實驗四液相色譜法用于不易揮發(fā)有機化合物混合物的定性分析

1、實驗四：液相色譜法用于不易揮發(fā)有機化合物混合物的定性分析 學生姓名：請叫我紅領(lǐng)巾一、實驗目的：1、 學習利用高效液相色譜儀分離化合物和檢測化合物的含量的方法2、 通過對樣品的定量測定，初步掌握獲得高效液相色譜圖和數(shù)據(jù)的一般操作程序與技術(shù)3、 學習譜圖和數(shù)據(jù)的處理方法二、實驗原理：高效液相色譜分離是利用試樣中各組分在色譜柱中的流動相和固定相間的分配系數(shù)不同，當試樣隨流動相進入色譜柱后，組分就在兩相間進行反復多次（103106）的分配，由于固定相對各種組分的吸附能力不同，各組分在色譜柱中的運行速度就不同，經(jīng)過一定柱長后彼此分離，依次從色譜柱流出，通過檢測器時樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀。三、

2、實驗儀器與試劑：儀器：島津液相色譜儀，SPD-20A檢測器，LC-20AT泵，微量進樣器，C18色譜柱試劑：苯（水楊酸甲酯）濃度為1000 ppm，甲苯（煙酸乙酯）濃度為1000 ppm，3個不同比例的苯和甲苯（水楊酸甲酯-煙酸乙酯混合液），甲醇（AR），超純水樣品的配制：苯和甲苯濃度為1000ppm的配置：用移液管分別量取0.5 mL的苯和甲苯用甲醇定容在5 mL的容量瓶中（105ppm），然后用移液管量取1 mL剛定容的溶液再用甲醇定容在10mL的容量瓶后（104ppm）并用移液管量取1 mL剛定容的溶液再用甲醇稀定容在10mL的容量瓶中，這樣就配制成濃度為1000ppm，用0.45

3、81;m濾膜過濾。苯-甲苯混合液：用苯和甲苯的濃度為1000ppm按體積不同體積比定容至10mL四、實驗步驟：1、準備1.1準備所需的流動相，用合適的0.45m濾膜過濾，超聲脫氣20min。（這里用的是流動相是甲醇(B)和超純水(A)，分別用有機相系和水相系的0.45µm濾膜過濾，超聲脫氣20min。）1.2根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的洗脫柱（注意方向）和定量環(huán)。1.3配制樣品濃度為1000ppm（也可在平衡系統(tǒng)時配制），用合適的0.45m濾膜過濾。（苯和甲苯濃度為1000ppm的配置：用移液管分別量取0.5 mL的苯和甲苯用甲醇定容在5 mL的容量瓶中（105ppm），然后用移液管

4、量取1 mL剛定容的溶液再用甲醇定容在10mL的容量瓶后（104ppm）并用移液管量取1 mL剛定容的溶液再用甲醇稀定容在10mL的容量瓶中，這樣就配制成濃度為1000ppm，用0.45µm濾膜過濾。苯-甲苯混合液：用苯和甲苯的濃度為1000ppm按體積不同體積比定容至10mL）1.4檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常。2、開機接通電源，依次開啟不間斷電源、B泵、A泵、檢測器，待泵和檢測器自檢結(jié)束后，打開打印機、電腦顯示器、主機，最后打開色譜工作站（即電腦桌面上的CS-Light Real Time Analysis）。3、參數(shù)設(shè)定3.1波長設(shè)定：在檢測器顯示初始屏

5、幕時，按func鍵接著按Enter鍵，用數(shù)字鍵輸入所需波長值254nm，按Enter鍵確認。按CE鍵退出到初始屏幕。 , w43.2流速設(shè)定：在A泵顯示初始屏幕時，按func鍵，用數(shù)字鍵輸入所需的流速（柱在線時流速一般不超過1ml/min），按Enter鍵確認。按CE鍵退出。3.3流動相比例設(shè)定：在A泵顯示初始屏幕時，按conc鍵，用數(shù)字鍵輸入流動相B的濃度百分數(shù)(80%)，按Enter鍵確認。按CE鍵退出。 4、更換流動相并排氣泡4.1將A/B管路的吸濾器放入裝有準備好的流動相的儲液瓶中；4.2逆時針轉(zhuǎn)動A/B泵的排液閥180°，打開排液閥；4.3按A/B泵的purge鍵，pump

6、指示燈亮，泵大約以9.9ml/min的流速沖洗，3min（可設(shè)定）后自動停止；4.4將排液閥順時針旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥。4.5如管路中仍有氣泡，則重復以上操作直至氣泡排盡。4.6如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中，設(shè)流速為5ml/min，按pump鍵，沖洗3min后再按pump鍵停泵，重新接上柱并將流速重設(shè)為規(guī)定值。 5、平衡系統(tǒng)5.1按N2000色譜數(shù)據(jù)工作站操作規(guī)程打開"在線色譜工作站"軟件，輸入實驗信息并設(shè)定各項方法參數(shù)后，按下"數(shù)據(jù)收集"頁的 查看基線 按鈕。5.2等度洗脫方式 ; g5 J; Q按A泵的pump鍵，A、

