衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)(化妝品)

1、第三章第三章 化妝品衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)方法化妝品衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)方法目 錄01化妝品衛(wèi)生學(xué)方面的主要要求02衛(wèi)生化學(xué)檢驗(yàn)方法03微生物檢驗(yàn)方法是否含有禁用物質(zhì)？是否含有禁用物質(zhì)？限用物質(zhì)是否超標(biāo)？限用物質(zhì)是否超標(biāo)？微生物超標(biāo)？含有致病微生物？微生物超標(biāo)？含有致病微生物？功效成分過(guò)量？含有違禁成分？功效成分過(guò)量？含有違禁成分？ 2006年年9月月14日，國(guó)家質(zhì)檢總局在日本日，國(guó)家質(zhì)檢總局在日本SK-品牌的多項(xiàng)化妝品中，品牌的多項(xiàng)化妝品中，查出禁用成分查出禁用成分鉻鉻和和釹釹。 檢驗(yàn)檢疫部門(mén)在對(duì)一批檢驗(yàn)檢疫部門(mén)在對(duì)一批SK-重點(diǎn)凈白素肌粉餅進(jìn)行檢驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，重點(diǎn)凈白素肌粉餅進(jìn)行檢驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，其其釹成分含量達(dá)釹成分含

2、量達(dá)4.5mg/kg。此外，。此外，SK-清透防曬乳液、清透防曬乳液、SK-多元多元修護(hù)精華霜、修護(hù)精華霜、SK-護(hù)膚潔面油、護(hù)膚潔面油、SK-護(hù)膚精華露、護(hù)膚精華露、SK-重點(diǎn)凈重點(diǎn)凈白肌粉底液白肌粉底液OB-2、SK-護(hù)膚面膜、護(hù)膚面膜、SK-重點(diǎn)凈白素肌粉底液重點(diǎn)凈白素肌粉底液OD-3、SK-潤(rùn)采活膚粉凝霜潤(rùn)采活膚粉凝霜OB-2系列進(jìn)口產(chǎn)品中均被檢出禁用物質(zhì)系列進(jìn)口產(chǎn)品中均被檢出禁用物質(zhì)鉻，鉻，其含量為其含量為0.77mg/kg至至2.0mg/kg，對(duì)皮膚眼睛有損害。，對(duì)皮膚眼睛有損害。20072007年年1010月月2424日日廣州日?qǐng)?bào)廣州日?qǐng)?bào) 香港消費(fèi)者委員會(huì)抽檢發(fā)現(xiàn)，香港消費(fèi)者委員

3、會(huì)抽檢發(fā)現(xiàn)，玉蘭油、玉蘭油、H2O+、巴黎雪完美等、巴黎雪完美等品牌的部分化妝品含有致癌物品牌的部分化妝品含有致癌物丙烯酰胺的單體。丙烯酰胺的單體。 機(jī)構(gòu)檢測(cè)表明：機(jī)構(gòu)檢測(cè)表明：化妝品中存在化妝品中存在5ppm以下以下的丙烯酰胺殘留是安全的。的丙烯酰胺殘留是安全的。中國(guó)香料香精化妝品工業(yè)協(xié)會(huì)說(shuō)明：中國(guó)香料香精化妝品工業(yè)協(xié)會(huì)說(shuō)明：丙丙烯酰胺不會(huì)作為化妝品組分添加到產(chǎn)品烯酰胺不會(huì)作為化妝品組分添加到產(chǎn)品中。中。專家說(shuō)：專家說(shuō)：丙烯酰胺在化妝品中所存有極丙烯酰胺在化妝品中所存有極微量的丙烯酰胺是生產(chǎn)上的背景殘留，微量的丙烯酰胺是生產(chǎn)上的背景殘留，就是一種低殘留量的聚丙烯酰胺附屬品。就是一種低殘留量的

4、聚丙烯酰胺附屬品。聚丙烯酰胺在全世界范圍內(nèi)被長(zhǎng)期使用聚丙烯酰胺在全世界范圍內(nèi)被長(zhǎng)期使用于數(shù)百種護(hù)膚品中來(lái)達(dá)到理想的稠度和于數(shù)百種護(hù)膚品中來(lái)達(dá)到理想的稠度和觸感。作為化妝品工業(yè)界的重要原料，觸感。作為化妝品工業(yè)界的重要原料，聚丙烯酰胺的作用包括穩(wěn)定劑、發(fā)泡劑、聚丙烯酰胺的作用包括穩(wěn)定劑、發(fā)泡劑、結(jié)合劑、增稠劑、成膜劑、抗靜電劑和結(jié)合劑、增稠劑、成膜劑、抗靜電劑和頭發(fā)定型劑。頭發(fā)定型劑。20092009年年4 4月月6 6日日廣州日?qǐng)?bào)廣州日?qǐng)?bào) 2009年年4月月2日，韓國(guó)媒體報(bào)道稱，日，韓國(guó)媒體報(bào)道稱，韓國(guó)保寧制藥和韓國(guó)保寧制藥和Babyra等著名嬰幼等著名嬰幼兒用品制造企業(yè)所生產(chǎn)的嬰幼兒爽身兒用

5、品制造企業(yè)所生產(chǎn)的嬰幼兒爽身粉中，被發(fā)現(xiàn)含有粉中，被發(fā)現(xiàn)含有1級(jí)致癌物質(zhì)石棉，級(jí)致癌物質(zhì)石棉，其中涉及了中國(guó)市場(chǎng)上非常有名的進(jìn)其中涉及了中國(guó)市場(chǎng)上非常有名的進(jìn)口產(chǎn)品德國(guó)口產(chǎn)品德國(guó)NUK嬰兒爽身粉。根據(jù)嬰兒爽身粉。根據(jù)中國(guó)國(guó)家衛(wèi)生部關(guān)于化妝品衛(wèi)生規(guī)范，中國(guó)國(guó)家衛(wèi)生部關(guān)于化妝品衛(wèi)生規(guī)范，石棉為化妝品原料成分中的禁用物。石棉為化妝品原料成分中的禁用物。相關(guān)背景相關(guān)背景：嬰幼兒爽身粉檢測(cè)出石：嬰幼兒爽身粉檢測(cè)出石棉是由于原料滑石?；堑V物質(zhì)棉是由于原料滑石?；堑V物質(zhì)中的一種，它與含有石棉成分的蛇中的一種，它與含有石棉成分的蛇紋巖共同埋藏在地下，因而在自然紋巖共同埋藏在地下，因而在自然形態(tài)下常常含

