仿制藥質(zhì)量一致性評價人體生物等效性研究

1、附件3仿制藥質(zhì)量一致性評價人體生物等效性研究 技術(shù)指導(dǎo)原則一、概述藥物制劑要產(chǎn)生最佳療效，其藥物活性成分應(yīng)當(dāng)在預(yù)期時間段內(nèi)釋放 吸收并被轉(zhuǎn)運(yùn)到作用部位達(dá)到預(yù)期的有效濃度。大多數(shù)藥物是進(jìn)入血液循 環(huán)后產(chǎn)生全身治療效果的，作用部位的藥物濃度和血液中藥物濃度存在一 定的比例關(guān)系，因此可以通過測定血液循環(huán)中的藥物濃度來獲得反映藥物 體內(nèi)吸收程度和速度的主要藥代動力學(xué)參數(shù)，間接預(yù)測藥物制劑的臨床治 療效果，以評價制劑的質(zhì)量。允許這種預(yù)測的前提是制劑中活性成分進(jìn)入體內(nèi)的行為是一致并且可重現(xiàn)的。生物利用度(Bioavailability,BA )是反映藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi) 的程度和速度的指標(biāo)。過去由現(xiàn)的

2、一些由于制劑生物利用度不同而導(dǎo)致的 不良事件，使人們認(rèn)識到確有必要對制劑中活性成分生物利用度的一致性 或可重現(xiàn)性進(jìn)行驗證，尤其是在含有相同活性成分的仿制產(chǎn)品要替代它的 原研制劑進(jìn)入臨床使用的時候。鑒于藥物濃度和治療效果相關(guān)，假設(shè)在同 一受試者，相同的血藥濃度-時間曲線意味著在作用部位能達(dá)到相同的藥物 濃度，并產(chǎn)生相同的療效，那么就可以藥代動力學(xué)參數(shù)作為替代的終點指標(biāo)來建立等效性，即生物等效性( Bioequivalence, BE )。BA和BE研究已經(jīng)成為評價制劑質(zhì)量的重要手段。本指導(dǎo)原則將重點闡述BA和BE研究的相關(guān)概念、 應(yīng)用范圍和BA和BE研究的設(shè)計、操作和評 價等。本指導(dǎo)原則主要是針

3、對化學(xué)藥品普通固體口服制劑質(zhì)量一致性評價 的人體生物等效性研究。因為在具體應(yīng)用過程中有可能面臨多種情況，對于一些特殊問題，仍應(yīng)遵循具體問題具體分析的原則。二、BA和BE基本概念及應(yīng)用1 .生物利用度：是指藥物活性成分從制劑釋放吸收進(jìn)入全身循環(huán)的程度和速度。一般分為絕對生物利用度和相對生物利用度。絕對生物利用度 是以靜脈制劑(通常認(rèn)為靜脈制劑生物利用度為 100%)為參比制劑獲得的 藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)的相對量；相對生物利用度則是以其他非 靜脈途徑給藥的制劑(如片劑和口服溶液)為參比制劑獲得的藥物活性成分吸收進(jìn)入體循環(huán)的相對量。2 .生物等效性：是指藥學(xué)等效制劑或可替換藥物在相同試驗條件

4、下， 服用相同劑量，其活性成分吸收程度和速度的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。通常意 F，I ' V義的BE研究是指用BA研究方法，以藥代動力學(xué)參數(shù)為終點指標(biāo)，根據(jù)預(yù) 廣、,1x x乜 "3先確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較研究。在藥代動力學(xué)方法確實不可行時，也可以考慮以臨床綜合療效、藥效學(xué)指標(biāo)或體外試驗指標(biāo)等進(jìn)行比較 I；，' TJl/ i |性研究，但需充分證實所采用的方法具有科學(xué)性和可行性。二"l l r "?了解以下幾個概念將有助于理解BA和BE:原研藥(Innovator Product):是指已經(jīng)過全面的藥學(xué)、藥理學(xué)和毒理 學(xué)研究以及臨床研究數(shù)據(jù)證實其

5、安全有效性并首次被批準(zhǔn)上市的藥品。藥 學(xué)等效性(Pharmaceutical equivalence):如果兩制劑含等量的相同活性成分， 具有相同的劑型，符合同樣的或可比較的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，則可以認(rèn)為它們是藥 學(xué)等效的。藥學(xué)等效不一定意味著生物等效，因為輔料的不同或生產(chǎn)工藝差異等可能會導(dǎo)致藥物溶生或吸收行為的改變。治療等效性(Therapeuticequivalence):如果兩制劑含有相同活性成分，并且臨床上顯示具有相同的 安全性和有效性，可以認(rèn)為兩制劑具有治療等效性。如果兩制劑中所用輔 料本身并不會導(dǎo)致有效性和安全性問題，生物等效性研究是證實兩制劑治 療等效性最合適的辦法。 如果藥物吸收速度與臨

6、床療效無關(guān)，吸收程度相同 但吸收速度不同的藥物也可能達(dá)到治療等效。而含有相同的活性成分只是 活性成分化學(xué)形式不同（如某一化合物的鹽、酯等）或劑型不同（如片劑和膠囊劑）的藥物制劑也可能治療等效。基本相似藥物 （Essentially similar product）:如果兩個制劑具有等量 且符合同一質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的藥物活性成分，具有相同劑型，并且經(jīng)過證明具有 生物等效性，則兩個制劑可以認(rèn)為是基本相似藥物。從廣義上講，這一概念也應(yīng)適用于含同一活性成分的不同的劑型，如片劑和膠囊劑。與原研藥基本相似藥物是可以替換原研藥使用的。BA和BE均是評價制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)，BA強(qiáng)調(diào)反映藥物活性成分到達(dá)體內(nèi)循環(huán)的相對量

