聚合酶鏈反應(yīng)及基因突變檢測方法

1、聚合酶鏈反應(yīng)聚合酶鏈反應(yīng)及基因突變檢測方法及基因突變檢測方法上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院劉湘帆 講師PCR原理原理5533d.NTPs耐熱DNA聚合酶引物5353535353535353添加反應(yīng)混合液添加反應(yīng)混合液及樣本及樣本變性變性535353535353退火退火加入試管中加入試管中延伸延伸53535353繼續(xù)延伸繼續(xù)延伸535355TaqTaq353TaqTaq55循環(huán)循環(huán)PCR原理原理5353535355335353第二個循環(huán)第二個循環(huán)4個拷貝個拷貝第三個循環(huán)第三個循環(huán)8個拷貝個拷貝53535353535353535353533553535353第第n個循環(huán)個循環(huán)2n個拷貝個拷貝PCR原理原理94

2、 C(30 s)40-60 C(30 s)72 C(30-60 s/kb)MeltAnnealExtendThe Polymerase Chain Reaction (PCR)1820-30X94 C(30 s)40-60 C(30 s)72 C(30-60 s/kb)MeltAnnealExtendCycle #2NIH20-30X引物濃度：引物濃度：0.1 0.2umol/L,濃度過高容易生成引物二聚體濃度過高容易生成引物二聚體n指數(shù)增長期n線形增長期n平臺期循環(huán)數(shù) # 理論值 實(shí)際值Log 產(chǎn)物DNAPCR過程的實(shí)時監(jiān)測絕對定量絕對定量 PCR1.外參照系統(tǒng)的設(shè)置2.內(nèi)參照系統(tǒng)的設(shè)置 實(shí)

3、時定量 PCR 對核酸擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行直接和動態(tài)的監(jiān)測， 實(shí)現(xiàn)對靶基因的實(shí)時定量分析TaqManTM5533d.NTPsThermal Stable DNA PolymerasePrimers5353535353535353Add Master Mix and SampleDenaturation535353535353AnnealingReaction TubeTaql53RQProbe53RQ5353TaqManTMExtension Step531. Strand DisplacementTaq3QR5533QTaqR52. Cleavage3. PolymerizationComplete53QTaqR354. Detection533QTaqR5l lR53RQ實(shí)時定量RT-PCR檢測CEA基因拷貝數(shù)在監(jiān)測胃腸癌微轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用正常成人體內(nèi)CEA基因表達(dá)胃腸癌腫瘤組織中CEA基因的表達(dá)胃腸癌患者外周血中CEA基因的表達(dá)DMD基因外顯子缺失的檢測基因外顯子缺失的檢測B