6、有石棉成分。正因?yàn)樾螒B(tài)下常常含有石棉成分。正因?yàn)槿绱?，美?guó)和歐洲等發(fā)達(dá)國(guó)家規(guī)定，如此，美國(guó)和歐洲等發(fā)達(dá)國(guó)家規(guī)定，2005年以后嬰幼兒制品中禁止使用年以后嬰幼兒制品中禁止使用滑石?；?20102010年年8 8月月7 7日日南方日?qǐng)?bào)南方日?qǐng)?bào) 香港文匯報(bào)報(bào)道，洗發(fā)香港文匯報(bào)報(bào)道，洗發(fā)水類別中，有水類別中，有23款日化產(chǎn)品款日化產(chǎn)品含有低量的二惡烷。含有低量的二惡烷。日化產(chǎn)品和化妝品里多多少日化產(chǎn)品和化妝品里多多少少含二惡烷的，因?yàn)樗侨丈俸和榈?，因?yàn)樗侨栈a(chǎn)品表面活性劑化產(chǎn)品表面活性劑AES（脂（脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉）合肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉）合作過(guò)程中不可避免產(chǎn)生的，作過(guò)程中不可避免產(chǎn)

7、生的，會(huì)隨著會(huì)隨著AES進(jìn)入產(chǎn)品。進(jìn)入產(chǎn)品。強(qiáng)生致癌門(mén)強(qiáng)生致癌門(mén) 事件背景：事件背景： 美國(guó)美國(guó)“安全化妝品運(yùn)動(dòng)聯(lián)盟安全化妝品運(yùn)動(dòng)聯(lián)盟”在當(dāng)?shù)貢r(shí)間在當(dāng)?shù)貢r(shí)間2011年年11月月1日日發(fā)表一份報(bào)告，報(bào)告指出，發(fā)表一份報(bào)告，報(bào)告指出，今年的今年的710月，組織購(gòu)買并檢查了強(qiáng)生在月，組織購(gòu)買并檢查了強(qiáng)生在13個(gè)國(guó)家銷售的嬰兒洗發(fā)水的標(biāo)簽，結(jié)果發(fā)個(gè)國(guó)家銷售的嬰兒洗發(fā)水的標(biāo)簽，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，中國(guó)、美國(guó)、加拿大、印尼、澳大利亞現(xiàn)，中國(guó)、美國(guó)、加拿大、印尼、澳大利亞5個(gè)國(guó)家銷售的上述產(chǎn)品含有個(gè)國(guó)家銷售的上述產(chǎn)品含有季銨鹽季銨鹽-15， 而日本、英國(guó)、瑞典、荷蘭、南非等國(guó)家銷售的同類產(chǎn)品不含有季銨鹽而日本、英國(guó)、

8、瑞典、荷蘭、南非等國(guó)家銷售的同類產(chǎn)品不含有季銨鹽-15。上述產(chǎn)品。上述產(chǎn)品還含有很可能受二惡烷污染的化學(xué)物質(zhì)。該組織質(zhì)疑強(qiáng)生在全球采用雙重標(biāo)準(zhǔn)。還含有很可能受二惡烷污染的化學(xué)物質(zhì)。該組織質(zhì)疑強(qiáng)生在全球采用雙重標(biāo)準(zhǔn)。 專家認(rèn)為：季銨鹽專家認(rèn)為：季銨鹽-15是很多洗發(fā)水中普遍和廣泛使用的防腐劑，也是國(guó)家允許添是很多洗發(fā)水中普遍和廣泛使用的防腐劑，也是國(guó)家允許添加的，在中國(guó)衛(wèi)生部關(guān)于化妝品的法規(guī)中，只要添加量小于加的，在中國(guó)衛(wèi)生部關(guān)于化妝品的法規(guī)中，只要添加量小于0.2%就是合法的。就是合法的。季銨鹽季銨鹽-15-15類白色粉末，屬甲醛供體類白色粉末，屬甲醛供體類防腐劑。類防腐劑。世界衛(wèi)生組織、美國(guó)

9、全國(guó)癌癥研究世界衛(wèi)生組織、美國(guó)全國(guó)癌癥研究所和美國(guó)國(guó)家毒物管理局認(rèn)定，所和美國(guó)國(guó)家毒物管理局認(rèn)定，季季銨鹽銨鹽-15-15和甲醛均為潛在烈性過(guò)敏原，和甲醛均為潛在烈性過(guò)敏原，可引發(fā)皮疹等皮膚炎癥可引發(fā)皮疹等皮膚炎癥。第一節(jié)第一節(jié) 化妝品衛(wèi)生學(xué)方面的主要要求化妝品衛(wèi)生學(xué)方面的主要要求化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化妝品衛(wèi)生化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法化妝品衛(wèi)生化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法化妝品微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法化妝品微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法化妝品安全性評(píng)價(jià)程序和方法化妝品安全性評(píng)價(jià)程序和方法1978化妝品衛(wèi)生規(guī)范化妝品衛(wèi)生規(guī)范1999化妝品衛(wèi)生規(guī)范化妝品衛(wèi)生規(guī)范2007 總則 毒理學(xué)試驗(yàn)方法 衛(wèi)生化學(xué)檢驗(yàn)方法 微生物檢驗(yàn)方

10、法 人體安全性和功效評(píng)價(jià)檢驗(yàn)方法化妝品衛(wèi)生規(guī)范2007版包括： 規(guī)范對(duì)化妝品原料和終產(chǎn)品衛(wèi)生要求以及安全性評(píng)價(jià)的技術(shù)規(guī)定，在我國(guó)生產(chǎn)和銷售的化妝品必須符合該規(guī)定。作為化妝品的原料及產(chǎn)品應(yīng)符合以下衛(wèi)生要求：作為化妝品的原料及產(chǎn)品應(yīng)符合以下衛(wèi)生要求： (1)(1)化妝品應(yīng)該是安全的產(chǎn)品，在正常以及合理化妝品應(yīng)該是安全的產(chǎn)品，在正常以及合理的、可預(yù)見(jiàn)的使用條件下，不能對(duì)人體健康產(chǎn)生危的、可預(yù)見(jiàn)的使用條件下，不能對(duì)人體健康產(chǎn)生危害。害。 (2)(2)化妝品使用的原料必須符合原料的規(guī)定?；瘖y品使用的原料必須符合原料的規(guī)定。化妝品產(chǎn)品必須使用安全，不得對(duì)施用部位產(chǎn)生明顯妝品產(chǎn)品必須使用安全，不得對(duì)施用部