7、和速度，是新藥研究過程中選擇合適給藥途徑和確定 用藥方案（如給藥劑量和給藥間隔）的重要依據(jù)之一。BE則重點在于以預(yù)先 確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較，是保證含同一藥物活性成分的不同制 劑體內(nèi)行為一致性的依據(jù)，是判斷后研發(fā)產(chǎn)品是否可替換已上市藥品使用i I i. i1 的依據(jù)。BA和BE研究在藥品研發(fā)的不同階段有不同作用：在新藥研究階段，為了確定新藥處方、工藝合理性，通常需要比較改 變上述因素后制劑是否能達(dá)到預(yù)期的生物利用度；開發(fā)了新劑型，要對擬 上市劑型進(jìn)行生物利用度研究以確定劑型的合理性，通過與原劑型比較的BA研究來確定新劑型的給藥劑量，也可通過BE研究來證實新劑型與原劑型是否等效；在臨床試

8、驗過程中， 可通過BE研究來驗證同一藥物的不同時 期產(chǎn)品的前后一致性，如：早期和晚期的臨床試驗用藥品，臨床試驗用藥品（尤其是用于確定劑量的試驗藥）和擬上市藥品等。在仿制生產(chǎn)已有國家標(biāo)準(zhǔn)藥品時，可通過BE研究來證明仿制產(chǎn)品與原研藥是否具有生物等效性，是否可與原研藥替換使用。藥品批準(zhǔn)上市后，如處方組成成分、比例以及工藝等由現(xiàn)一定程度的變更時，研究者需要根據(jù)產(chǎn)品變化的程度來確定是否進(jìn)行BE研究，以考察變更后和變更前產(chǎn)品是否具有生物等效性。以提高生物利用度為目的研發(fā)的新制劑，需要進(jìn)行BA研究，了解變更前后生物利用度的變化。三、研究方法BE研究是在試驗制劑和參比制劑生物利用度比較基礎(chǔ)上建立等效性。 &q

9、uot;If F目前推薦的生物等效性研究方法包括體內(nèi)和體外的方法。按方法的優(yōu) 先考慮程度從高到低排列：藥代動力學(xué)研究方法、藥效動力學(xué)研究方法、 臨床比較試驗方法、體外研究方法。具體如下：藥代動力學(xué)研究即采用人體生物利用度比較研究的方法。通過測量不同時間點的生物樣本（如全血、血漿、血清或尿液）中藥物濃度，獲得藥物濃度-時間曲線（Concentration-Time curve,C-T ）來反映藥物從制劑中釋放吸收到體循環(huán)中的動態(tài)過程。并經(jīng)過適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)，得由與吸收程度和速度有關(guān)的藥代動力學(xué)參數(shù)如曲線下面積 （AUC）、達(dá)峰濃度（Cmax）、達(dá)峰時間（Tmax）等，通過統(tǒng)計學(xué)比較以上參數(shù)，判斷兩制劑

10、是否生物等效。藥效動力學(xué)研究在無可行的藥代動力學(xué)研究方法建立生物等效性研究時（如無靈敏的血藥濃度檢測方法、濃度和效應(yīng)之間不存在線性相關(guān)），可以考慮用明確的 可分級定量的人體藥效學(xué)指標(biāo)通過效應(yīng)-時間曲線（Effect-Time curve ）與參比制劑比較來確定生物等效性。臨床比較試驗當(dāng)無適宜的藥物濃度檢測方法，也缺乏明確的藥效學(xué)指標(biāo)時，也可以通過以參比制劑為對照的臨床比較試驗，以綜合的療效終點指標(biāo)來驗證兩制劑的等效性。然而，作為生物等效研究方法，對照的臨床試驗可能因為 樣本量不足或檢測指標(biāo)不靈敏而缺乏足夠的把握度去檢驗差異，故建議盡 量采用藥代動力學(xué)研究方法。通過增加樣本量或嚴(yán)格的臨床研究實施

11、在一定程度上可以克服以上局限。體外研究一般不提倡用體外的方法來確定生物等效性，因為體外并不能完全代 替體內(nèi)行為，但在某些情況下，如能提供充分依據(jù)，也可以采用體外的方 法來證實生物等效性。根據(jù)生物藥劑學(xué)分類證明屬于高溶解度，高滲透性,快速溶生的口服制劑可以采用體外溶生度比較研究的方法驗證生物等效， 因為該類藥物的溶生、吸收已經(jīng)不是藥物進(jìn)入體內(nèi)的限速步驟。對于難溶 性但高滲透性的藥物，如已建立良好的體內(nèi)外相關(guān)關(guān)系，也可用體外溶由的研究來替代體內(nèi)研究。 :. ! I四、BE研究具體要求二"l l r "?以藥代動力學(xué)參數(shù)為終點指標(biāo)的研究方法是目前普遍采用的生物等 產(chǎn)，yC1、,

12、I 飛J效性研究方法。一個完整的生物等效性研究包括生物樣本分析、實驗設(shè)計、統(tǒng)計分析、結(jié)果評價四個方面內(nèi)容。（一）生物樣本分析方法的建立和確證生物樣品一般來自全血、血清、血漿、尿液或其他組織，具有取樣量 少、藥物濃度低、干擾物質(zhì)多以及個體的差異大等特點，因此必須根據(jù)待 測物的結(jié)構(gòu)、生物介質(zhì)和預(yù)期的濃度范圍，建立適宜的生物樣品定量分析方法，并對方法進(jìn)行確證。1.常用分析方法目前常用的幾種分析方法有：（1）色譜法：氣相色譜法（GC）、高效液相色譜法（HPLC）、色譜質(zhì) 譜聯(lián)用法（LCMS、LC-MS-MS、GC-MS、GC-MS-MS ）等，可用于大 多數(shù)藥物的檢測；（2）免疫學(xué)方法：放射免疫分析法

