級生物技術1班發(fā)酵工程實驗計劃方案

1、生物技術一班發(fā)酵工程實驗計劃方案一、實驗日程表序號實驗項目時間實驗內容安排1培養(yǎng)基制備與滅菌預計8學時1、 固體培養(yǎng)基配制500mL/組，分裝2瓶；2、 培養(yǎng)皿清洗及包扎10副/組；無菌水90mL/瓶，9 mL/試管共6支；3、 1 mL or2 mL吸管包扎8支/組；4、 液體培養(yǎng)基制備：500ml/組，分裝8瓶，滅菌0.1MPa,20min.2菌種分離預計4學時1、菌種的分離純化:超凈工作臺消毒（UV照射20min）75%乙醇擦拭臺面；分離樣品無菌水溶解(稀釋10-2倍)渦旋震蕩5min；倒平板(10副平皿/組)平板劃線分離30倒置培養(yǎng)目標菌株獲得制片及觀察（顯微攝影）。3種子制備預計4學

2、時1、接種準備工作：超凈工作臺消毒（UV照射20min）75%乙醇擦拭臺面。2、純種培養(yǎng)接種：平板單一菌落種子培養(yǎng)基（2環(huán)/瓶）渦旋震蕩3-5min；3、搖瓶培養(yǎng)：搖床設置及調節(jié)（30，200r/m）搖瓶固定啟動培養(yǎng)。4發(fā)酵罐結構認識、操作規(guī)程及分批發(fā)酵操作預計8學時1、 發(fā)酵培養(yǎng)基配制：20Lor35L。2、 發(fā)酵罐操作培訓：發(fā)酵罐初始狀態(tài)檢查及調節(jié)清洗（清水沖洗2-3遍）發(fā)酵罐運行啟動發(fā)酵罐運行參數(shù)設置空罐滅菌（0.15MPa,20min）進料實罐滅菌（0.1MPa維持30min）冷卻火焰封口接種發(fā)酵參數(shù)穩(wěn)定狀態(tài)調節(jié)與維持。3、 發(fā)酵取樣：取樣管滅菌取樣再滅菌；4、 發(fā)酵中間過程分析（0

3、hour）： pH測定（pH計or精密試紙）；酸度（中和法）；酶濃度測定（福林酚法）；菌體濃度測定（A600光密度法）5、 中間取樣：每間隔4h, 取樣管滅菌取樣再滅菌.共計4-6次 ；6、 發(fā)酵結束工作：器皿、設備還原，環(huán)境清潔2、 實驗分組第一組：薛盛、張川、周寧、殷清玉宇、周辰棟、楊朝偉、吳迪、 劉洋、劉麗婷 （負責人：吳迪）第二組：張怡、沈飛、徐依依、陸佳樺、吳冰燕、王蕓清鑒、葉晨、 汪素紅、劉杏、劉文躍 （負責人：沈飛）第三組：田玉寒、聞寧、林飛敏、李林棋、丁銘、周欣欣、羅斯、 蔣秋艷、劉宇霞 （負責人：田玉寒）3、 時間分配前三周的周二晚發(fā)酵理論課照上，因此各組的固定實驗時間如下：

4、第一組固定實驗時間：周一下午、周三晚上第二組固定實驗時間：周二中午、周四上午第三組固定實驗時間：周五下午、周五晚上后三周的周二晚無理論課，各組集中在周二晚實驗前三周每周安排兩次實驗，以獲取更多的實驗數(shù)據(jù)，后三周每周一次集體實驗幾個重要時間節(jié)點為：第10周正式進入實驗程序； 第13周獲得目標菌株1株； 第14周完成種子的搖瓶培養(yǎng)； 第15周分別完成上罐發(fā)酵； 第16周實驗收尾工作。 四、實驗內容實驗一 產(chǎn)蛋白酶微生物菌株的分離【實驗材料】 1、采樣樣品食堂泔腳等殘存蛋白質豐富的環(huán)境周圍的土壤或其它蛋白質腐敗材料。2、培養(yǎng)基（1）增殖培養(yǎng)基：蛋白胨10 g/L，牛肉膏3 g/L，氯化鈉5 g/L，

