R2A瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查方案

1、R2A 瓊脂培養(yǎng)基適用性檢查方案文件編號(hào)：VP-QC-2015-05起草人：審核人：批準(zhǔn)人：批準(zhǔn)日期：年月日目錄1概述12驗(yàn)證目的及范圍13驗(yàn)證小組人員組成及職責(zé)14驗(yàn)證依據(jù)25驗(yàn)證前準(zhǔn)備26驗(yàn)證的實(shí)施27偏差處理58驗(yàn)證數(shù)據(jù)及評(píng)估59驗(yàn)證報(bào)告及評(píng)審510再驗(yàn)證及周期511驗(yàn)證文件及歸檔512附件51驗(yàn)證目的及范圍2015版中華人民共和國藥典中規(guī)定純化水的微生物限度檢查采用的培養(yǎng)基為R2A瓊脂培養(yǎng)基。 為了保證純化水微生物限度檢查的準(zhǔn)確性和可靠性， 需對(duì)該R2A瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行適用性檢查實(shí)驗(yàn)。2驗(yàn)證方法照2015版藥典非無菌產(chǎn)品產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法（通則1105）中“計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性

2、檢查”的胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查方法進(jìn)行，試驗(yàn)菌株為銅綠假單胞菌和枯草芽抱桿菌，應(yīng)符合規(guī)定。3.驗(yàn)證小組人員組成及職責(zé)：3.1驗(yàn)證小組由以下部門人員組成：質(zhì)量部、QG生產(chǎn)部。3.2驗(yàn)證小組組成及職責(zé)列表組成職責(zé)QC1.%2.負(fù)責(zé)起草驗(yàn)證方案的起草2.%2.負(fù)責(zé)本方案的培訓(xùn)3.%2.儀器儀表校驗(yàn)確認(rèn)4.%2.負(fù)責(zé)驗(yàn)證的實(shí)施5.%2.負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)的收集和整理6.%2.負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)分析7.%2.負(fù)責(zé)完成驗(yàn)證報(bào)告質(zhì)量部1.%2.%3.負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案、驗(yàn)證報(bào)告的審核與批準(zhǔn)2.%2.%3.負(fù)責(zé)驗(yàn)證現(xiàn)場的監(jiān)督審查生產(chǎn)部6.負(fù)責(zé)保障設(shè)備、器具的完好7.負(fù)責(zé)動(dòng)力系統(tǒng)的保障4驗(yàn)證接受標(biāo)準(zhǔn)被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)

3、與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.52范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致；被檢液體培養(yǎng)基管與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好。1 .驗(yàn)證前準(zhǔn)備驗(yàn)證人員培訓(xùn)：驗(yàn)證報(bào)告起草人有責(zé)任在方案批準(zhǔn)后（且在驗(yàn)證實(shí)施前）對(duì)本次驗(yàn)證相關(guān)人員進(jìn)行培訓(xùn)。培訓(xùn)人員記錄見附件1。將所有的平皿和稀釋劑都應(yīng)該嚴(yán)格按照相關(guān)的滅菌程序消毒，以確保其對(duì)試驗(yàn)的結(jié)果沒有影響。確認(rèn)儀器儀表設(shè)施經(jīng)過確認(rèn)和校驗(yàn)，并填寫確認(rèn)記錄。相關(guān)文件廳 P相關(guān)文件文件編號(hào)1DHG 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱操作規(guī)程WI-1002BSC-100-II-B2 生物安全柜操作和維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程WI-1013WXQI-S-18SI 自動(dòng)手提式滅菌

4、器使用和維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程WI-1034DK 型電熱恒溫水浴鍋操作規(guī)程WI-1045HWS 型恒溫恒濕箱操作規(guī)程WI-1056JA2003N 電子天平操作及維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程WI-1067PHS-3C 型 PH 計(jì)操作及維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程WI-1088SHP-3C 型低溫生化培養(yǎng)箱操作及維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程WI-1099YJ-875SDB 型凈化操作臺(tái)的操作及維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程WI-11310培養(yǎng)基管理規(guī)程WI-762 .驗(yàn)證的實(shí)施實(shí)驗(yàn)材料6.1.1培養(yǎng)基類別培喬基名稱廠家批號(hào)驗(yàn)證培喬基A2R瓊月日培力基對(duì)照培養(yǎng)基胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)埴儀器設(shè)備DHG型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、BSC-100-II-B2生物安全柜、WXQI-S-18