13、、酶免疫分析法、 熒光免疫分析法等，多用于蛋白質(zhì)多肽類物質(zhì)檢測；（3）微生物學(xué)方法：可用于抗生素藥物的測定。生物樣本分析方法的選擇宜盡量選擇可行的靈敏度高的方法。2 .方法學(xué)確證（Method Validation ）建立可靠的和可重現(xiàn)的定量分析方法是進(jìn)行生物等效性研究的關(guān)鍵 之一。為了保證分析方法可靠，必須進(jìn)行充分的方法確證，一般應(yīng)進(jìn)行以 下幾方面的考察：2.1 特異性（Specificity）特異性是指樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準(zhǔn)確、專一 地測定分析物的能力。必須提供證明所測定物質(zhì)是受試藥品的原形藥物或 二"l l r "?特定活性代謝物，生物樣品所含內(nèi)源

14、性物質(zhì)和相應(yīng)代謝物、降解產(chǎn)物不得 干擾對樣品的測定，如果有幾個分析物，應(yīng)保證每一個分析物都不被干擾。 應(yīng)確定保證分析方法特異性的最佳檢測條件。對于色譜法至少要考察6個來自不同個體的空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品色譜圖反映分析方法的特異性。對于以 軟電離質(zhì)譜為基礎(chǔ)的檢測法（LC MS、LC-MS-MS ）應(yīng)注意考察分析過 程中的介質(zhì)效應(yīng)，如離子抑制等。2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍（ Calibration Curve ）標(biāo)準(zhǔn)曲線反映了所測定物質(zhì)濃度與儀器響應(yīng)值之間的關(guān)系，一般用回 歸分析方法（如用加權(quán)最小二乘法）所得的回歸方程來評價。應(yīng)提供標(biāo)準(zhǔn)曲線

15、的線性方程和相關(guān)系數(shù)，說明其線性相關(guān)程度。標(biāo)準(zhǔn)曲線高低濃度范 圍為定量范圍，在定量范圍內(nèi)濃度測定結(jié)果應(yīng)達(dá)到試驗要求的精密度和準(zhǔn)確度。配制標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)使用與待測樣品相同生物介質(zhì)，不同生物樣品應(yīng)制備 各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)濃度個數(shù)取決于分析物可能的 濃度范圍和分析物/響應(yīng)值關(guān)系的性質(zhì)。必須至少用6個濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線， 對于非線性相關(guān)可能需要更多濃度點。定量范圍要能覆蓋全部待測的生物 樣品濃度范圍，不得用定量范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。建立標(biāo) 準(zhǔn)曲線時應(yīng)隨行空白生物樣品，但計算時不包括該點，僅用于評價干擾。標(biāo)準(zhǔn)曲線各濃度點的實測值與標(biāo)示值之間的偏差*在可接受的范圍之內(nèi)時，可判定標(biāo)

16、準(zhǔn)曲線合格?？山邮芊秶话阋?guī)定為最低濃度點的偏差在i20%以內(nèi)，其余濃度點的偏差在 M5%以內(nèi)。只有合格的標(biāo)準(zhǔn)曲線才能對臨床待I 11 I測樣品進(jìn)行定量計算。當(dāng)線性范圍較寬的時候，推薦采用加權(quán)的方法對標(biāo) 二l r r ?準(zhǔn)曲線進(jìn)行計算，以使低濃度點計算得比較準(zhǔn)確。(注：*偏差=【(實測值標(biāo)示值)/標(biāo)示值】X100%)2.3 定量下限(Lower Limit of quantitation , LLOQ )定量下限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點，表示測定樣品中符合準(zhǔn)確度和精密度要求的最低藥物濃度。 LLOQ應(yīng)能滿足測定35個消除半衰期時樣品 中的藥物濃度或能檢測由Cmax白1/101/20時的藥物濃度

17、。其準(zhǔn)確度應(yīng)在真 實濃度的80%120%范圍內(nèi)，相對標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)應(yīng)小于20%。應(yīng)至少由5個標(biāo)準(zhǔn)樣品測試結(jié)果證明。2.4 精密度與準(zhǔn)確度(Precision and Accuracy)精密度是指在確定的分析條件下，相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列測量值的分散程度。通常用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間RSD來考察方法的精確度。一般RSD應(yīng)小于15%,在LLOQ附近 RSD應(yīng)小于20%。準(zhǔn)確度是指在確定的分析條件下，測得的生物樣品濃度與真實濃度的 接近程度(即質(zhì)控樣品的實測濃度與真實濃度的偏差)，重復(fù)測定已知濃度分析物樣品可獲得準(zhǔn)確度。一般應(yīng)85%115%范圍內(nèi)，在LLOQ附近應(yīng)在80%120%范圍內(nèi)。一般

18、要求選擇高、中、低 3個濃度的質(zhì)控樣品同時進(jìn)行方法的精密度 和準(zhǔn)確度考察。低濃度選擇在LLOQ的3倍以內(nèi)，高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的 上限，中間選一個濃度。在測定批內(nèi)精密度時，每一濃度至少制備并測定 5個樣品。為獲得批間精密度應(yīng)至少在不同天連續(xù)制備并測定3個合格的分析批(Analytical run/Analytical batch),至少 45個樣品。 12.5 樣品穩(wěn)定性(Stability) 二> YJl j - 17 'J 1 |根據(jù)具體情況，對含藥生物樣品在室溫、冰凍或凍融條件下以及不同 二"l l r "?存放時間進(jìn)行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條