5、pH 7.07.2，0.1MPa，滅菌20min。（2）分離純化培養(yǎng)基：酪蛋白10 g/L，Na2HPO4 6 g/L，KH2PO4 3 g/L，NaCl 0.5 g/L，NH4Cl 1 g/L，F(xiàn)eSO4 0.025 g/L，酵母膏0.2 g/L，MgSO4 0.24 g/L，CaCl2 0.011 g/L，溴百里香酚蘭0.05 g/L，瓊脂20 g/L，pH 7.07.2，0.1MPa，滅菌20min。（3）菌種保存培養(yǎng)基：蛋白胨10g/L，牛肉膏3 g/L， NaCl 5g/L，瓊脂 20g/L，pH 7.07.2，0.1MPa, 滅菌20min。（4）無菌水：90 mL無菌水/250

6、mL三角瓶; 9 mL無菌水/試管6支。3、實驗器材刮鏟、一次性手套、無菌小塑料袋、試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、吸管、接種環(huán)和涂布棒等。4、實驗設備渦旋振蕩器、超凈工作臺、高壓滅菌鍋、振蕩培養(yǎng)箱、恒溫培養(yǎng)箱、（數(shù)碼）顯微鏡?！緦嶒灢襟E】1、采樣分別取食堂泔腳池周邊土壤，腐爛基質或其它可能含有蛋白酶生產(chǎn)菌的生物制劑10g裝入無菌小塑料袋，在超凈工作臺上將樣品混合均勻從中稱取1g作為待增殖的采樣樣品。2、增殖培養(yǎng)1g待增殖的采樣樣品加入50 mL增殖培養(yǎng)基/250 mL三角瓶中，渦旋振蕩器上振蕩5min，可設置3組平行。混勻的液體置于30，180 r/min振蕩培養(yǎng)箱中搖瓶培養(yǎng)36 h。增殖后的培養(yǎng)液置

7、于80水浴中加熱10 min去除營養(yǎng)體細胞，迅速取出冷卻至常溫，待用。平行樣可以在加熱處理后再合并成一個樣作為增殖培養(yǎng)液。3、增殖液梯度稀釋在超凈工作臺中取增殖培養(yǎng)液10 mL加入裝有90 mL無菌水的250 mL三角瓶中，靜置5 min后用渦旋振蕩器上振蕩5 min，制成10-1稀釋菌液。用無菌吸管吸取1 mL 10-1稀釋菌液加入9 mL無菌水試管中，渦旋振蕩器1 min制成10-2稀釋菌液，再依次用無菌吸管吸取1 mL稀釋菌液加入9 mL無菌水試管中梯度稀釋成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7倍稀釋菌液。4、平板涂布分別取0.1mL 10-6、10-7稀釋菌液于分離培養(yǎng)基平

8、板上，用無菌涂布棒分別涂布均勻，每一稀釋度重復5個平行。5、培養(yǎng)將涂布好的平板放入30微生物恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)36 h后，觀察培養(yǎng)結果，統(tǒng)計總菌數(shù)、菌落種類及各自比例。6、菌株鑒別及純化挑取菌落周圍培養(yǎng)基變藍色的典型菌落，在保存培養(yǎng)基平板上劃線純化至單一菌落。顯微觀察菌體形態(tài)。純化后的純菌落作斜面菌種保藏作為后續(xù)實驗的備用菌種。【實驗結果】1、菌落總數(shù)MM = （1.1）2、 目標菌株比例PP= （1.2）式中：n為平板上菌落數(shù)（個），以出現(xiàn)30-300個菌落的平板計數(shù)為宜，0.1為涂布稀釋液加量（mL），10為量取的增殖培養(yǎng)液量（mL）, m為變色菌落數(shù)，N為所計數(shù)平板的稀釋倍數(shù)。3、顯微

9、觀察典型目標菌落及細胞形態(tài)。實驗二 蛋白酶生產(chǎn)菌種的篩選【實驗材料】1.待選菌種取“實驗1”分離出的待選菌株35株，或以枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）和地衣芽孢桿菌(Bacillus lichenifornis)等不同產(chǎn)蛋白酶性狀的菌株57株。2.培養(yǎng)基（1）鑒別培養(yǎng)基：酪蛋白10 g/L，Na2HPO4 6 g/L，KH2PO4 3 g/L，NaCl 0.5 g/L，NH4Cl 1 g/L，F(xiàn)eSO4 0.025 g/L，酵母膏0.2 g/L，MgSO4 0.24 g/L，CaCl2 0.011 g/L，溴百里酚藍0.05 g/L，瓊脂20 g/L，pH 7.07.2，0