11、位產(chǎn)生明顯刺激和損傷，且無(wú)感染性。刺激和損傷，且無(wú)感染性。一、化妝品原料管理一、化妝品原料管理有機(jī)類有機(jī)類：油脂、蠟、烴、：油脂、蠟、烴、醇、酸、酯醇、酸、酯無(wú)機(jī)類無(wú)機(jī)類：酸、堿、鹽、氧：酸、堿、鹽、氧化物化物高分子（水溶性）高分子（水溶性）：天然：天然高分子、合成高分子、有高分子、合成高分子、有機(jī)高分子、無(wú)機(jī)高分子機(jī)高分子、無(wú)機(jī)高分子天然天然：動(dòng)物、：動(dòng)物、植物、礦物植物、礦物合成合成：全合：全合成、半合成成、半合成主體原料主體原料和輔助原和輔助原料及添加料及添加劑劑按來(lái)源分按來(lái)源分按化學(xué)結(jié)按化學(xué)結(jié)構(gòu)分構(gòu)分按性能按性能用途分用途分化妝品衛(wèi)生規(guī)范化妝品衛(wèi)生規(guī)范-2007版：版：發(fā)布了化妝品中的

12、禁用、限用成分表，還規(guī)定了限用成分的使發(fā)布了化妝品中的禁用、限用成分表，還規(guī)定了限用成分的使用濃度和限量，使用目的或相關(guān)的警示用語(yǔ)等，從多角度確保用濃度和限量，使用目的或相關(guān)的警示用語(yǔ)等，從多角度確?；瘖y品的安全性?；瘖y品的安全性。 化妝品衛(wèi)生監(jiān)督條例化妝品衛(wèi)生監(jiān)督條例-第九條第九條：新原料新原料：化妝品新原料是指在國(guó)內(nèi)首次使用于化妝品生產(chǎn)的天化妝品新原料是指在國(guó)內(nèi)首次使用于化妝品生產(chǎn)的天然或人工原料。使用化妝品新原料生產(chǎn)化妝品，必須經(jīng)國(guó)務(wù)院然或人工原料。使用化妝品新原料生產(chǎn)化妝品，必須經(jīng)國(guó)務(wù)院衛(wèi)生行政部門(mén)批準(zhǔn)。衛(wèi)生行政部門(mén)批準(zhǔn)。已使用化妝品成分名單已使用化妝品成分名單-2003版：版：317

13、6種種一般原料：一般原料：2128植物原料：植物原料：502特殊原料：特殊原料：546（一般限用、防腐、防曬、色素）（一般限用、防腐、防曬、色素）1.1.禁用成分禁用成分關(guān)于解釋化妝品禁用物質(zhì)概念的復(fù)函關(guān)于解釋化妝品禁用物質(zhì)概念的復(fù)函 -衛(wèi)生部監(jiān)衛(wèi)生部監(jiān)督局督局2007.2我國(guó)我國(guó)化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)和和化妝品衛(wèi)生規(guī)范化妝品衛(wèi)生規(guī)范規(guī)定的禁用物規(guī)定的禁用物質(zhì)是指不能作為化妝品生產(chǎn)原料即組分添加到化妝品中的物質(zhì)質(zhì)是指不能作為化妝品生產(chǎn)原料即組分添加到化妝品中的物質(zhì)。如果技術(shù)上無(wú)法避免禁用物質(zhì)作為雜質(zhì)帶入化妝品時(shí)，則化如果技術(shù)上無(wú)法避免禁用物質(zhì)作為雜質(zhì)帶入化妝品時(shí)，則化妝品成品必須符合妝品

14、成品必須符合化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化妝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)和和化妝品衛(wèi)生規(guī)范化妝品衛(wèi)生規(guī)范對(duì)化妝品的一般要求，即在正常及合理的、可預(yù)見(jiàn)的使用條件對(duì)化妝品的一般要求，即在正常及合理的、可預(yù)見(jiàn)的使用條件下，不得對(duì)人體健康產(chǎn)生危害下，不得對(duì)人體健康產(chǎn)生危害。 化妝品衛(wèi)生規(guī)范化妝品衛(wèi)生規(guī)范-2007版：版： 化學(xué)物質(zhì)化學(xué)物質(zhì) 1208種-石棉、二惡烷、鉻、釹 中藥中藥/植物植物 78種-半夏、烏頭化妝品衛(wèi)生規(guī)范-2007版： 化學(xué)物質(zhì)化學(xué)物質(zhì) 73種-甲醛、氫氧化鈉、過(guò)氧化氫、水楊酸 防腐劑防腐劑（均為加入化妝品中以抑制微生物在該化妝品中生長(zhǎng)為目的的物質(zhì)）（均為加入化妝品中以抑制微生物在該化妝品中生長(zhǎng)為目的的物質(zhì)） 5

15、6種-DMDM乙內(nèi)酰脲、水楊酸、甲醛 防曬劑防曬劑（為保護(hù)皮膚免受輻射所帶來(lái)的某些有害作用而在化妝品中加入的物質(zhì)）（為保護(hù)皮膚免受輻射所帶來(lái)的某些有害作用而在化妝品中加入的物質(zhì)） 28種-紫外線屏蔽劑（二氧化鈦、氧化鋅），紫外線吸收劑（胡莫柳酯 ） 著色劑著色劑（符合規(guī)定范圍及使用范圍，采納了（符合規(guī)定范圍及使用范圍，采納了“歐盟準(zhǔn)用著色劑歐盟準(zhǔn)用著色劑CI號(hào)號(hào)”） 156種-使用索引號(hào)CI 染發(fā)劑染發(fā)劑（在允許原料范圍，并符合限制使用要求和標(biāo)簽標(biāo)注）（在允許原料范圍，并符合限制使用要求和標(biāo)簽標(biāo)注） 93種-對(duì)苯二胺、間苯二酚、氫醌2.2.限用成分限用成分二、制成品二、制成品1. 化妝品生產(chǎn)過(guò)

16、程中微生物的存在是另一影響化妝品化妝品生產(chǎn)過(guò)程中微生物的存在是另一影響化妝品質(zhì)量的重要因素。質(zhì)量的重要因素。2. 汞、砷、鉛等重金屬這類污染成分隨化妝品原料進(jìn)汞、砷、鉛等重金屬這類污染成分隨化妝品原料進(jìn)入化妝品并疊加。入化妝品并疊加。3. 制備化妝品的機(jī)械和設(shè)備可能將某些重金屬帶入化制備化妝品的機(jī)械和設(shè)備可能將某些重金屬帶入化妝品成品中。妝品成品中。1.1.化妝品微生物的質(zhì)量要求化妝品微生物的質(zhì)量要求 化妝品受微生物污染后可使化妝品的色、形、氣味等化妝品受微生物污染后可使化妝品的色、形、氣味等發(fā)生變化，品質(zhì)下降。發(fā)生變化，品質(zhì)下降。 致病菌的污染可導(dǎo)致人體健康損害，如化膿性細(xì)菌污致病菌的污染可