19、件和時間。還應(yīng)注意 考察儲備液的穩(wěn)定性以及樣品處理后的溶液中分析物的穩(wěn)定性，以保證檢 測結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。2.6 提取回收率從生物樣本基質(zhì)中回收得到分析物質(zhì)的響應(yīng)值除以純標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生的響應(yīng)值即為分析物的提取回收率。也可以說是將供試生物樣品中分析物提取由來供分析的比例。應(yīng)考察高、中、低3個濃度的提取回收率，其結(jié)果應(yīng)當(dāng)精密和可重現(xiàn)。2.7 微生物學(xué)和免疫學(xué)方法確證上述分析方法確證主要針對色譜法，很多參數(shù)和原則也適用于微生物學(xué)或免疫學(xué)分析，但在方法確證中應(yīng)考慮到它們的一些特殊之處。微生物學(xué)或免疫學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線本質(zhì)上是非線性的，所以應(yīng)盡可能采用比化學(xué) 分析更多的濃度點來建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果的準(zhǔn)確度是

20、關(guān)鍵的因素，如果重 復(fù)測定能夠改善準(zhǔn)確度，則應(yīng)在方法確證和未知樣品測定中采用同樣的步驟。3 .方法學(xué)質(zhì)控11"_只有在生物樣本分析方法確證完成之后才能開始測定未知樣品。在測定生物樣品中的藥物濃度時應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制，以保證所建立的方法在實際 應(yīng)用中的可靠性。推薦由獨立的人員配制不同濃度的質(zhì)控樣品對分析方法進(jìn)行考核。每個未知樣品一般測定一次，必要時可進(jìn)行復(fù)測。生物等效性試驗中，來自同一個體的生物樣品最好在同一批中測定。每個分析批生物樣品測定 .1 I I二一一一 一、 I> |時應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測定高、中、低三個濃度的質(zhì)控樣品。每 二"l l r "?個

21、濃度至少雙樣本，并應(yīng)均勻分布在未知樣品測試順序中。當(dāng)一個分析批 產(chǎn).jrC二宓川1. I y ：中未知樣品數(shù)目較多時，應(yīng)增加各濃度質(zhì)控樣品數(shù)，使質(zhì)控樣品數(shù)大于未知樣品總數(shù)的5%。質(zhì)控樣品測定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于15%,低濃度點偏差一般應(yīng)小于20%,最多允許1/3的質(zhì)控樣品結(jié)果超過上述限度，但不能由 現(xiàn)在同一濃度質(zhì)控樣品中。如質(zhì)控樣品測定結(jié)果不符合上述要求，則該分析批樣品測試結(jié)果作廢。濃度高于定量上限的樣品，應(yīng)采用相應(yīng)的空白介質(zhì)稀釋后重新測定。對于濃度低于定量下限的樣品，在進(jìn)行藥代動力學(xué)分析時，在達(dá)到 Cmax 以前取樣的樣品應(yīng)以零值計算，在達(dá)到Cmax以后取樣的樣品應(yīng)以無法定量(Not det

22、ectable, ND )計算，以減小零值對 AUC計算的影響。4 .分析數(shù)據(jù)的記錄與保存分析方法的有效性應(yīng)通過實驗證明。在臨床報告中，應(yīng)提供完成這些 實驗工作的相關(guān)的詳細(xì)資料。建立一般性和特殊性標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、保存完 整的實驗記錄是分析方法有效性的基本要素。生物分析方法建立中產(chǎn)生的 數(shù)據(jù)和質(zhì)控樣品測試結(jié)果應(yīng)全部記錄并妥善保存，并提供足夠的可供評價的方法學(xué)建立和樣品分析的數(shù)據(jù)。至少應(yīng)當(dāng)提供的數(shù)據(jù)包括：4.1 方法建立的數(shù)據(jù)分析方法的詳細(xì)描述；儀器設(shè)備、分析條件；該方法所用對照品（被 測藥物、代謝物、內(nèi)標(biāo)物）的純度和來源；描述測定特異性、準(zhǔn)確度、精 密度、回收率、定量限、標(biāo)準(zhǔn)曲線的實驗并給由獲得的

23、主要數(shù)據(jù)列表；列 由批內(nèi)批間精密度和準(zhǔn)確度的詳細(xì)結(jié)果；描述穩(wěn)定性考察及相關(guān)數(shù)據(jù)；根據(jù)具體情況提供代表性的色譜圖或質(zhì)譜圖并加以說明。;'. I I> Yd - - ） *,，4.2 樣品分析的數(shù)據(jù)二“l(fā) l r ?樣品處理和保存的情況；分析樣品時標(biāo)準(zhǔn)曲線列表；用于計算結(jié)果的 X 卡".尸 'T：回歸方程；各分析批質(zhì)控樣品測定結(jié)果綜合列表并計算批內(nèi)和批間精密度、 準(zhǔn)確度；各分析批包括的未知樣品濃度計算結(jié)果。提供100%受試者樣品測試的色譜圖復(fù)印件，包括相應(yīng)分析批的標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控樣品的色譜圖復(fù)印件。注明缺失樣品的原因，重復(fù)測試的結(jié)果。對舍棄任何分析數(shù)據(jù)和選擇 所報告的

