乙肝五項最新課件

1、乙肝五項最新乙肝病毒五項檢測乙肝病毒五項檢測(jin c)(jin c) 第一頁，共十七頁。乙肝五項最新雙抗體(kngt)夾心法乙型肝炎病毒表面抗原乙型肝炎病毒表面抗原乙型肝炎病毒表面乙型肝炎病毒表面(biomin)抗抗體體乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒e抗原抗原乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒e抗體抗體乙型肝炎病毒核心抗體乙型肝炎病毒核心抗體雙抗體(kngt)夾心法雙抗原夾心法競爭抑制法競爭抑制法乙肝病毒五項檢測乙肝病毒五項檢測 第二頁，共十七頁。乙肝五項最新乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒(bngd)表面抗原表面抗原檢驗原理檢驗原理本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗原理。在微孔條上預(yù)包被純化乙肝表面抗體（

2、HBsAb），配以酶標(biāo)記抗體（HBsAb-HRP）及TMB顯色劑等其他試劑，檢測(jin c)人血清或血漿中的乙肝表面抗原（HBsAg）。第三頁，共十七頁。乙肝五項最新乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒(bngd)表面抗原表面抗原樣本要求樣本要求本試劑使用樣品為人血清或血漿，含有EDTA、檸檬酸鈉或肝素等抗凝劑的樣品可用于本實驗。不能檢測含疊氮鈉、懸浮纖維蛋白或聚集物、重度溶血(rn xu)的樣品。樣品中應(yīng)無微生物，可在28儲存一周，長期儲存應(yīng)低溫凍存，避免反復(fù)凍融。使用前請將樣品室溫平衡30分鐘以上，冷凍樣品實驗前需混勻。第四頁，共十七頁。乙肝五項最新乙型肝炎病毒(bngd)表面抗原檢驗方法檢驗方法配

3、液：將濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋。編號：將樣品對應(yīng)微孔板按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照孔3孔，陽性對照孔2孔和空白對照孔1孔。（用雙波長檢測，可不設(shè)空白對照孔）。稀釋：每孔加入樣品稀釋液20 L，空白對照孔除外。加樣：分別在相對應(yīng)孔中加入待測樣品或陰性、陽性對照100L，輕輕振蕩混勻。（非常重要）溫育：用封板膜封后，置371溫育602分鐘。（如有酶聯(lián)反應(yīng)加速(ji s)儀溫育時間可減半）。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50L，空白孔除外，輕輕振蕩混勻。溫育：用封板膜封后，置371溫育301分鐘。（如有酶聯(lián)反應(yīng)加速儀溫育時間可減半）。洗版：小心揭掉封板膜，用洗板機洗滌5遍，拿出來在扣在洗版紙上重

4、重拍干。顯色：每孔加入顯色劑A、B液（底物）各50L，輕輕振蕩混勻，371避光顯色30分鐘。測定：每孔加入終止液50L，輕輕振蕩混勻，十分鐘內(nèi)測定結(jié)果。設(shè)定酶標(biāo)儀波長于450nm處（建議用雙波長450um/600650nm），用空白孔凋零點后測定各孔A值。第五頁，共十七頁。乙肝五項最新乙型肝炎病毒(bngd)表面抗原 第六頁，共十七頁。乙肝五項最新乙型肝炎病毒(bngd)表面抗原注意事項注意事項本樣品僅用于體外診斷，操作應(yīng)按說明說嚴(yán)格進行。封板膜不能重復(fù)使用，不同批號、酶標(biāo)試劑和陰性對照不可混用，不能與其它廠家試劑混用。避免在有揮發(fā)性物質(zhì)及次氯酸類消毒液（如84消毒液）的環(huán)境下操作。使用前請將

5、試劑平穩(wěn)至室溫（平衡30分鐘以上），實驗前將試劑輕輕振蕩混勻，使用后立即回放28。未用完的微孔板條與干燥劑一起用自封袋密封28保存。過期試劑請勿使用。加液時必須用加樣器，并經(jīng)常校對加樣器的準(zhǔn)確性。加入不同樣品或不同試劑組份時，應(yīng)更換加樣器的吸頭和加樣槽，以防止出現(xiàn)交叉污染。洗滌時各孔均勻(jnyn)需加滿洗液，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。使用洗板機應(yīng)設(shè)定3060秒浸泡時間。在洗版結(jié)束后，必須立即進行下一步，不可使用酶標(biāo)板干燥。避免長時間的中斷實驗步驟，以確保每孔實驗條件的均一。結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。讀取結(jié)果時，應(yīng)擦干酶標(biāo)板底部，且孔內(nèi)不能有氣泡。不要觸碰孔底部的外壁，指引或劃痕可能影響板

6、孔的讀值。所有樣品、廢液和廢棄物都應(yīng)按照傳染物處理。終止液為硫酸，使用時必須注意安全。顯色時必須先加顯色劑A液后再加顯色劑B液，以免顯色過低。由于ELISA反應(yīng)原理的限制，本試劑檢測陰性并不排除HBV（乙型肝炎）感染的可能。檢測的陽性結(jié)果必須結(jié)合臨床信息進行分析。第七頁，共十七頁。乙肝五項最新乙型肝炎病毒表面(biomin)抗體【檢驗原理】 本試劑采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附實驗原理。在微孔條上預(yù)包被乙肝表面抗原（HBsAg），加入待測樣品及酶標(biāo)抗原（HBsAg-HRP）試劑進行溫育。樣品中的HBsAb與包被抗原和酶標(biāo)抗原形成“包被抗原-抗體-酶標(biāo)抗原”復(fù)合物。洗板后加入顯色劑（TMB），復(fù)合物