17、導(dǎo)致人體健康損害，如化膿性細(xì)菌污染可引起皮膚和眼部的感染。當(dāng)人體抵抗力低時(shí)，某些染可引起皮膚和眼部的感染。當(dāng)人體抵抗力低時(shí)，某些非病原菌或條件致病菌也會(huì)引起感染。非病原菌或條件致病菌也會(huì)引起感染。 菌落總數(shù) 糞大腸菌群銅綠假單胞菌 金黃色葡萄球菌霉菌和酵母菌化妝品微生化妝品微生物控制指標(biāo)物控制指標(biāo)具體規(guī)定：具體規(guī)定： 眼部化妝品及口唇等粘膜用化妝品以及嬰兒和兒童用眼部化妝品及口唇等粘膜用化妝品以及嬰兒和兒童用化妝品菌落總數(shù)不得大于化妝品菌落總數(shù)不得大于500CFU/mL 或或500CFU/g。 其它化妝品菌落總數(shù)不得大于其它化妝品菌落總數(shù)不得大于1000CFU/mL 或或1000CFU/g。

18、每克或每毫升產(chǎn)品中不得檢出糞大腸菌群、銅綠假單每克或每毫升產(chǎn)品中不得檢出糞大腸菌群、銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌。胞菌和金黃色葡萄球菌。 化妝品中霉菌和酵母菌總數(shù)不得大于化妝品中霉菌和酵母菌總數(shù)不得大于100CFU/mL 或或100CFU/g?；瘖y品中所含有毒物質(zhì)（常見(jiàn)污染物）不得超過(guò)下表中規(guī)定的限量?；瘖y品中所含有毒物質(zhì)（常見(jiàn)污染物）不得超過(guò)下表中規(guī)定的限量。2 2化妝品中所含有毒物質(zhì)化妝品中所含有毒物質(zhì)( (常見(jiàn)污染物常見(jiàn)污染物) )的限量的限量規(guī)定規(guī)定 化妝品的包裝千姿百態(tài)、所用材料多種多樣，難以化妝品的包裝千姿百態(tài)、所用材料多種多樣，難以對(duì)各種包裝分門(mén)別類作出規(guī)定，因此，僅對(duì)其作了原則

19、對(duì)各種包裝分門(mén)別類作出規(guī)定，因此，僅對(duì)其作了原則性規(guī)定，即要求性規(guī)定，即要求化妝品的直接容器材料必須無(wú)毒，不得化妝品的直接容器材料必須無(wú)毒，不得含有或釋放可能對(duì)使用者造成傷害的有害物質(zhì)含有或釋放可能對(duì)使用者造成傷害的有害物質(zhì)。三、化妝品外包裝三、化妝品外包裝主要包括：紙容器（盒、袋、管、罐、桶杯）塑料容器（盒、軟管、罐、瓶杯）玻璃容器（瓶杯）金屬容器（盒、罐、瓶杯）第二節(jié)第二節(jié) 衛(wèi)生化學(xué)檢驗(yàn)方法衛(wèi)生化學(xué)檢驗(yàn)方法一、化妝品中無(wú)機(jī)成分的測(cè)定一、化妝品中無(wú)機(jī)成分的測(cè)定1.1.汞元素測(cè)試汞元素測(cè)試 汞是有害金屬元素，汞是有害金屬元素，汞及其化合物都能穿透皮膚，進(jìn)入體內(nèi)汞及其化合物都能穿透皮膚，進(jìn)入體內(nèi)

20、，對(duì)，對(duì)人體造成傷害。汞的測(cè)試分析方法有三種：人體造成傷害。汞的測(cè)試分析方法有三種：碘化亞銅比色法、無(wú)火焰碘化亞銅比色法、無(wú)火焰原子吸收法和中子活化法原子吸收法和中子活化法。 由于汞元素容易揮發(fā)，因此由于汞元素容易揮發(fā)，因此在檢測(cè)樣品時(shí)要避免采取高溫灼燒干在檢測(cè)樣品時(shí)要避免采取高溫灼燒干灰化法灰化法。通常預(yù)處理方法有：濕式回流消解法、濕式催化消解法和浸。通常預(yù)處理方法有：濕式回流消解法、濕式催化消解法和浸提法。測(cè)定時(shí)將標(biāo)準(zhǔn)汞液的吸光值繪成標(biāo)準(zhǔn)曲線，再將消解后得到的提法。測(cè)定時(shí)將標(biāo)準(zhǔn)汞液的吸光值繪成標(biāo)準(zhǔn)曲線，再將消解后得到的樣品溶液加入氯化亞錫，使汞離子變成游離態(tài)的汞原子，并導(dǎo)人測(cè)汞樣品溶液加入

21、氯化亞錫，使汞離子變成游離態(tài)的汞原子，并導(dǎo)人測(cè)汞儀測(cè)出吸光度值，再?gòu)臉?biāo)準(zhǔn)曲線上查出對(duì)應(yīng)的汞含量。儀測(cè)出吸光度值，再?gòu)臉?biāo)準(zhǔn)曲線上查出對(duì)應(yīng)的汞含量。2.2.鉛元素測(cè)試鉛元素測(cè)試 鉛對(duì)所有生物體都有毒性，鉛中毒能引起神經(jīng)、血液、代謝和分泌鉛對(duì)所有生物體都有毒性，鉛中毒能引起神經(jīng)、血液、代謝和分泌等系統(tǒng)的病變，嚴(yán)重時(shí)還會(huì)損壞肝、腎等器官。等系統(tǒng)的病變，嚴(yán)重時(shí)還會(huì)損壞肝、腎等器官。 由于鉛和鉛化合物可以增白或調(diào)配色彩，常有添加過(guò)量鉛元素的違由于鉛和鉛化合物可以增白或調(diào)配色彩，常有添加過(guò)量鉛元素的違規(guī)化妝品混入銷售市場(chǎng)，因此對(duì)化妝品中鉛含量的測(cè)試很有必要。規(guī)化妝品混入銷售市場(chǎng)，因此對(duì)化妝品中鉛含量的測(cè)試很

22、有必要。 鉛的樣品預(yù)前的處理方法有鉛的樣品預(yù)前的處理方法有濕式消解法、干濕消解法和浸提法濕式消解法、干濕消解法和浸提法，其其測(cè)定方法有火焰原子吸收分光光度法、雙硫腙萃取分光光度法。測(cè)定方法有火焰原子吸收分光光度法、雙硫腙萃取分光光度法。3.3.砷元素測(cè)試砷元素測(cè)試 砷元素雖為人體必需的元素，但由于砷元素雖為人體必需的元素，但由于不同形態(tài)的砷毒性差別很大不同形態(tài)的砷毒性差別很大，因，因此使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格區(qū)分。此使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格區(qū)分。 單質(zhì)砷元素?zé)o毒性，但其化合物都有毒，三價(jià)砷的毒性更大。單質(zhì)砷元素?zé)o毒性，但其化合物都有毒，三價(jià)砷的毒性更大。 砷的樣品預(yù)前的處理方法有砷的樣品預(yù)前的處理方法有濕式消解法和干