24、數(shù)據(jù)說明理由。4.3 其他相關(guān)信息項目編號、分析方法編號、分析方法類型、分析方法確證進(jìn)行簡化的 理由、以及相應(yīng)的項目計劃編號、標(biāo)題等。(二)實驗設(shè)計與操作1 .交叉設(shè)計交叉設(shè)計是目前應(yīng)用最多最廣的方法，因為多數(shù)藥物吸收和清除在個 體之間均存在很大變異，個體間的變異系數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于個體內(nèi)變異系數(shù)，因 此生物等效性研究一般要求按自身交叉對照的方法設(shè)計。把受試對象隨機(jī) 分為幾組，按一定順序處理，一組受試者先服用受試制劑，后服用參比制 、 '1劑；另一組受試者先服用參比制劑，后服用受試制劑。兩順序間應(yīng)有足夠 長的間隔時間，為清洗期( Wash-out Period)。這樣，對每位受試者都連 續(xù)接受

25、兩次或更多次的處理，相當(dāng)于自身對照，可以將制劑因素對藥物吸 收的影響與其他因素區(qū)分開來，減少了不同試驗周期和個體間差異對試驗 結(jié)果的影響。根據(jù)試驗制劑數(shù)量不同一般采用 2X2交叉、3必交叉等設(shè)計。如果是兩 - -sI I門.j ! *111種制劑比較，雙處理、雙周期，兩序列的交叉設(shè)計是較好的選擇。如試驗 二"l l r "?包括3個制劑(受試制劑2個和參比制劑1個)時，宜采用3制劑3周期二重3毛 拉丁方試驗設(shè)計。各周期間也應(yīng)有足夠的清洗期。設(shè)定清洗期是為了消除兩制劑的互相干擾，避免上個周期內(nèi)的處理影響到隨后一周期的處理中。清洗期一般不應(yīng)短于7個消除半衰期。但有些 &

26、 X 藥物或其活性代謝物半衰期很長時則難以按此方法設(shè)計實施，在此情況下可能需要考慮按平行組設(shè)計進(jìn)行，但樣本量可能要增加。而對于某些高變異性藥物(Highly Variable Drug ),根據(jù)具體情況，除采用增加例數(shù) 的辦法外，可采用重復(fù)交叉設(shè)計，對同一受試者兩次接受同一制劑時可能存在的個體內(nèi)差異進(jìn)行測定。2 .受試者的選擇2.1 受試者入選條件：受試者的選擇應(yīng)當(dāng)盡量使個體間差異減到最小，以便能檢測由制劑問 的差異。試驗方案中應(yīng)明確入選和剔除條件。一般情況應(yīng)選擇男性健康受 試者。特殊作用的藥品，則應(yīng)根據(jù)具體情況選擇適當(dāng)受試者。選擇健康女 性受試者應(yīng)避免懷孕的可能性。如待測藥物存在已知的不良反

27、應(yīng)，可能帶來安全性擔(dān)憂，也可考慮選擇患者作為受試者。年齡:一般1840周歲，同一批受試者年齡不宜相差10歲以上。體重：正常受試者的體重一般不應(yīng)低于50kg。按體質(zhì)指數(shù)(BodyMassindex , BMI)=體重(kg) /身高2 (m2)計算，一般應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)體重范 圍內(nèi)。同一批受試者體重(kg)不宜懸殊過大，因為受試者服用的藥物劑 量是相同的。受試者應(yīng)經(jīng)過全面體檢，身體健康，無心、肝、腎、消化道、神經(jīng)系v.i F-1.- -.、)、 i |統(tǒng)、精神異常及代謝異常等病史；體格檢查示血壓、心率、心電圖、呼吸 二"l l r "?狀況、肝、腎功能和血象無異常，避免藥物體內(nèi)過程受

28、到疾病干擾。根據(jù) 產(chǎn)_I y )藥物類別和安全性情況，還應(yīng)在試驗前、試驗期間、試驗后進(jìn)行特殊項目 檢查，如降糖藥應(yīng)檢查血糖水平。為避免其他藥物干擾，試驗前兩周內(nèi)及試驗期間禁服任何其他藥物。 號.> 產(chǎn)1實驗期間禁煙、酒及含咖啡因的飲料，或某些可能影響代謝的果汁等，以 免干擾藥物體內(nèi)代謝。受試者應(yīng)無煙、酒嗜好。如有吸煙史，在討論結(jié)果 時應(yīng)考慮可能的影響。如已知藥物存在遺傳多態(tài)性導(dǎo)致代謝差異，應(yīng)考慮受試者由于慢代謝 可能由現(xiàn)的安全性等問題。2.2 受試者例數(shù)受試者例數(shù)應(yīng)當(dāng)符合統(tǒng)計學(xué)要求，對于目前的統(tǒng)計方法，18 24例可滿足大多數(shù)藥物對樣本量的要求，但對某些變異性大的藥物可能需要適當(dāng)增加例數(shù)

29、。一個臨床試驗的例數(shù)多少是由三個基本因素決定的：（1）顯著性水平：即 遁的大小，通常取 0.05或5%; （2）把握度：即1-3值的大小， 一般定為不小于 80%,其中 昵犯第n類錯誤的概率，也就是把實際有效 、4»I 誤判為無效的概率；（3）變異性（cv%）和差別（e）:兩藥等效性檢驗 中檢測指標(biāo)的變異性和差別越大所需例數(shù)越多。在試驗前并不知道酥口CV%,只能根據(jù)已有的參比制劑的上述參數(shù)來估算或進(jìn)行預(yù)試驗。另外， 當(dāng)一個生物利用度試驗完成后，可以根據(jù)& CV%和把握度等參數(shù)來求 N值，并與試驗所選擇例數(shù)進(jìn)行對比，檢驗試驗所采用例數(shù)是否合適。2.3 受試者分組必須采用隨機(jī)方法