10、.1MPa，滅菌20min。（2）驗證培養(yǎng)基：可溶性淀粉10 g/L，蛋白胨5 g/L，酵母膏0.25 g/L， KH2PO4 3 g/L，NaCl 0.5 g/L，MgSO4 0.24 g/L，pH 7.07.2，分裝成50mL培養(yǎng)基/250mL三角瓶，0.1MPa，滅菌20min。3.實驗器材游標卡尺、無菌移液管、無菌培養(yǎng)皿、三角瓶、吸管和涂布棒等。4.實驗設備恒溫水浴鍋、渦旋振蕩器、超凈工作臺、高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、振蕩培養(yǎng)箱、紫外可見分光光度計、顯微鏡等。【實驗步驟】1.倒平板將已經(jīng)滅菌的鑒別培養(yǎng)基自然冷卻至50左右（即未凝固之前?？梢詫⒀b有融化狀態(tài)培養(yǎng)基的三角瓶放在50恒溫水浴

11、鍋中保持。注意倒平板時培養(yǎng)溫度過高，培養(yǎng)皿蓋上易產(chǎn)生較多的冷凝水，影響菌落形成的自然形態(tài)），在超凈工作臺上無菌操作倒平板，培養(yǎng)基凝固后待用。2.點種接種無菌操作用接種環(huán)從待選菌株斜面上取一環(huán)菌苔點種在鑒別培養(yǎng)基平板上，每平板上選取分布合適的三個點以點種接種方式接入菌體，在平板培養(yǎng)皿上標記各菌株代號。不同菌株分別接種在不同平板上，各菌株分別做3組平行試驗。3.培養(yǎng)接種后的平板置于3032下恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)36 h。4.變色圈測量分別在培養(yǎng)12h、24 h和36h時用游標卡尺從平板培養(yǎng)皿背面分別測定各菌的變色圈直徑（mm）與菌落直徑（mm），計算其直徑比值。5.驗證性培養(yǎng)選取變色圈直徑與菌落直徑比

12、值最大的菌株與最小的菌株用接種環(huán)分別接入2環(huán)菌體于驗證液體培養(yǎng)基中，3032，180r/min振蕩培養(yǎng)箱中搖瓶培養(yǎng)48 h，將發(fā)酵液過濾或離心，取清夜檢測其中的蛋白酶產(chǎn)量(U)。6.蛋白酶活力測定參照附件“蛋白酶活力測定方法”?！緦嶒灲Y果】1、蛋白酶生產(chǎn)菌種的篩選表1-1 蛋白酶生產(chǎn)菌種的篩選培養(yǎng)時間平均直徑菌株1菌株2菌株3菌株4菌株512h變色圈直徑/mm菌落直徑/mm直徑比值24h變色圈直徑/mm菌落直徑/mm直徑比值36h變色圈直徑/mm菌落直徑/mm直徑比值平均變色速率/(mm/h)注：平均變色速率為單位時間內菌落周圍藍色變色圈直徑增加的程度，用mm/h表示。2、篩選菌株產(chǎn)酶活性表1

13、-2 菌株產(chǎn)蛋白酶結果驗證菌株編號培養(yǎng)液（mL）24h酶濃度（U/mL）36h酶濃度（U/mL）對照菌株總酶活（U）高產(chǎn)菌株總酶活（U）注：總酶活（U）=培養(yǎng)液中酶濃度（U/mL）×培養(yǎng)液總體積（mL）。實驗二十一 發(fā)酵菌種制備【實驗材料】1、菌種實驗選育產(chǎn)蛋白酶菌株，或枯草芽孢桿菌等其它產(chǎn)蛋白酶菌株。2、培養(yǎng)基（1）斜面培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基（配方參照附錄六“常用培養(yǎng)基”）（2）種子培養(yǎng)基：可溶性淀粉5g/L，牛肉膏 5g/L ，蛋白胨 10g/L，NaCl 5g/L，0.1MPa，滅菌20min。3、實驗器材三角瓶、容量瓶、吸管（1mL,5mL,25mL）、烘箱、試管架。