23、灰化法，其測(cè)定方法有二濕式消解法和干灰化法，其測(cè)定方法有二乙氨基二硫代甲酸銀分光光度法、砷斑法乙氨基二硫代甲酸銀分光光度法、砷斑法。AsArsenic 74.92 4.其他無(wú)機(jī)元素其他無(wú)機(jī)元素鎘：原子吸收、微分電位溶出法等。鎘：原子吸收、微分電位溶出法等。鍶、鈹、鈷及可溶性鋅鹽：原子吸收分光光度法。鍶、鈹、鈷及可溶性鋅鹽：原子吸收分光光度法。砷、鉛、鎘、鍶、鉻、鉍等：微波消解砷、鉛、鎘、鍶、鉻、鉍等：微波消解ICP-AES法（應(yīng)用于測(cè)定固體類化法（應(yīng)用于測(cè)定固體類化妝品中）。妝品中）。硒：微波消解硒：微波消解-氣相色譜法、原子熒光光譜法等。氣相色譜法、原子熒光光譜法等。硼：甲亞胺硼：甲亞胺-H

24、與硼的顯色反應(yīng)。與硼的顯色反應(yīng)。5無(wú)機(jī)陰陽(yáng)離子無(wú)機(jī)陰陽(yáng)離子陽(yáng)離子，如陽(yáng)離子，如K+、Na+、Ca2+、Mg2+：原子吸收法；：原子吸收法；陰離子，如陰離子，如F一一、CI一一、Br一一、NO3一一、SO4 2一一和陽(yáng)離子和陽(yáng)離子NH4+，可采用離子色，可采用離子色譜法測(cè)定。譜法測(cè)定。二、有機(jī)禁限用物質(zhì)的測(cè)定二、有機(jī)禁限用物質(zhì)的測(cè)定1.甲醇甲醇 甲醇是無(wú)色、易揮發(fā)的有機(jī)溶劑，有毒。甲醇是無(wú)色、易揮發(fā)的有機(jī)溶劑，有毒。甲醇對(duì)人體眼睛的危害較甲醇對(duì)人體眼睛的危害較大大，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)限量0.20.2 ( (體積分?jǐn)?shù)體積分?jǐn)?shù)) )。甲醇的測(cè)定方法有。甲醇的測(cè)定方法有氣相色譜法和氣相色譜法和比色

25、法比色法。其中氣相色譜法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，已定為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。其中氣相色譜法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，已定為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。2.防腐劑防腐劑 防腐劑可采用防腐劑可采用氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜質(zhì)譜(GC-MS)法或液相色譜一質(zhì)譜法等法或液相色譜一質(zhì)譜法等測(cè)定化妝品中易揮發(fā)或高沸點(diǎn)的化學(xué)物質(zhì)。測(cè)定化妝品中易揮發(fā)或高沸點(diǎn)的化學(xué)物質(zhì)。 3.美白祛斑成分美白祛斑成分 可采用可采用氣相色譜法、氣相色譜氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定質(zhì)譜法測(cè)定化妝品衛(wèi)生規(guī)范化妝品衛(wèi)生規(guī)范中的中的禁用成分苯酚和氫醌；用禁用成分苯酚和氫醌；用氣相色譜法、液相色譜法、薄層色譜法等分析氣相色譜法

26、、液相色譜法、薄層色譜法等分析技術(shù)技術(shù)測(cè)定熊果苷、曲酸、抗壞血酸磷酸酯鎂、測(cè)定熊果苷、曲酸、抗壞血酸磷酸酯鎂、L-L-抗壞血酸棕櫚酸酯等功抗壞血酸棕櫚酸酯等功效成分。效成分。4. 紫外線吸收劑紫外線吸收劑 紫外線吸收劑的檢測(cè)以紫外線吸收劑的檢測(cè)以高效液相色譜法高效液相色譜法為主。為主。5. 激素激素 激素的檢測(cè)仍以性激素為主，雌二醇、雌三醇、睪丸酮、雌酮、甲基睪激素的檢測(cè)仍以性激素為主，雌二醇、雌三醇、睪丸酮、雌酮、甲基睪丸酮、黃體酮、己烯雌酚等丸酮、黃體酮、己烯雌酚等7種性激素采用種性激素采用高效液相色譜法高效液相色譜法測(cè)定。也有先用測(cè)定。也有先用七氟丁酸酐衍生化后，再以七氟丁酸酐衍生化后，

27、再以GC-MS聯(lián)用技術(shù)測(cè)定性激素。聯(lián)用技術(shù)測(cè)定性激素。6. 染發(fā)劑染發(fā)劑 染發(fā)劑種類非常多，如氧化型染發(fā)劑中的苯胺、苯酚、鄰甲酚、鄰苯二染發(fā)劑種類非常多，如氧化型染發(fā)劑中的苯胺、苯酚、鄰甲酚、鄰苯二胺、鄰苯二酚、間苯二胺、對(duì)苯二酚、對(duì)苯二胺、間苯二酚、對(duì)甲苯二胺、胺、鄰苯二酚、間苯二胺、對(duì)苯二酚、對(duì)苯二胺、間苯二酚、對(duì)甲苯二胺、間甲苯二胺、僅萘酚等可采用間甲苯二胺、僅萘酚等可采用氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)質(zhì)譜法、高效毛細(xì)管電泳法譜法、高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定。測(cè)定。7 7其他有機(jī)成分其他有機(jī)成分 斑蝥素（育發(fā)類產(chǎn)品中的限用成分）：可采用氣相色譜斑蝥

28、素（育發(fā)類產(chǎn)品中的限用成分）：可采用氣相色譜- -質(zhì)譜法進(jìn)質(zhì)譜法進(jìn)行測(cè)定。行測(cè)定。 酞酸酯（如鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二酞酸酯（如鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸丁基芐基酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸丁基芐基酯、鄰苯二甲酸二(2-(2-乙基己乙基己) )酯和鄰苯二甲酸酯和鄰苯二甲酸二正辛酯六種酞酸酯等）：可采用高效液相色譜法和氣相色譜法測(cè)定，方二正辛酯六種酞酸酯等）：可采用高效液相色譜法和氣相色譜法測(cè)定，方法的檢出限、回收率、精密度等指標(biāo)均能滿足分析要求。法的檢出限、回收率、精密度等指標(biāo)均能滿足分析要求。 抗氧化劑（如丁基羥基茴香醚和二丁