30、分組，各組間應(yīng)具有可比性。 二l r rT "?3 .受試制劑和參比制劑 （Test Product and Reference Product ,T and R ）參 X-坷*一I y ）比制劑的質(zhì)量直接影響生物等效性試驗結(jié)果的可靠性，參比制劑的選擇應(yīng) 遵循總局仿制藥質(zhì)量一致性評價工作辦公室發(fā)布的相關(guān)指導(dǎo)原則的要求。參比制劑和受試制劑含量差別不能超過5% o鼠 產(chǎn)*對于受試制劑，應(yīng)為符合現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的中試 /生產(chǎn)規(guī)模的產(chǎn)品。應(yīng)提 供該制劑的體外溶生度、穩(wěn)定性、含量或效價測定、批間一致性報告等，供試驗單位參考。個別藥物尚需提供多晶型及光學(xué)異構(gòu)體的資料。參比制劑和受試制劑均應(yīng)注明研制單

31、位、批號、規(guī)格、保存條件、有 效期。試驗結(jié)束后受試制劑和參比制劑應(yīng)保留足夠長時間直到產(chǎn)品一致性評價以備查。4 .給藥劑量進(jìn)行藥物制劑生物利用度和生物等效性研究時，給藥劑量一般應(yīng)與臨 床單次用藥劑量一致，不得超過臨床推薦的單次最大劑量或已經(jīng)證明的安 全劑量。受試制劑和參比制劑一般應(yīng)服用相等劑量，需要使用不相等劑量 時，應(yīng)說明理由并提供所用劑量范圍內(nèi)的線性藥代動力學(xué)特征依據(jù)，結(jié)果 可以劑量校正方式計算生物利用度。一般情況下普通制劑僅進(jìn)行單劑量給藥研究即可，但在某些情況下可能需要考慮進(jìn)行多次給藥研究，如：（1）受試藥單次服用后原形藥或活性代謝物濃度很低，難以用相應(yīng)分析方法精密測定血藥濃度時；（2）受

32、試藥的生物利用度有較大個體差異；（3）藥物吸收程度相差不大，但吸收速度有較大差異；（4）緩控釋制劑。進(jìn)行多次給藥研究應(yīng)按臨床推薦 I>TJl' ll | 1> |的給藥方案給藥，至少連續(xù) 3次測定谷濃度確定血藥濃度達(dá)穩(wěn)態(tài)后選擇一 二l r rT "?個給藥間隔取樣進(jìn)行測定，并據(jù)此計算生物利用度。5 .取樣取樣點的設(shè)計對保證試驗結(jié)果可靠性及藥代動力學(xué)參數(shù)計算的合理 性，均有十分重要的意義。通常應(yīng)有預(yù)試驗或參考國內(nèi)外的藥代文獻(xiàn)，為 加 1. 合理設(shè)計采樣點提供依據(jù)。 應(yīng)用血藥濃度測定法時， 一般應(yīng)兼顧到吸收相、 平衡相（峰濃度）和消除相。在藥物濃度一時間曲線各時相及預(yù)

33、計達(dá)峰時間前后應(yīng)有足夠采樣點，使?jié)舛?一時間曲線能全面反應(yīng)藥物在體內(nèi)處置的 全過程。服藥前應(yīng)先取空白血樣。一般在吸收相部分取23個點，峰濃度附近至少需要3個點，消除相取35個點。盡量避免第一個點即為 Cmax, 預(yù)試驗將有助于避免這個問題。采樣持續(xù)到受試藥原形或其活性代謝物35個半衰期時，或至血藥濃度為 Cmax的1/101/20, AUC0-t/AUC0- 8通 常應(yīng)當(dāng)大于80%。對于長半衰期藥物，應(yīng)盡可能取樣持續(xù)到足夠比較完整的吸收過程， 因為末端消除項對該類制劑吸收過程的評價影響不大。多次給藥研究中， 對于一些已知生物利用度受晝夜節(jié)律影響的藥物，則應(yīng)該連續(xù)24小時取樣,當(dāng)受試藥不能用血藥

34、濃度測定方法進(jìn)行生物利用度檢測時，若該藥原 ，11 -_形或活性代謝物主要由尿排泄（大于給藥劑量的70%）,可以考慮尿藥法測定，以尿樣中藥物的累積排泄量來反映藥物攝入量。試驗藥品和試驗方案應(yīng)當(dāng)符合生物利用度測定要求。尿樣的收集采用分段收集法，其采集頻度、間隔時間應(yīng)滿足估算受試藥原形藥或活性代謝物經(jīng)尿的排泄程度。但該方法不能反映藥物吸收速度，誤差因素較多，一般不提倡采用。某些藥物在體內(nèi)迅速代謝無法測定生物樣品中原形藥物，也可采用測 定生物樣品中主要代謝物濃度的方法，進(jìn)行生物利用度和生物等效性試驗。二l r rT "?6 .藥代動力學(xué)參數(shù)計算 產(chǎn).*', '' &

35、quot;二,三一j y ）一般用非房室數(shù)學(xué)模型分析方法來估算藥代動力學(xué)參數(shù)。用房室模型方法估算藥代參數(shù)時，采用不同的方法或軟件其值可能有較大差異。研究 者可根據(jù)具體情況選擇使用，但所用軟件必須經(jīng)確證并應(yīng)在研究報告中注號 廣卡明所用軟件。在生物等效性研究中，其主要測量參數(shù)Cmax和Tmax土勻以實測值表示。AUCOt以梯形法計算，故受數(shù)據(jù)處理程序影響不大。7 .研究過程標(biāo)準(zhǔn)化整個研究過程應(yīng)當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)化，以使得除制劑因素外，其他各種因素導(dǎo)致的體內(nèi)藥物釋放吸收差異減少到最小，包括受試者的飲食、活動都應(yīng)控制。試驗工作應(yīng)在I期臨床試驗觀察室進(jìn)行。受試者應(yīng)得到醫(yī)護(hù)人員的監(jiān)護(hù)。受試期間發(fā)生的任何不良反應(yīng)，均應(yīng)

