檢測(cè)生物組織中的糖類脂肪和蛋白質(zhì)

1、一實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?#160;   嘗試用化學(xué)試劑檢測(cè)生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì)二實(shí)驗(yàn)原理：某些化學(xué)試劑能使生物組織中的有關(guān)有機(jī)化合物，產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。1可溶性還原糖（如葡萄糖、果糖、麥芽糖）與斐林試劑發(fā)生作用，可生成磚紅色的Cu2O沉淀。如：葡萄糖+ Cu(OH) 2  _加熱_       葡萄糖酸 + Cu2O（磚紅色）+ H2O， 即Cu(OH)2被還原成Cu2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。2脂肪可以被蘇丹染液染成橘黃色（或被蘇丹染液染成紅色）。淀粉遇碘變藍(lán)色。3蛋白質(zhì)

2、與雙縮脲試劑發(fā)生作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。（蛋白質(zhì)分子中含有很多肽鍵，在堿性NaOH溶液中能與雙縮脲試劑中的Cu2+作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)。）三實(shí)驗(yàn)材料1做可溶性還原性糖鑒定實(shí)驗(yàn)，應(yīng)選含糖高，顏色為白色的植物組織，如蘋果、梨。（因?yàn)榻M織的顏色較淺，易于觀察。）2做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)。應(yīng)選富含脂肪的種子，以花生種子為最好，實(shí)驗(yàn)前一般要浸泡34小時(shí)（也可用蓖麻種子）。3做蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)，可用富含蛋白質(zhì)的黃豆或雞蛋清。四、實(shí)驗(yàn)試劑斐林試劑（包括甲液：質(zhì)量濃度為0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：質(zhì)量濃度為0.05g/ mL CuSO4溶液）、蘇丹或蘇丹染液、雙縮脲試劑（包括A液：質(zhì)量濃度為0.1g/ mL N

3、aOH溶液和B液：質(zhì)量濃度為0.01g/ mL CuSO4溶液）、體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精溶液，碘液、蒸餾水。五、方法步驟：（一）可溶性糖的鑒定操 作 方 法注 意 問 題解 釋1. 制備組織樣液。（去皮、切塊、研磨、過濾）蘋果或梨組織液必須臨時(shí)制備。因蘋果多酚氧化酶含量高，組織液很易被氧化成褐色，將產(chǎn)生的顏色掩蓋。2. 取1支試管，向試管內(nèi)注入2mL組織樣液。  3. 向試管內(nèi)注入1mL新制的斐林試劑，振蕩。應(yīng)將組成斐林試劑的甲液、乙液分別配制、儲(chǔ)存，使用前才將甲、乙液等量混勻成斐林試劑； 切勿將甲液、乙液分別加入蘋果組織樣液中進(jìn)行檢測(cè)。斐林試劑很不穩(wěn)定，甲、乙液

4、混合保存時(shí)，生成的Cu ( OH ) 2在70900C下分解成黑色CuO和水；甲、乙液分別加入時(shí)可能會(huì)與組織樣液發(fā)生反應(yīng)，無Cu ( OH ) 2生成。4. 試管放在盛有50-650C溫水的大燒杯中，加熱約2分鐘，觀察到溶液顏色：淺藍(lán)色 棕色 磚紅色（沉淀）最好用試管夾夾住試管上部，使試管底部不觸及燒杯底部，試管口不朝向?qū)嶒?yàn)者。也可用酒精燈對(duì)試管直接加熱。防止試管內(nèi)的溶液沖出試管，造成燙傷； 縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。（二）脂肪的鑒定操 作 方 法注 意 問 題解 釋花生種子浸泡、去皮、切下一些子葉薄片，將薄片放在載玻片的水滴中，用吸水紙吸去裝片中的水。干種子要浸泡34小時(shí)，新花生的浸泡時(shí)間可縮

5、短。因?yàn)榻輹r(shí)間短，不易切片，浸泡時(shí)間過長(zhǎng)，組織較軟，切下的薄片不易成形。切片要盡可能薄些，便于觀察。在子葉薄片上滴23滴蘇丹或蘇丹染液，染色1分鐘。染色時(shí)間不宜過長(zhǎng)。 用吸水紙吸去薄片周圍染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。 酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，會(huì)影響對(duì)橘黃色脂肪滴的觀察。同時(shí)，酒精是脂溶性溶劑，可將花生細(xì)胞中的脂肪顆粒溶解成油滴。用吸水紙吸去薄片周圍酒精，滴上12滴蒸餾水，蓋上蓋玻片。 滴上清水可防止蓋蓋玻片時(shí)產(chǎn)生氣泡。低倍鏡下找到花生子葉薄片的最薄處，可看到細(xì)胞中有染成橘黃色或紅色圓形小顆粒。裝片不宜久放。時(shí)間一長(zhǎng)，油滴會(huì)溶解在乙醇中。 