29、基羥基甲苯）：液相色譜法和抗氧化劑（如丁基羥基茴香醚和二丁基羥基甲苯）：液相色譜法和氣相色譜氣相色譜- -質(zhì)譜法均可用于測(cè)定化妝品中的檢測(cè)。質(zhì)譜法均可用于測(cè)定化妝品中的檢測(cè)。 二惡烷（具有致癌活性，是化妝品組分中的禁用物質(zhì)）：可以采用二惡烷（具有致癌活性，是化妝品組分中的禁用物質(zhì)）：可以采用頂空氣相色譜法測(cè)定。頂空氣相色譜法測(cè)定。第三節(jié)第三節(jié) 微生物檢驗(yàn)方法微生物檢驗(yàn)方法 化妝品的原料為油脂、膠質(zhì)、蛋白質(zhì)、化妝品的原料為油脂、膠質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素等微生物生長(zhǎng)、繁殖所必需的碳源、維生素等微生物生長(zhǎng)、繁殖所必需的碳源、氮源及礦物質(zhì)；氮源及礦物質(zhì)； 其次，化妝品中的水分是微生物生長(zhǎng)、其次，化妝品中的

30、水分是微生物生長(zhǎng)、繁殖所必備條件；繁殖所必備條件； 第三，第三，pH值一般為值一般為47，最適宜微生，最適宜微生物的生長(zhǎng)；物的生長(zhǎng)； 另外，化妝品生產(chǎn)、存放和使用時(shí)的溫另外，化妝品生產(chǎn)、存放和使用時(shí)的溫度，也適宜大多數(shù)病源菌的生長(zhǎng)、繁殖。度，也適宜大多數(shù)病源菌的生長(zhǎng)、繁殖。 因此，當(dāng)化妝品接觸這些微生物后將發(fā)因此，當(dāng)化妝品接觸這些微生物后將發(fā)生變質(zhì)腐敗而不能使用；不僅會(huì)造成經(jīng)濟(jì)生變質(zhì)腐敗而不能使用；不僅會(huì)造成經(jīng)濟(jì)損失，而且更為嚴(yán)重的是，若化妝品污染損失，而且更為嚴(yán)重的是，若化妝品污染上了致病菌，將危及消費(fèi)者的身體健康。上了致病菌，將危及消費(fèi)者的身體健康。 一、常見(jiàn)污染化妝品的微生物一、常見(jiàn)污染

31、化妝品的微生物對(duì)化妝品質(zhì)量影響大的主要是病源細(xì)菌和致病真菌等致病菌。對(duì)化妝品質(zhì)量影響大的主要是病源細(xì)菌和致病真菌等致病菌。 1.1.病源細(xì)菌病源細(xì)菌 病源細(xì)菌主要包括病源細(xì)菌主要包括革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌。（1 1）革蘭氏陽(yáng)性菌主要包括：）革蘭氏陽(yáng)性菌主要包括：葡萄球菌：金黃色葡萄球菌是兼性細(xì)菌，葡萄球菌：金黃色葡萄球菌是兼性細(xì)菌，人體受到此菌的感染，可引起生癤子、化膿人體受到此菌的感染，可引起生癤子、化膿性炎癥，眼部引起麥粒腫、結(jié)膜炎等炎癥。性炎癥，眼部引起麥粒腫、結(jié)膜炎等炎癥。鏈球菌：兼性細(xì)菌，受感染后，可引起急鏈球菌：兼性細(xì)菌，受感染后，可引起急性咽喉炎、風(fēng)

32、濕熱與急性腎炎等。性咽喉炎、風(fēng)濕熱與急性腎炎等。芽孢及梭狀芽孢桿菌：炭疽桿菌能引起炭疽病，破傷風(fēng)桶狀桿芽孢及梭狀芽孢桿菌：炭疽桿菌能引起炭疽病，破傷風(fēng)桶狀桿菌是破傷風(fēng)的病原體。菌是破傷風(fēng)的病原體。棒狀桿菌：白喉棒狀桿菌是白喉的病源菌。棒狀桿菌：白喉棒狀桿菌是白喉的病源菌。（2）革蘭氏陰性菌。）革蘭氏陰性菌。假單胞菌：綠膿桿菌可使燒傷病人感染，假單胞菌：綠膿桿菌可使燒傷病人感染，還可引起肺炎。還可引起肺炎。沙門(mén)氏菌：沙門(mén)氏傷沙門(mén)氏菌：沙門(mén)氏傷( (副傷副傷) )寒桿菌是引起寒桿菌是引起傷傷( (副傷副傷) )寒的病源菌。寒的病源菌。弧菌：霍亂弧菌能引起霍亂病?；【夯魜y弧菌能引起霍亂病。埃希氏桿

33、菌：大腸桿菌能引起腹瀉、腎盂埃希氏桿菌：大腸桿菌能引起腹瀉、腎盂腎炎和膀胱炎。腎炎和膀胱炎。志賀氏桿菌：志賀氏痢疾桿菌是痢疾的病志賀氏桿菌：志賀氏痢疾桿菌是痢疾的病源菌。源菌。雙球菌：肺炎鏈球菌能引起大葉肺炎、腦雙球菌：肺炎鏈球菌能引起大葉肺炎、腦膜炎和結(jié)膜炎。膜炎和結(jié)膜炎。2.致病真菌致病真菌表皮癬菌、白色念球菌、新型隱球菌。表皮癬菌、白色念球菌、新型隱球菌。3.霉菌霉菌青霉、曲霉、根霉、毛霉。青霉、曲霉、根霉、毛霉。不同類型的化妝品具有不同的染菌特點(diǎn)：不同類型的化妝品具有不同的染菌特點(diǎn)： 膏霜類化妝品含有水分、碳源和氮源，這類化妝品的微生物污膏霜類化妝品含有水分、碳源和氮源，這類化妝品的微

34、生物污染率最高，檢出的微生物種類也最多染率最高，檢出的微生物種類也最多：類大腸菌群、綠膿桿菌、類大腸菌群、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌等。等。 洗發(fā)類化妝品中含有大量的水分和微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)，其洗發(fā)類化妝品中含有大量的水分和微生物生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)，其含有的大量的表面活性劑，特別容易受到含有的大量的表面活性劑，特別容易受到革蘭氏陰性菌革蘭氏陰性菌的污染，的污染，使得其活性成分失效。使得其活性成分失效。霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌引起的污染會(huì)使其產(chǎn)生異味，引起的污染會(huì)使其產(chǎn)生異味，黏度會(huì)發(fā)生改變。黏度會(huì)發(fā)生改變。 粉餅類的污染源主要是來(lái)自于原材料，此類化妝品檢出抵抗力粉餅類的污染源主要是來(lái)