5、SI自動(dòng)手提式滅菌器、DK型電熱恒溫水浴鍋、HWS型恒溫恒濕箱（3035C）、JA2003N電子天平、PHS-3c型PH計(jì)、SHP-3c型低溫生化培養(yǎng)箱（2025C）、YJ-875SDB型凈化操作臺(tái)。稀釋劑：PH無菌氯化鈉-蛋白凍緩沖液計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基驗(yàn)證用菌株銅綠假單胞菌CMCC(B)10104枯草芽抱桿菌CMCC(B)63501滅菌前調(diào)節(jié)PH溶液：10%碳酸鈉溶液或1mol/L氫氧化鈉溶液/15%冰醋酸溶液或1mol/L鹽酸溶液。驗(yàn)證內(nèi)容培養(yǎng)基的配制滅菌過程將分裝包裝好的培養(yǎng)基分別放入滅菌器中121c滅菌15分鐘后取出。取1管已滅菌的培養(yǎng)基，放冷至25c測定pH值，應(yīng)在7.

6、260.2范圍內(nèi)。6.2.1.4外觀性狀滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)對(duì)其外觀性狀仔細(xì)檢查，如發(fā)現(xiàn)色澤異常、渾濁、橡膠塞被培養(yǎng)基沾染等，均應(yīng)挑出棄去。將制備好的培養(yǎng)基保存在225C、避光的環(huán)境中，在存放2周后，培養(yǎng)基外觀應(yīng)色澤正常，澄清透明。菌液制備接種銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌的培養(yǎng)物至胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基上，30?35c培養(yǎng)18?24小時(shí)。菌液計(jì)數(shù)(每種菌液接種2個(gè))分別取上述制備的銅綠假胞菌、枯草芽抱桿菌(50100cfu/ml)各1ml加入無菌培養(yǎng)皿，立即注入不超過45c胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基1520ml,混勻，凝固，置3035c培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)，計(jì)數(shù)每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平

7、皿。培養(yǎng)基適用性檢查分別取上述制備的銅綠假胞菌、枯草芽抱桿菌各1ml加入培養(yǎng)皿，每種菌液平行做2皿，立即注入不超過45c胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基1520ml,混勻，凝固，置3035c培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)；分別計(jì)數(shù)。同時(shí)取相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。取每管裝量為9ml的胰酪大豆豚液體培養(yǎng)基7支,分別接種小于(50100cfu/ml)的銅綠假胞菌、 枯草芽抱桿菌1ml各2支，另1支不接種作為空白對(duì)照，置3035c培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)，逐日觀察結(jié)。同時(shí)取相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。結(jié)果判定：被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.52范圍內(nèi)，且菌落

8、形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致；被檢液體培養(yǎng)基管與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好。.偏差處理驗(yàn)證的數(shù)據(jù)產(chǎn)生的任何偏差，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行偏差調(diào)查，按照化驗(yàn)室偏差管理規(guī)程進(jìn)行處理并如實(shí)記錄，給出合理的偏差處理措施，并上報(bào)驗(yàn)證領(lǐng)導(dǎo)小組，記錄備案，并且根據(jù)處理措施進(jìn)行相應(yīng)的處理，并對(duì)處理的過程、結(jié)果進(jìn)行記錄與跟蹤。驗(yàn)證小組根據(jù)數(shù)據(jù)分析，做出相應(yīng)的評(píng)定與結(jié)論，報(bào)請(qǐng)驗(yàn)證委員會(huì)批準(zhǔn)。8驗(yàn)證數(shù)據(jù)及評(píng)估驗(yàn)證小組對(duì)驗(yàn)證檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)結(jié)果評(píng)價(jià)：評(píng)價(jià)人：日期：.驗(yàn)證報(bào)告及評(píng)審驗(yàn)證小組依據(jù)本方案實(shí)施驗(yàn)證，編寫驗(yàn)證報(bào)告。驗(yàn)證小組組織專業(yè)人員對(duì)驗(yàn)證報(bào)告進(jìn)行評(píng)審。QA對(duì)驗(yàn)證報(bào)告給出結(jié)論，驗(yàn)證合格發(fā)放驗(yàn)證