6、;三、蛋白質(zhì)的鑒定操 作 方 法注 意 問 題解 釋制備組織樣液。（浸泡、去皮研磨、過濾。） 黃豆浸泡1至2天，容易研磨成漿，也可購(gòu)新鮮豆?jié){以節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間。鑒定。加樣液約2ml于試管中，加入雙縮脲試劑A，搖勻；再加入雙縮脲試劑B液34滴，搖勻，溶液變紫色。A液和B液也要分開配制，儲(chǔ)存。鑒定時(shí)先加A液后加B液。  CuSO4溶液不能多加。先加NaOH溶液，為Cu2+與蛋白質(zhì)反應(yīng)提供一個(gè)堿性的環(huán)境。A、B液混裝或同時(shí)加入，會(huì)導(dǎo)致Cu2+變成Cu ( OH ) 2沉淀，而失效。否則CuSO4的藍(lán)色會(huì)遮蓋反應(yīng)的真實(shí)顏色?？捎玫扒宕娑?jié){。蛋清要先稀釋。如果稀釋不夠，在實(shí)驗(yàn)

7、中蛋清粘在試管壁，與雙縮脲試劑反應(yīng)后會(huì)粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不容易徹底，并且試管也不易洗干凈。附：淀粉的檢測(cè)和觀察用試管取2ml待測(cè)組織樣液，向試管內(nèi)滴加2滴碘液，觀察顏色變化。碘液不要滴太多以免影響顏色觀察 【學(xué)習(xí)重難點(diǎn)】 檢測(cè)生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)【重要考點(diǎn)】主要的考點(diǎn)是鑒定所用的試劑及相應(yīng)的顏色反應(yīng)，斐林試劑和雙縮脲試劑的區(qū)別（溶液濃度不同，使用原理不同，使用方法不同）；實(shí)驗(yàn)選材等?！净A(chǔ)回顧】 1、檢測(cè)還原糖所使用的試劑是 ，該試劑使用時(shí)，應(yīng)先 ，該試劑與還原糖作用形成 色沉淀。 2、檢測(cè)脂肪所用的試劑是 ，該試劑與脂肪作用被染成 色。 3、檢測(cè)蛋白質(zhì)所用的試劑是

8、，該試劑與蛋白質(zhì)作用，產(chǎn)生 色，使用時(shí)應(yīng) 。 4，檢測(cè)淀粉使用試劑是 ，作用的結(jié)果是呈 色。 【重點(diǎn)問題探究】1、  選材：要富含有待測(cè)的物質(zhì)，且顏色近于無色或白色（為什么？）2、  還原糖鑒定過程中顏色變化過程：藍(lán)色（氫氧化銅的顏色）棕色（氫氧化銅和氧化亞銅混合物的顏色）磚紅色（氧化亞銅的顏色）。3、 斐林試劑和雙縮脲試劑的區(qū)別 （1）相同點(diǎn)：試劑組成相同，都是由NaOH溶液和CuSO4溶液兩部分組成。 NaOH溶液的濃度相同，都是0.1gml. (2)不同點(diǎn)： CuSO4溶液的濃度不同。斐林試劑中的濃度是0.05 gml，雙縮脲試劑中濃度是0.01 gml。 用量不同。

9、斐林試劑中把甲液（NaOH）和乙液（CuSO4）等量混合1ml使用；雙縮脲試劑是先在含蛋白質(zhì)的溶液中加入1mlA液（NaOH溶液），混合均勻后，再滴幾滴B液（CuSO4溶液，量較少）。 使用方法不同：斐林試劑中兩部分試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，且把待測(cè)試管放在盛有5065度的溫水的大杯中加熱約2min而雙縮脲試劑是先加A液（NaOH）1ml，搖勻后再加B液（CuSO4）4滴再搖勻。 原理不同： 斐林試劑是指新制的Cu(OH)2懸濁溶液。還原糖與新制的Cu(OH)2在加熱煮沸條件下，能生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。實(shí)驗(yàn)過程中，必須先把甲液（NaOH）和乙液（CuSO4）等量混合，讓其反應(yīng)生成Cu(OH)2后，才

10、能加入到含有還原糖的組織液中。如果先后或者說分別把NaOH溶液和CuSO4溶液加入到含有還原糖的組織液中，組織液中的有機(jī)酸會(huì)與NaOH迅速反應(yīng)，使反應(yīng)物中沒有Cu(OH)2或Cu(OH)2不足，從而使還原糖與Cu(OH)2的反應(yīng)不能進(jìn)行或現(xiàn)象不明顯，影響了還原糖的鑒定。 雙縮脲反應(yīng)是指具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物在堿性條件下與Cu2+反應(yīng)，生成紫色的絡(luò)合物。所有的蛋白質(zhì)均有此顯色反應(yīng)。它是NaOH和CuSO4兩種溶液。在實(shí)驗(yàn)過程中，先在含蛋白質(zhì)的溶液中加入1ml的NaOH溶液，混合均勻后，再滴幾滴CuSO4溶液（量較少）。即先后加入NaOH和CuSO4溶液。如果在NaOH中滴幾滴CuSO4溶