35、自于原材料，此類化妝品檢出抵抗力較強(qiáng)的較強(qiáng)的需氧芽孢菌需氧芽孢菌較多。較多。 美容類化妝品的染菌率不高，一旦被致病菌污染，將會(huì)對(duì)人體美容類化妝品的染菌率不高，一旦被致病菌污染，將會(huì)對(duì)人體健康產(chǎn)生較大的影響，特別是眼部化妝品和唇膏。健康產(chǎn)生較大的影響，特別是眼部化妝品和唇膏。35污 染 菌產(chǎn) 品微生物數(shù)目（cfu/g或mL）銅綠假單胞菌護(hù)手霜1.2 x 103嗜麥芽假單胞菌睫毛油7.0 x 105類產(chǎn)堿假單胞菌洗面奶3.1 x 104類產(chǎn)堿假單胞菌發(fā)乳1.9 x 104熒光假單胞菌發(fā)油4.0 x 104惡臭假單胞菌啫哩膏2.5 x 104奧斯陸莫拉菌保濕霜1.3 x 103陰溝腸桿菌牙膏2.3

36、x 105產(chǎn)氣腸桿菌牙粉3.4 x 106化妝品成品中的常見(jiàn)微生物化妝品成品中的常見(jiàn)微生物微生物污染微生物污染一級(jí)污染：化妝品在生產(chǎn)過(guò)程中的污染。因此一級(jí)污染：化妝品在生產(chǎn)過(guò)程中的污染。因此原材料原材料本身的理化性質(zhì)、含水量、本身的理化性質(zhì)、含水量、生產(chǎn)環(huán)境和設(shè)備、生產(chǎn)工生產(chǎn)環(huán)境和設(shè)備、生產(chǎn)工藝、包裝容器和環(huán)境藝、包裝容器和環(huán)境、生產(chǎn)工人的健康狀況等均與化、生產(chǎn)工人的健康狀況等均與化妝品產(chǎn)品的衛(wèi)生質(zhì)量有關(guān)妝品產(chǎn)品的衛(wèi)生質(zhì)量有關(guān)。 二級(jí)污染：化妝品在使用過(guò)程中受到的污染。二級(jí)污染：化妝品在使用過(guò)程中受到的污染?；瘖y品啟封后，使用或存放過(guò)程中發(fā)生的污染，包括化妝品啟封后，使用或存放過(guò)程中發(fā)生的污染

37、，包括手手部接觸化妝品后將微生物帶入，空氣中的微生物落入部接觸化妝品后將微生物帶入，空氣中的微生物落入而而被污染。一些美容美發(fā)店的化妝品是共用的，更可造成被污染。一些美容美發(fā)店的化妝品是共用的，更可造成交叉感染。盡管化妝品中的防腐劑可抑制微生物的繁殖，交叉感染。盡管化妝品中的防腐劑可抑制微生物的繁殖，但其作用有限。但其作用有限。 二、微生物對(duì)化妝品污染的途徑二、微生物對(duì)化妝品污染的途徑三、化妝品中微生物的檢測(cè)方法三、化妝品中微生物的檢測(cè)方法 參照參照化妝品衛(wèi)生規(guī)范化妝品衛(wèi)生規(guī)范(2007(2007版版) )，主要對(duì)化妝品微生物檢驗(yàn)，主要對(duì)化妝品微生物檢驗(yàn)方法涉及的菌落總數(shù)測(cè)定方法，糞大腸菌群、

38、銅綠假單胞菌、金黃方法涉及的菌落總數(shù)測(cè)定方法，糞大腸菌群、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、霉菌等致病菌檢測(cè)方法進(jìn)行介紹。色葡萄球菌、霉菌等致病菌檢測(cè)方法進(jìn)行介紹。微生物檢驗(yàn)的基本要求微生物檢驗(yàn)樣品的采集、保存及制備適用范圍適用范圍隨機(jī)抽取相應(yīng)數(shù)量的包裝單位。應(yīng)從批的整體中各部位抽取，如從四角+中間；分上、中、下層；或上、中上、中、中下、下層；梅花點(diǎn)式等。 所有接觸樣品的工具、容器都必須保持清潔。 樣品的采集樣品的采集1、具有代表性3、檢驗(yàn)量 檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別從兩個(gè)包裝單位以上的樣品中共取10 g或10 mL。包裝量小于20g的樣品，采樣量可適當(dāng)增加樣品包裝數(shù)量。2、抽/采樣數(shù)量 按照抽樣批及抽樣方

39、案 符合JJF10702005 定量包裝商品凈含量計(jì)量檢驗(yàn)規(guī)則液體樣品 膏、霜、乳劑半固體狀樣品 固體樣品無(wú)菌容器、材料及操作樣品的均一性樣品的制備樣品的制備 樣品的制備及注意事項(xiàng)樣品的制備及注意事項(xiàng) 樣品應(yīng)放在室溫陰涼干燥處樣品先進(jìn)行微生物檢驗(yàn)，再做其他指標(biāo)須防止微生物的再污染和擴(kuò)散如檢出糞大腸菌群或其它致病菌，自報(bào)告發(fā)出之日起該菌種及被檢樣品應(yīng)保存一個(gè)月樣品的檢驗(yàn)及保管樣品的檢驗(yàn)及保管 1. 化妝品中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)化妝品中細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè)菌落總數(shù)（Aerobic bacterial count）是指化妝品檢樣經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養(yǎng)后（如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、pH 值、需氧性質(zhì)等

40、），1g（1mL）檢樣中所含菌落的總數(shù)。所得結(jié)果只包括一群本方法規(guī)定的條件下生長(zhǎng)的嗜中溫的需氧性菌落總數(shù)。 測(cè)定菌落總數(shù)便于判明樣品被細(xì)菌污染測(cè)定菌落總數(shù)便于判明樣品被細(xì)菌污染的程度，是對(duì)樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)總評(píng)價(jià)的綜合的程度，是對(duì)樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)總評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)。依據(jù)。 數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)處理處理混合平板混合平板的制備的制備細(xì)菌的培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)檢查結(jié)果、檢查結(jié)果、觀察與計(jì)數(shù)觀察與計(jì)數(shù)供試液供試液的制備的制備書(shū)寫(xiě)檢驗(yàn)書(shū)寫(xiě)檢驗(yàn)記錄單記錄單細(xì)菌總數(shù)檢查流程圖細(xì)菌總數(shù)檢查流程圖化妝品中防腐劑抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)作用。 在含卵磷脂、吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行中和。對(duì)尼泊金類、苯甲酸類、六氯酚類等有效，但對(duì)卡松類的防腐劑的中和

41、效果有限。 卡松的中和劑半胱氨酸,可較好的中和卡松的抑菌效果。因此，檢測(cè)時(shí)不同的防腐劑加入不同的中和劑。 為便于區(qū)別化妝品中的顆粒與菌落，可在每 100mL 卵磷脂吐溫 80 營(yíng)養(yǎng)瓊脂中加入 1mL 0.5的 TTC（,3,5-三苯基氯化四氮唑） 溶液，如有細(xì)菌存在，培養(yǎng)后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無(wú)變化。 在膏霜類化妝品中，微生物都是吸附或附著于顆粒狀的原料中，檢測(cè)時(shí)不易洗脫下來(lái)。因此，需要驗(yàn)證檢測(cè)方法的有效性。2.2.化妝品中糞大腸菌群的檢測(cè)化妝品中糞大腸菌群的檢測(cè) 糞大腸菌群（Fecal coliforms） 是一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌，在 44.50.5培養(yǎng) 24h4

