將組成斐林試劑的甲液斐林試劑很不穩(wěn)定，故應(yīng)將組成斐林試劑的甲液(0.1g/mL的的NaOH溶液溶液)和乙液和乙液(0.05g/mL的的CuSO溶液溶液)分別配制、儲(chǔ)存，使用時(shí)，再臨時(shí)配制，分別配制、儲(chǔ)存，使用時(shí)，再臨時(shí)配制，將將45滴乙液滴入滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。切勿甲液中，配完后立即使用。切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中。將甲液和乙液分別加入組織樣液中。 (2) 鑒定可溶性還

9、原糖，加熱試管時(shí)，應(yīng)該用試管夾鑒定可溶性還原糖，加熱試管時(shí)，應(yīng)該用試管夾夾住試管上部，放入盛開(kāi)水的大燒杯加熱；注意試管底部夾住試管上部，放入盛開(kāi)水的大燒杯加熱；注意試管底部不接觸燒杯底部，同時(shí)試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者，以免試管不接觸燒杯底部，同時(shí)試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者，以免試管內(nèi)溶液沸騰時(shí)沖出試管，造成燙傷。如果試管內(nèi)溶液過(guò)于內(nèi)溶液沸騰時(shí)沖出試管，造成燙傷。如果試管內(nèi)溶液過(guò)于沸騰，可以提起試管夾，使試管與沸水接觸面減少，以免沸騰，可以提起試管夾，使試管與沸水接觸面減少，以免溶液溢出。溶液溢出。 A.可溶性還原糖可溶性還原糖 2.注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： (3) 在鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)中，若用花生種子作實(shí)驗(yàn)材在

10、鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)中，若用花生種子作實(shí)驗(yàn)材料，必須提前浸泡料，必須提前浸泡34小時(shí)，浸泡時(shí)間短了，不容易小時(shí)，浸泡時(shí)間短了，不容易切片，浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則組織太軟，切下的薄片不易切片，浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則組織太軟，切下的薄片不易成形，切片要盡可能的薄。成形，切片要盡可能的薄。 (4) 染色后一定要用染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色，的酒精溶液洗去浮色，染色和洗浮色時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)（否則酒精將脂肪溶解影染色和洗浮色時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)（否則酒精將脂肪溶解影響實(shí)驗(yàn)效果），觀察時(shí)找最薄處最好只有響實(shí)驗(yàn)效果），觀察時(shí)找最薄處最好只有12層細(xì)胞。層細(xì)胞。B.脂肪的鑒定脂肪的鑒定 (5)在蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)中，若用蛋白質(zhì)作實(shí)驗(yàn)在蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)中，若用蛋白質(zhì)作實(shí)驗(yàn)材料，必須稀釋?zhuān)绻♂尣粔?，與雙縮脲試劑發(fā)材料，必須稀釋?zhuān)绻♂尣粔?，與雙縮脲試劑發(fā)生反應(yīng)后會(huì)粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不徹底，且生反