7、上連接的HRP催化顯色劑反應(yīng)，生成藍色產(chǎn)物(chnw)，終止反應(yīng)后為黃色。若樣品中乙無型肝炎表面抗體時，不顯色。第八頁，共十七頁。乙肝五項最新乙型肝炎病毒(bngd)表面抗體【檢驗方法】配液：將濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20稀釋。編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照3孔，陽性對照2孔和空白對照1孔（用雙波長檢測，可不設(shè)空白對照孔）。加樣：分別在相應(yīng)孔中加入待測樣品及陰、陽性對照各50ul。加霉：每孔加入酶標(biāo)試劑(shj)50ul，空白孔除外，輕輕震蕩混勻。溫育：用封板膜封板后，置于37溫育30分鐘。洗滌：小心揭掉封板莫，用洗板機洗滌5遍，最后一次盡量扣干。顯色：每孔加入顯色劑A、B

8、液各50ul，輕輕震蕩混勻，37避光顯色15分鐘。測定：每孔加終止液50ul，輕輕震蕩混勻，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。第九頁，共十七頁。乙肝五項最新乙型肝炎病毒(bngd)e抗體檢驗原理：本試劑采用競爭抑制酶聯(lián)免疫法吸附(xf)法實驗原理，在微孔板上預(yù)包被乙肝e抗原，加入待測樣品及酶標(biāo)抗體（HBeAb-HRP）試劑進行溫育，酶標(biāo)抗體和樣品中的HBeAb競爭酶標(biāo)板上的包被抗原。若樣本中無乙型肝炎e抗體時，酶標(biāo)抗體與包被抗原結(jié)合形成“包被抗原-酶標(biāo)抗體”復(fù)合物，洗板后加入顯色劑（TMB），復(fù)合物上連接的HRP催化顯色劑反應(yīng)，生產(chǎn)藍色產(chǎn)物，終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色。若樣本中存在乙型肝炎e抗體時，會與酶標(biāo)抗體競爭

9、形成“包被抗原-抗體”復(fù)合物，不顯色。第十頁，共十七頁。乙肝五項最新乙型肝炎病毒(bngd)e抗體檢驗方法：配液：將濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水配液：將濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋。倍稀釋。編號：將樣品對應(yīng)微孔板按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照編號：將樣品對應(yīng)微孔板按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照3孔，陽性對照孔，陽性對照2孔和空孔和空白對照白對照1孔（用雙波長檢測，可不設(shè)空白對照孔）?？祝ㄓ秒p波長檢測，可不設(shè)空白對照孔）。加樣：分別在相應(yīng)孔中加入待測樣品及陰、陽性對照各加樣：分別在相應(yīng)孔中加入待測樣品及陰、陽性對照各50l。加酶：每孔加人酶標(biāo)試劑加酶：每孔加人酶標(biāo)試劑50ul，空白孔除外，輕輕

10、振蕩混勻。，空白孔除外，輕輕振蕩混勻。溫育：用封板膜封板后置溫育：用封板膜封板后置37溫育溫育30min。洗滌：小心撕掉封板膜，用洗板機洗滌洗滌：小心撕掉封板膜，用洗板機洗滌5遍，最后一次盡量扣干。遍，最后一次盡量扣干。顯色顯色(xin s)：每孔加人顯色：每孔加人顯色(xin s)劑劑A、B液各液各50l，輕輕振蕩混勻，輕輕振蕩混勻，37避光顯色避光顯色15min。測定：每孔加終止液測定：每孔加終止液50l，輕輕振蕩混勻，輕輕振蕩混勻，10min內(nèi)測定結(jié)果。設(shè)定酶標(biāo)儀波長于內(nèi)測定結(jié)果。設(shè)定酶標(biāo)儀波長于450nm處（建議用雙波長處（建議用雙波長450nm/600-650nm檢測），用空白孔調(diào)零

11、點后測定各孔檢測），用空白孔調(diào)零點后測定各孔A值。值。第十一頁，共十七頁。乙肝五項最新乙型肝炎病毒(bngd)核心抗體乙型肝炎病毒核心抗體（抗-HBc）、e抗體（抗-HBe）檢測（1）抗-HBc檢測 先用生理鹽水將待測血清作1:30稀釋，然后取50l加入相應(yīng)的包被板（或條）中，同時設(shè)陽性、陰性及空白對照各一孔（對照血清不必稀釋）；再向每孔加入酶結(jié)合物50l（空白孔不加），再進行同1的操作。但結(jié)果觀察需反看：目測法是以不顯色（無色(w s)）孔為陽性；比色法是以標(biāo)本吸光度A值0.5N（陰性對照值）為陰性，標(biāo)本吸光度A值0.5N者判為陽性。第十二頁，共十七頁。乙肝五項最新乙肝五項的32種組合(zh)第十三頁，共十七頁。乙肝五項最新第十四頁，共十七頁。乙肝五項最新第十五頁，共十七頁。乙肝五項最新謝謝謝謝(xi xie)第十六頁，共十七頁。乙肝五項最新內(nèi)容(nirng)總結(jié)乙肝病毒五項檢測。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50