9、合格證。.再驗(yàn)證及周期純化水微生物限度檢查用的A2R瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查驗(yàn)證,其再驗(yàn)證周期一般為三年，以證實(shí)確認(rèn)培養(yǎng)基的可靠性。當(dāng)藥典中純化水微生物限度檢查法發(fā)生變更時(shí)，需進(jìn)行再驗(yàn)證；當(dāng)所用到的檢驗(yàn)設(shè)備出現(xiàn)故障進(jìn)行重大維修，尤其是關(guān)鍵部件的維修；儀器的性能發(fā)生了明顯的偏移，已不能再滿足檢驗(yàn)產(chǎn)品質(zhì)量的要求時(shí)，均需要對(duì)該檢驗(yàn)方法進(jìn)行重新確認(rèn)，以證明變更對(duì)已經(jīng)確認(rèn)的效果無影響。.驗(yàn)證文件歸檔驗(yàn)證結(jié)束，全部驗(yàn)證文件（驗(yàn)證方案、驗(yàn)證報(bào)告、驗(yàn)證記錄、驗(yàn)證合格證等）歸檔質(zhì)量部。.附件驗(yàn)證小組組成及職責(zé)驗(yàn)證前確認(rèn)記錄驗(yàn)證結(jié)果評(píng)估記錄驗(yàn)證合格證驗(yàn)證前確認(rèn)記錄、驗(yàn)證前儀器儀表確認(rèn)廳 P名稱編號(hào)上次校驗(yàn)時(shí)間是否在

10、有效期內(nèi)12345確認(rèn)人：日期：試驗(yàn)材料表一、計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基胰酪大豆月東瓊脂培養(yǎng)基：批號(hào)：來源：三、驗(yàn)證用菌種菌種類型菌種代數(shù)批號(hào)來源銅綠假單胞菌CMCC(B)10104枯抱的CMCC(B)63501四、滅菌前調(diào)節(jié)pH溶液溶液名稱配制批號(hào)配制日期有效期至配制人10%碳酸鈉溶液1mol/l氫氧化鈉溶液15%冰醋酸溶液1mol/l鹽酸溶液檢查人：日期:復(fù)核人：日期：附表 2培養(yǎng)基的pH值珞加生名稱配制批號(hào)火菌前 pH 值滅菌后 pH 值判定結(jié)果檢查人：日期:復(fù)核人：日期：附表 3外觀性狀,白笠廣丕名布卜批號(hào)火菌后外觀檢查保存 2 周后外觀檢查結(jié)果判定日期：日期：檢查人：日期:復(fù)核人：日期：培養(yǎng)基無菌性檢查表培養(yǎng)基名稱管數(shù)培養(yǎng)時(shí)間（天）溫度123456789101112131412345結(jié)論檢查人/日期：復(fù)核人/日期：注：“+”為生長，“-”為不生長。附表7菌種計(jì)數(shù)表計(jì)數(shù)培養(yǎng)基培療溫度（C）培療時(shí)問（h）稀釋級(jí)數(shù)菌落數(shù)（cfu/ml）平皿1平皿2平均值胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基枯草芽抱桿菌銅綠假單胞菌結(jié)果評(píng)價(jià)查人/日期：復(fù)核人/日期：菌落計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/ml）試驗(yàn)次數(shù)10-5稀釋10-6稀釋10-7稀釋123123123金黃色葡錮球菌枯草芽抱桿菌卬杭州沸創(chuàng)醫(yī)療科技有限公司驗(yàn)證合格證書驗(yàn)證方案名稱：無菌檢查用培養(yǎng)基適用性檢查驗(yàn)證方案驗(yàn)證方案編號(hào)：VP-Q