14、5、實驗儀器超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、振蕩培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器、顯微鏡、分光光度計等?！緦嶒灢襟E】1、菌種活化將實驗菌種轉接到牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基平板上，37倒置培養(yǎng)2224 h活化。2、接種培養(yǎng)將活化菌種無菌操作接入裝入50mL種子培養(yǎng)基/250mL三角瓶中，每瓶接2環(huán)菌苔。接種后的培養(yǎng)液用蝸旋振蕩均勻，32，180r/min搖瓶培養(yǎng)1822 h，作為一級種子。將一級種子按20%的接種量接入250 mL種子培養(yǎng)基/1000mL三角瓶中，32，150r/min搖瓶培養(yǎng)1618 h，作為二級種子。3、種子質量檢查培養(yǎng)后的種子培養(yǎng)液無菌操作取樣5mL，分別作顯微鏡涂片染色檢驗細胞形態(tài)，測定培養(yǎng)中

15、的菌體濃度（OD600）和蛋白酶濃度（U/mL）。4、檢測方法菌體濃度和蛋白酶含量檢測參照附錄九“菌體濃度檢測方法”和“蛋白酶含量測定方法”。【實驗結果】1、種子液中菌種細胞形態(tài)圖。2、種子質量指標表1 種子質量指標檢測項目實測值參考指標備注菌體濃度（OD600）凈增加值>1.0產(chǎn)物濃度(U/mL)<10菌體形態(tài)短桿菌，芽孢形成率60-70%雜菌污染陰性結論實驗二十二 發(fā)酵罐結構認識及使用操作規(guī)程【實驗目的】了解發(fā)酵系統(tǒng)的基本組成，認識典型機械攪拌通氣式發(fā)酵罐的基本結構，學習發(fā)酵罐工作的一般原理，學會發(fā)酵罐使用的操作規(guī)程?！緦嶒瀮热荨?、發(fā)酵罐基本結構組成（1）罐體系統(tǒng)： 罐體、夾

16、套、攪拌器、擋板、進料口、接種口、放料口、排氣管、進氣管、取樣管、照明燈等。（2）滅菌系統(tǒng)：蒸汽發(fā)生器、蒸汽分配管、夾套加熱裝置、放料口滅菌裝置、通氣管取樣管滅菌裝置、空氣過濾系統(tǒng)滅菌裝置。（3）溫度控制系統(tǒng)：罐內溫度傳感器（電極）、水箱溫度傳感器（電極）、恒溫水箱、恒溫水循環(huán)管路。（4）無菌空氣制備系統(tǒng)：空氣壓縮機、氣液分離器、氣體流量計、氣流調節(jié)器、空氣粗過濾器和空氣精過濾器等。（5）控制系統(tǒng)：電源開關、操作顯示屏、控制器觸摸開關、參數(shù)設置轉換調節(jié)屏。2、 發(fā)酵罐操作規(guī)程（1）發(fā)酵罐工藝操作條件設置溫度：1050。壓力：00.3MPa(表壓)。滅菌條件；溫度120125，壓力00.3MPa

17、 (表壓)。通氣量：0.32 V/V/M。功率消耗：0.54kW/m3。發(fā)酵熱量：5，00020，000 kcal/m3h。（2）清洗工作清洗前應取出pH、DO電極。清洗罐內可配合進水、進氣、電機攪拌、加溫一起進行。清洗后安裝要注意罐內密封圈、硅膠墊就位情況。注意罐與罐座間隙均衡。（3）試車將電極、電機、電纜、進出氣軟管、冷凝器進出水接頭安裝就位；安裝完畢后要對罐體內通氣（0.2MPa）作密封性試驗。方法如下：關閉 閥門；旋緊罐體上每一個接口、堵頭、電極緊固帽；打開空壓機，調節(jié)氣閥，使罐壓保持0.2MPa左右；對系統(tǒng)進行23小時試運行，如有問題作相應處理后，方可正式使用。 （4）發(fā)酵罐使用準備

18、如果短期內需再次培養(yǎng)發(fā)酵，應對其進行23次清水清洗待用。如準備長期停用，則應對其進行滅菌，然后放去水箱與罐內存水，放松罐蓋緊固螺絲，取出電極保養(yǎng)儲存好，將罐、各管道余水放凈，關閉所有閥門，電源，蓋上防塵罩。發(fā)酵罐操作開始前，先關閉所有出料口、取樣口和進氣口，打開出氣閥；打開進料口螺蓋加入發(fā)酵培養(yǎng)基，裝注完成后旋上進料口螺蓋，稍留空隙待滅菌升溫至100前噴出蒸汽對螺蓋滅菌處理。（5）滅菌啟動蒸汽發(fā)生器，待氣壓達到0.20.3Mpa以上時：a. 開啟發(fā)酵罐出氣閥，開啟高壓蒸汽閥將高壓蒸汽通過進氣閥引入夾套，打開夾套排水閥，排除蒸汽冷凝水，控制閥門開量，保持微弱出汽；b. 同時通過蒸汽分配管將蒸汽引