42、8h ，能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。該菌來(lái)自糞便，是重要的衛(wèi)生指示菌。該菌來(lái)自糞便，是重要的衛(wèi)生指示菌。 基本操作方法1、取稀釋后的檢液加到雙倍乳糖膽鹽培養(yǎng)基中，置于44.5 培養(yǎng)2448h，如不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，則為陰性。2、如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則接種到瓊脂平板上，置37 培養(yǎng)1824h，典型特征為紫黑色，中心顏色較深。挑選可疑菌落，涂片做革蘭染色鏡檢。3、同時(shí)接種到蛋白胨水中，置44 培養(yǎng)24h，加入靛基質(zhì)試劑約0.5mL，觀察。陽(yáng)性者液面呈玫瑰紅色，陰性呈試劑本色。4、兩種現(xiàn)象共存，可報(bào)告樣品中檢出糞大腸菌群。44 44 0.50.524242h2h0.5mL 0.5mL 靛基質(zhì)靛基質(zhì)產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)酸：黃色

43、產(chǎn)氣：氣泡產(chǎn)氣：氣泡產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣書(shū)寫(xiě)檢驗(yàn)書(shū)寫(xiě)檢驗(yàn)記錄單記錄單不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣增增菌菌培培養(yǎng)養(yǎng)供試供試液的液的制備制備配培配培養(yǎng)基養(yǎng)基和稀和稀釋液釋液檢查檢查結(jié)果結(jié)果判斷判斷44 44 0.50.52428h2428h分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)蛋白胨水蛋白胨水中培養(yǎng)中培養(yǎng)最終結(jié)最終結(jié)果判斷果判斷特特征征菌菌落落36361 1 1824 h1824 h雙倍乳糖膽鹽雙倍乳糖膽鹽EMBEMB瓊脂瓊脂液面玫瑰紅色液面玫瑰紅色紫黑色紫黑色糞大腸菌群檢查流程圖糞大腸菌群檢查流程圖3.3.化妝品中銅綠假單胞菌的檢測(cè)化妝品中銅綠假單胞菌的檢測(cè) 銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）屬于假

44、單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽(yáng)性，能產(chǎn)生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在 421條件下能生長(zhǎng)。 該菌對(duì)人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血該菌對(duì)人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等。癥等。 基本操作步驟1、增菌培養(yǎng)：將稀釋樣加到SCDLP（Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate Broth）培養(yǎng)基中37培養(yǎng)1824h，若有菌，則生成一層薄菌膜，呈黃綠色或藍(lán)綠色。2、分離培養(yǎng)：從上述薄膜處挑取培養(yǎng)物，劃線接種在十六烷基三甲基溴化銨瓊脂平板上，37培養(yǎng)1824h。綠膿桿菌的菌落扁平無(wú)定型，向周邊擴(kuò)散或略有蔓延，表面濕潤(rùn)，呈灰白色，周

45、圍有水溶性色素。驗(yàn)證試驗(yàn)：a 染色鏡檢：挑取可疑菌落，涂片，革蘭染色，鏡檢為革蘭陰性者進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)。染色鏡檢：挑取可疑菌落，涂片，革蘭染色，鏡檢為革蘭陰性者進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)。b 氧化酶試驗(yàn)：將可疑菌落涂在濾紙片上，滴加新配制二甲基對(duì)苯二胺，氧化酶試驗(yàn)：將可疑菌落涂在濾紙片上，滴加新配制二甲基對(duì)苯二胺，1530s出現(xiàn)出現(xiàn)紅色為陽(yáng)性。紅色為陽(yáng)性。c 綠膿菌素試驗(yàn)：取可疑菌落，接種在綠膿菌素測(cè)定培養(yǎng)基上，綠膿菌素試驗(yàn)：取可疑菌落，接種在綠膿菌素測(cè)定培養(yǎng)基上， 37培養(yǎng)培養(yǎng)24h，加入，加入氯仿，待氯仿提取液呈藍(lán)色，加鹽酸，如鹽酸呈紅色，則被檢物中含綠膿菌素。氯仿，待氯仿提取液呈藍(lán)色，加鹽酸，如鹽酸呈

46、紅色，則被檢物中含綠膿菌素。d 硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)：挑取可疑菌落，接種在硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基中，硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)：挑取可疑菌落，接種在硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基中， 37培養(yǎng)培養(yǎng)24h，觀察。產(chǎn)生氣體者，表明該菌能還原硝酸鹽，分解亞硝酸，觀察。產(chǎn)生氣體者，表明該菌能還原硝酸鹽，分解亞硝酸鹽產(chǎn)生氮?dú)狻｛}產(chǎn)生氮?dú)?。e 明膠液化試驗(yàn)：取可疑菌落，穿刺接種在明膠培養(yǎng)基中，明膠液化試驗(yàn)：取可疑菌落，穿刺接種在明膠培養(yǎng)基中， 37培養(yǎng)培養(yǎng)24h，放冰箱約放冰箱約20min，仍呈溶解狀為陽(yáng)性。，仍呈溶解狀為陽(yáng)性。f 42生長(zhǎng)試驗(yàn)：取可疑菌落，穿刺接種在明膠培養(yǎng)基中，生長(zhǎng)試驗(yàn)：取可疑菌落，穿刺接種在明膠培養(yǎng)基中， 37培養(yǎng)培養(yǎng)24h，放，放冰箱約冰箱約20min，仍呈溶解狀為陽(yáng)性。，仍呈溶解狀為陽(yáng)性。 結(jié)果報(bào)告 增菌分離培養(yǎng)后，有可疑現(xiàn)象證明有革蘭陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗(yàn)皆為陽(yáng)性，可報(bào)告被檢樣含綠膿桿菌；如綠膿菌素試驗(yàn)陰性而液化明膠、硝酸鹽產(chǎn)氣、 42生長(zhǎng)試驗(yàn)三者皆為陽(yáng)性，可報(bào)告被檢樣含綠膿桿菌。銅綠假單胞菌檢查流程圖銅綠假單胞菌檢查流程圖最終結(jié)最終結(jié)果判斷果判斷增增菌菌培培養(yǎng)養(yǎng)供試供試液的液的制備制備書(shū)寫(xiě)檢驗(yàn)書(shū)寫(xiě)檢驗(yàn)記錄單記錄單分分離離純純化化無(wú)菌落或無(wú)