7、B泵將同時啟動，pump指示燈亮。用檢驗方法規(guī)定的流動相沖洗系統(tǒng)，一般最少需6倍柱體積的流動相。按A泵的pump鍵，A、B泵將同時啟動，pump指示燈亮。用檢驗方法規(guī)定的流動相沖洗系統(tǒng)，一般最少需6倍柱體積的流動相。檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應(yīng)予以排除。觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應(yīng)不超過1MPa。如超過則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按4.6操作。觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.01mV/min，噪聲為<0.001mV時，可認為系統(tǒng)已達到平衡狀態(tài)，可以進樣。6、進樣6.1進樣前在CS-Light Real Time Analysis中:(1)點擊“單次分析”，接

8、著點擊“樣品記錄”，在樣品記錄名稱中輸入所要檢測得樣品名稱，然后點擊“數(shù)據(jù)文件”選擇該樣品儲存在哪里，最后在“數(shù)據(jù)儲存的文件夾”后面輸入該樣品名稱，點擊確定。(2)在信號采集菜單中設(shè)定停止時間（8 min）和延遲時間(3 min)。6.2進樣前按檢測器zero鍵調(diào)零，按軟件中 零點校正 按鈕校正基線零點，再按一下 查看基線 按鈕使其彈起。6.3用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取20 mL。7、數(shù)據(jù)處理7.1在桌面雙擊“CS-Light Postrum Analysis”，點擊確定按鈕后，在“文件夾目錄中”選中該樣品記錄雙擊鼠標，在譜圖上單擊鼠標右鍵的“顯示設(shè)置”，在“顯示設(shè)置”中選擇“展開

9、色譜”的“時間”填寫“0”到“20”后點擊確定7.2用鼠標點擊“編輯”選擇“積分”中的“最小峰面積/高”輸入“最小峰面積值”，然后又點擊“定量”在“定量方法”中選擇“面積歸一法”，然后點擊查看。7.3復制譜圖到Word文檔，在譜圖中點擊鼠標右鍵選擇“復制”；復制數(shù)據(jù)，單擊鼠標左鍵全選，然后鼠標右鍵“復制表格到剪貼板（b）”。8、關(guān)閉儀器分析完畢后，關(guān)閉色譜工作站，再自上而下關(guān)閉儀器。五、實驗數(shù)據(jù)及其處理圖1，甲苯（注：流動相比例為甲醇80%，水20%） 表一.甲苯峰號組分名保留時間面積拖尾因子分離度1甲苯6.8901239016.61.156- 圖二，混合樣1表二，混合樣1峰號組分名保留時間面

10、積面積%拖尾因子分離度1苯5.592330691.025.77170.908-2甲苯6.857952465.374.22831.1524.661圖3，數(shù)據(jù)比較（紅色是甲苯色譜圖，黑色是混合樣1色譜圖）圖4，混合樣2表3.混合樣2峰號組分名保留時間面積面積%拖尾因子分離度1苯5.943299653.523.83511.222-2甲苯7.467957540.676.16491.1645.372圖5.數(shù)據(jù)比較（紅色是混合樣2色譜圖，黑色是甲苯色譜圖）數(shù)據(jù)分析:根據(jù)對圖一甲苯色譜圖的分析，我們可以得出，在流動相為80%甲苯、20%水的條件下，甲苯的保留時間約為6.890min.在圖二混合樣1的數(shù)據(jù)分析與圖三的數(shù)據(jù)比較中，我們可以看出，2號峰的保留時間為6.857min，接近6.890min,所得色譜峰基本與圖一的甲苯色譜峰重合.因此，可判斷2號峰為甲苯峰。并根據(jù)實驗二數(shù)據(jù)以及網(wǎng)上數(shù)據(jù)查詢可知，1號峰應(yīng)為苯峰。在圖三混合樣2的數(shù)據(jù)分析與圖四的數(shù)據(jù)比較中，我們發(fā)現(xiàn)混合樣2的色譜數(shù)據(jù)與前面的實驗數(shù)據(jù)出現(xiàn)很大誤差，色譜峰的保留時間延遲了許多。對此，我作出以下猜測：1， 流動相的改變。由于我們發(fā)現(xiàn)圖三的色譜圖中，不僅是甲苯的出峰時間延遲，連苯的出峰時間也出現(xiàn)了延遲。兩峰的保留時間同時