19、入空氣過濾系統(tǒng)（注意：蒸汽引入前關閉通向電器控制柜的空氣閥門），使蒸汽通過一級和二級空氣過濾器并順利進入取樣口出口，保持取樣放出口微弱出汽；c. 另一路蒸汽通過蒸汽閥發(fā)酵罐放料口，并保持放料口微弱出汽；d.等到罐內培養(yǎng)基溫度達到80時，開啟與罐直接相連的通氣閥，將高壓蒸汽直接接入罐內加熱培養(yǎng)基，并對與罐相連的管道滅菌。e. 直到罐內培養(yǎng)基開始沸騰后，關閉排氣閥，使罐內升壓至0.1Mpa（或滅菌溫度121），維持溫度0.5-1.0小時。f. 關閉蒸汽進氣閥，開啟冷卻水管路系統(tǒng)，通過夾套冷卻發(fā)酵培養(yǎng)基，當罐內壓力接近常壓前向罐內通入無菌空氣，保持罐內空氣壓力0.03MPa上下，至發(fā)酵溫度關閉冷卻水

20、系統(tǒng)。g.啟動空氣壓縮機，開啟進氣閥、使壓縮空氣通過旋風分離器及空氣過濾器，從進氣閥進入發(fā)酵罐，使溶解氧濃度達到發(fā)酵初始水平。（6）接種：火焰接種法在接種口用酒精火圈維持加料口的無菌狀態(tài)，然后打開接種口蓋，迅速將接種液倒入罐內，在把蓋擰緊。（7）發(fā)酵狀態(tài)調節(jié)a.罐壓：發(fā)酵過程中須手動控制罐壓，即用出口閥控制罐內壓力。調節(jié)空氣流量的，須同時調節(jié)出口閥，應保持罐內壓力恒定大于0.03Mpa。 b. 溶解氧（DO）的測量和控制： 溶解氧的標定：在接種前，在恒定的發(fā)酵溫度下，將轉速及空氣量開到最大值時的溶解氧DO值作為100%。發(fā)酵過程的溶解氧DO測量和控制：DO的控制可采用調節(jié)空氣流量和調節(jié)轉速來達

21、到。最簡單是轉速和溶氧的關聯(lián)控制。其次則必須同時調節(jié)進氣量（手動）控制。有時需要通入純氧（如在某些基因工程菌的高密度培養(yǎng)中）才能達到要求的DO值。c. pH的測量與控制：在滅菌前應對pH電極進行pH值的校正。在發(fā)酵過程中pH值的控制使用蠕動泵的加酸加堿來達到的，酸瓶或堿瓶須先在滅菌鍋中滅菌。旋松進料口螺旋蓋，在進料口環(huán)槽中加入適量酒精棉，點燃酒精，打開進料口螺旋蓋，將種子三角瓶菌液接入發(fā)酵罐。攪拌均勻后，開始發(fā)酵控制。（8）取樣： 間隔8 h，開啟取樣閥取樣300-500mL發(fā)酵液分別測定殘?zhí)?、菌濃、酸度等?shù)值。發(fā)酵參數(shù)到達放罐指標時，發(fā)酵結束。（9） 放料： 打開放料閥，將發(fā)酵液全部排出；（

22、10） 清洗： 放罐后用水清洗發(fā)酵罐2-3次，洗凈后通蒸汽消毒15min。培養(yǎng)后用干凈抹布要清除電器箱、電纜等接頭和其他罐體部件上的物體。實驗二十三 發(fā)酵培養(yǎng)基配制及發(fā)酵罐原位滅菌【實驗材料】1、材料可溶性淀粉，蛋白胨，酪蛋白，牛肉膏，酵母浸出膏，NH4Cl，消泡劑，pH試紙；NaOH；HCl；2、發(fā)酵培養(yǎng)基可溶性淀粉 10 g/L，蛋白胨8 g/L，NH4Cl 2.5 g/L，KH2PO4 3 g/L，F(xiàn)eSO4 0.025 g/L， MgSO4 0.24 g/L，酵母浸出膏0.5g/L，消泡劑0.1 g/L， pH 7.07.2。3、實驗器材三角瓶、容量瓶、吸管（1mL,5mL,25mL）