36、及時處理和記錄，必要時停止試驗。（三）數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析1 .數(shù)據(jù)表達(dá)BA和BE研究必須提供所有受試者各個時間點受試制劑和參比制劑的 藥物濃度測定數(shù)據(jù)、每一時間點的平均濃度（Mean）及其標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）,提供每個受試者的濃度 一時間曲線（C-T曲線） 和平均C-T曲線以及C-T曲線各個時間點的標(biāo)準(zhǔn)差。不能隨意剔除任何數(shù)據(jù)。 脫落者的數(shù)據(jù)一般不可用其他數(shù)據(jù)替代。2 .藥代動力學(xué)參數(shù)2.1 單次給藥的BA和BE研究，提供所有受試者服用受試制劑和參比制齊I的 AUCSt , AUCOoo、Cmax、Tmax、t1/2、CL、Vd、F等參數(shù)及其平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。1丁, > r

37、JJl 1 j 一 ' i? 'l |Cmax和Tmax均以實測值表示。 AUCSt以梯形法計算；AUCOoo按 二l r rT "?公式計算：AUCOoo =AUC0t +Ct/ Z （t為最后一次可實測血藥濃度的 產(chǎn)5C1,二*/I采樣時間；Ct為末次可測定樣本藥物濃度；入系對數(shù)濃度-時間曲線末端直線部份求得的末端消除速率常數(shù)，可用對數(shù)濃度-時間曲線末端直線部分的斜率求得；t1/2用公式t1/2 = 0.693/人計算。以各個受試者受試制劑（T）和參比制劑（R）的AUCSt按下式分別 計算其相對生物利用度（F）值：當(dāng)受試制劑和參比制劑劑量相同時：F=AUCT/AU

38、CR< 100%受試制劑和參比制劑劑量不同時，若受試藥物具備線性藥代動力學(xué)特征， 可按下式以齊I量予以校正：F= AUCTX DR/AUCR< DT1 X100% （AUCT、AUCR 分另I為T和R的AUC ; DR、 DT分另為T和R的齊U量）。2.2 .2對于多次給藥的BA和BE研究，提供受試制劑和參比制劑的三次 谷濃度數(shù)據(jù)（Cmin）,達(dá)穩(wěn)態(tài)后的 AUCss Css-max、Css-min、T ss-max、 t1/2、F、DF等參數(shù)。當(dāng)受試制劑與參比制劑劑量相等時，F(xiàn)值按下式計算：F = AUCss T/AUCss RX100% （式中 AUCss T和AUCss R 分

39、另為 T和R穩(wěn)態(tài)條件下的AUC） ' % r-3 .統(tǒng)計分析3.1 對數(shù)轉(zhuǎn)換評價BE的藥代動力學(xué)參數(shù) AUCCHt和Cmax在進(jìn)行等效性檢驗前必須 作對數(shù)轉(zhuǎn)換。當(dāng)數(shù)據(jù)有偏倚時經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換可校正其對稱性。此外，統(tǒng)計中數(shù)據(jù)對比宜用比值法而不用差值法 ，通過對數(shù)轉(zhuǎn)換，可實現(xiàn)將均值之比置信區(qū) 間轉(zhuǎn)換為對數(shù)形式的均值之差的計算。 :I II； T Ji E T 11 |3.2 等效判斷標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前普遍采用主要藥代參數(shù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后以多因素方差分析（ANOVA ）進(jìn)行 顯著性檢驗，然后用雙單側(cè)t檢驗和計算90%置信區(qū)間的統(tǒng)計分析方法來評 價和判斷藥物間的生物等效性。方差檢驗是顯著性檢驗，設(shè)定的無效假設(shè)是兩

40、藥無差異，檢驗方式為是與否，在P<0.05時認(rèn)為兩者差異有統(tǒng)計意義，但不一定不等效；P>0.05時認(rèn)為兩藥差異無統(tǒng)計意義，但P>0.05并不能認(rèn)為兩者相等或相近。在生物利用度試驗中，采用多因素方差分析（ ANOVA ）進(jìn)行統(tǒng)計分析，以判 斷藥物制劑間、個體間、周期間和服藥順序間的差異。在生物等效性實驗中，方差分析可提示誤差來源，為雙單側(cè)t檢驗計算提供了誤差值（MSE）。雙單側(cè)t檢驗及（1 2 a） %置信區(qū)間法是目前生物等效檢驗的唯一標(biāo)準(zhǔn)。雙向單側(cè)t檢驗是等效性檢驗， 設(shè)定的無效假設(shè)是兩藥不等效，受試制劑在參比制劑一定范圍之外，在 P<0.05時說明受試制劑沒有超過規(guī)定