11、液混合后，再加入到含蛋白質(zhì)的溶液中，混合液就沒有Cu2+，顯色反應(yīng)就不會(huì)發(fā)生。    4、 可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定的實(shí)驗(yàn)原理、方法、步驟和現(xiàn)象： 知識(shí)點(diǎn)可溶性還原糖 脂肪 蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)原理與斐林試劑生成磚紅色沉淀被蘇丹染成橘黃色（或被蘇丹染成紅色）與雙縮脲試劑反應(yīng)產(chǎn)生紫色物質(zhì)選 材含糖量較高、顏色為白色或近于白色的植物組織，蘋果、梨最好富含脂肪的種子，以花生最好浸泡12d的黃豆種子（或用豆?jié){）或用雞蛋蛋白 方 法蘋果切塊研磨過濾濾液制作花生種子的切片黃豆浸泡切片研磨過濾濾液 鑒定步驟樣液加斐林試劑振蕩水浴加熱煮沸切片染色漂洗鏡檢組織樣液

12、加雙縮脲試劑A再加雙縮脲試劑B觀察顏色變化實(shí) 驗(yàn) 現(xiàn) 象藍(lán)色棕色磚紅色沉淀脂肪被蘇丹染成橘黃色（或被蘇丹染成紅色）加雙縮脲試劑A無明顯變化，加雙縮脲試劑B后溶液變成紫色 注意事項(xiàng)1、選材要用含糖較高、顏色為白色或近于白色的植物組織2、斐林試劑不穩(wěn)定，一般配制成甲液（NaOH：0.01 gml）和乙液（CuSO4：0.05 gml）來保存，用時(shí)必須將甲、乙兩液混合均勻后使用，切勿分別加入組織樣液中進(jìn)行檢測(cè)。1、切片要盡可能的??；2、染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色；3、觀察時(shí)找最薄處，最好只有12層細(xì)胞1、用雞蛋蛋白時(shí)，一定要加以稀釋，如果稀釋不夠，與雙縮脲試劑發(fā)生反應(yīng)后會(huì)粘固在試管內(nèi)壁上

13、，使反應(yīng)不徹底，且試管不易洗干凈；2、雙縮脲試劑使用時(shí)，應(yīng)先加A造成堿性環(huán)境，再加B 【典例分析】將面包團(tuán)包在紗布中在清水中搓洗，鑒定粘留在紗布上是粘稠物和洗出的白漿分別用的試劑是（ ） A 碘液、蘇丹溶液 B、雙縮脲試劑、碘液 C、亞甲基藍(lán)溶液、蘇丹溶液 D、碘液、斐林試劑【鞏固練習(xí)】1、下列各項(xiàng)可作為鑒定生物組織中還原糖的理想材料的是（ ） A、韭菜 B、白菜 C、菠菜 D、梨2、在麥芽糖酶溶液中加入雙縮脲試劑，其結(jié)果應(yīng)該是（ ） A、產(chǎn)生氣泡 B、溶液呈藍(lán)色 C、溶液呈紫色 D、產(chǎn)生磚紅色沉淀3、在“檢測(cè)生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì)”實(shí)驗(yàn)中，對(duì)實(shí)驗(yàn)材料的選擇，下列敘述錯(cuò)誤的是（

14、 ） A、甘蔗莖的薄壁組織、甜菜的塊根等，都含有較多的糖且近于白色，因此可以用于進(jìn)行還原糖的鑒定 B、花生種子含脂肪多且子葉肥厚，是用于脂肪鑒定的理想材料 C、大豆種子蛋白質(zhì)含量高，是進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定的理想植物組織材料 D、雞蛋清含蛋白質(zhì)多，是進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定的動(dòng)物材料4、據(jù)藥理研究，一種茅草的根內(nèi)含有降血糖的因子及多種有益于健康的成分，某公司將它開發(fā)成一種保健飲料。該產(chǎn)品是否適用于糖尿病患者，生物學(xué)興趣小組的同學(xué)以此作為研究課題，請(qǐng)你完成下面的實(shí)驗(yàn)鑒定報(bào)告。 （1）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模鸿b定一種茅草的根是否含有還原糖和淀粉。 （2）實(shí)驗(yàn)原理：還原糖可用 試劑，淀粉可用 試劑來檢測(cè)。 （3）實(shí)驗(yàn)材料：一種茅草的根、所需試劑、刀片、載玻片、酒精燈、試管夾、火柴、滴管 （4）實(shí)驗(yàn)步驟： 鑒定還原糖： ； 鑒定淀粉： ； （5）實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象： ； （6）結(jié)果分析： 。 （7）在鑒定還原糖的實(shí)驗(yàn)操作中應(yīng)注意： 。5、&