23、、烘箱、試管架。4、實驗儀器電子天平；50L機械攪拌式通氣式發(fā)酵罐、空氣壓縮機、貯氣罐、分水器、空氣粗濾器、空氣精濾器、蒸汽發(fā)生器等?！緦嶒灢襟E】1、培養(yǎng)基原料計算計算發(fā)酵罐裝料系數(shù)為0.75時的培養(yǎng)基總量，按發(fā)酵培養(yǎng)基配方組成計算各營養(yǎng)物質的用量。2、原料稱量用電子天平準確稱量各物質，對于微量物料的衡量應先配制10倍或100倍的母液再減量添加。3、培養(yǎng)基原料溶解將培養(yǎng)基的組分分別加入到帶一定體積水的5L大燒杯或桶中，攪拌溶解，添加一種原料溶解一種，直到全部加完。4、培養(yǎng)基裝料用塑料勺通過漏斗將配制好的發(fā)酵培養(yǎng)基從發(fā)酵罐頂部的裝料口加入發(fā)酵罐，水加量比計算體積減少約1L以抵充在發(fā)酵罐管道滅菌時

24、蒸汽直接通往發(fā)酵罐內形成冷凝水對培養(yǎng)的的稀釋作用。5、培養(yǎng)基調pH值用0.1mol/LHCl或0.1mol/L NaOH從加料口滴入發(fā)酵罐，邊滴入邊攪拌，不斷從放料口取樣測定發(fā)酵培養(yǎng)基pH，直到調節(jié)培養(yǎng)基pH值至配方要求的pH值為止。6、原位滅菌打開發(fā)酵罐待用狀態(tài)時的夾套進汽閥門，小開放夾套排汽閥門，開啟發(fā)酵罐攪拌器，邊攪拌邊加熱，至發(fā)酵培養(yǎng)基溫度達到80時同時開啟放料口滅菌蒸汽閥門和放料閥門，將蒸汽引入發(fā)酵罐內，對放料口及其附屬管道滅菌；開啟進氣管閥門對通氣生產(chǎn)關系進行滅菌。直到培養(yǎng)基溫度大于100時通過排氣閥排盡罐內空氣后關閉排氣閥、放料閥和進氣閥，通過夾套繼續(xù)升溫至設定的培養(yǎng)基滅菌溫度，

25、并在此溫度下維持設定的滅菌時間。7、培養(yǎng)基降溫關閉夾套進汽閥，切換發(fā)酵罐冷卻系統(tǒng)，將冷卻介質（通常為自來水）從夾套引入對高溫培養(yǎng)基進行冷卻，當罐內壓力接近常壓（表壓為0 MPa）時開啟進氣閥門向罐內引入無菌空氣，并始終維持罐內表壓為0.02-0.03 MPa，直到到達設定的發(fā)酵溫度，發(fā)酵罐實施自動恒溫發(fā)酵控制。8、無菌檢查從取樣口取出少量無菌培養(yǎng)基作無菌檢測用，取樣后用高壓蒸汽對取樣口消毒5min。樣品按“細菌稀釋計數(shù)法”進行雜菌殘留檢測?！緦嶒灲Y果】1、培養(yǎng)基滅菌后無菌效果檢測表1 培養(yǎng)基滅菌后無菌效果檢測報告檢測項目實測值備注雜菌體形態(tài)雜菌數(shù)量（cfu/mL）結 論實驗三十一 發(fā)酵過程殘?zhí)欠治觥緦嶒灢牧稀?、測試樣品蛋白酶發(fā)酵過程中的含糖或淀粉的發(fā)酵基質。2、試劑（1）斐林試劑甲液：稱取35克硫酸銅(CuSO4·5H20)，0.05克次甲基藍，用水溶解并稀釋至1000mL，如有不溶物可用濾紙過濾。乙液；稱取117克酒石酸鉀鈉，126.4克氫氧化鈉，9.4克亞鐵氰化鉀，用水稀釋至1000mL。