41、的參 比制劑的高限和低限，拒絕無效假設(shè)，可認(rèn)為兩藥等效。（12 a） %置信區(qū)間是雙單側(cè)t檢驗另一種表達(dá)方式。其基本原理是在高、低2個方向?qū)κ茉囍苿┑膮?shù)均值與高低界值之間的差異分別作單側(cè)t檢驗，若受試制劑均數(shù)在高方向沒有大于等于參比制劑均數(shù)的125% （PV0.05）,且在低方向也沒有小于等于參比制劑均數(shù)的80% （PV0.05）,即在兩個方向的單側(cè)t檢驗，都能以95%的置信區(qū)間確認(rèn)沒有超生規(guī)定范圍，則可認(rèn)為受試制劑與參比制劑生物等效。等效判斷標(biāo)準(zhǔn)，一般規(guī)定，經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后的受試制劑的 AUCOt在參 比制劑的80%125%范圍，受試制劑的Cmax在參比制劑的80%125%范 圍。根據(jù)雙單側(cè)檢

42、驗的統(tǒng)計量，同時求得（ 12 a） %置信區(qū)間，如在規(guī)定I 1'* I范圍內(nèi)，即可有12曲概率判斷兩藥生物等效。 二l r rT "?如有必要時，應(yīng)對Tmax經(jīng)非參數(shù)法檢驗，如無差異，可以認(rèn)定受試制 劑與參比制劑生物等效。（四）結(jié)果評價生物等效性是指一種藥物的不同制劑在相同的實驗條件下，給予相同劑量，其吸收程度和吸收速度沒有明顯差異。故對受試制劑與參比制劑的生物等效性評價，應(yīng)從藥物吸收程度和吸收速度兩方面進(jìn)行，評價反映這兩方面的3個藥代動力學(xué)參數(shù)即 AUCCHt、Cmax和Tmax是否符合前述等效示準(zhǔn)。目前比較肯定AUC對藥物吸收程度的衡量作用，而Cmax、Tmax依賴取樣時

43、間的安排，用它們衡量吸收速率有時是不夠準(zhǔn)確的，不適合用于具有多峰現(xiàn)象的制劑及個體變異大的實驗。故在評價時，若由現(xiàn)某些不等效 特殊情況，需具體問題加以具體分析。對于AUC , 一般要求90%可信區(qū)間在80%125%范圍內(nèi)。對于治療 窗窄的藥物，這個范圍可能應(yīng)適當(dāng)縮小，而在極少數(shù)情況下，如果經(jīng)臨床 證實合理的情況下，也可以適當(dāng)放寬范圍。 對Cmax也是如此。而對于Tmax, 一般在釋放快慢與臨床療效和安全性密切相關(guān)時需要統(tǒng)計評價，具等效范 、11 -_圍可根據(jù)臨床要求來確定。對于由現(xiàn)受試制劑生物利用度高于參比制劑的情況，即所謂超生物利 用，可以考慮兩種情況：1）參比制劑是否本身生物利用度低的產(chǎn)品，

44、因 而受試制劑表現(xiàn)由生物利用度相對較高；2）參比制劑質(zhì)量符合要求，受試制劑確實超生物利用度。結(jié)果的評價應(yīng)結(jié)合研究目的由發(fā)，進(jìn)行生物等效性評價的目的提供兩 i? I 11 I制劑可替換使用的依據(jù)；進(jìn)行生物利用度研究，則主要分析獲得的相對生 二l r rT "?物利用度數(shù)值進(jìn)一步指導(dǎo)確定新劑型的臨床使用劑量。（五）BE研究報告內(nèi)容為了滿足評價的需求，一份生物等效性研究臨床報告內(nèi)容至少應(yīng)包括 以下內(nèi)容：（1）實驗?zāi)康?；?）生物樣本分析方法的建立和考察的數(shù)據(jù)， X 提供必要的圖譜；（3）詳細(xì)的實驗設(shè)計和操作方法，包括全部受試者的資料、樣本例數(shù)、參比制劑、給藥劑量、服藥方法和采樣時間安排；（

45、4）原始測定未知樣品濃度全部數(shù)據(jù)， 每個受試者藥代參數(shù)和藥時曲線； （5） 采用的數(shù)據(jù)處理程序和統(tǒng)計分析方法以及詳細(xì)統(tǒng)計過程和結(jié)果；（6）服藥后的臨床不良反應(yīng)觀察結(jié)果， 受試者中途退由和脫落記錄及原因； （7） 生物利用度或生物等效性結(jié)果分析以及討論；（ 8）參考文獻(xiàn)。正文前應(yīng)有簡短摘要；正文末，應(yīng)注明實驗單位、研究負(fù)責(zé)人、參加實驗人員，并 簽名蓋章，以示對研究結(jié)果負(fù)責(zé)。五、復(fù)方制劑對復(fù)方化學(xué)藥品制劑生物等效性研究，一般情況下某一成分的體內(nèi)行 為不能說明其他成分的體內(nèi)行為，故原則上應(yīng)證實每一個有效成分的生物 等效性。試驗設(shè)計時應(yīng)盡量兼顧各個成分的特點。六、結(jié)語生物利用度和生物等效性研究只是作為

46、一個驗證制劑質(zhì)量的方法學(xué) 手段。受試制劑能否達(dá)到預(yù)期的生物利用度，受試制劑是否能達(dá)到與原研 制劑或其他已經(jīng)過臨床試驗證明了安全與有效藥物的生物等效，都應(yīng)該從 最開始的處方篩選、生產(chǎn)工藝條件以及質(zhì)量研究等方面著手，盡可能分析 原研制劑或參比制劑的有關(guān)文獻(xiàn)，以實現(xiàn)研究目的。七、名詞解釋二l r rT "?介質(zhì)效應(yīng)：由于樣品中存在干擾物質(zhì)，對響應(yīng)造成的直接或間接的影響 標(biāo)準(zhǔn)樣品(StandardSample):在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算質(zhì)控樣品和未知樣品中分析物濃度。質(zhì)控樣品(Quality Control Sample ):質(zhì)控樣品系將已知量的待測藥 .：