細(xì)胞膜流動(dòng)性的熒光檢測(cè)方法

1、產(chǎn)品說明書細(xì)胞膜流動(dòng)性TMA-DPH熒光偏振檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品組成：產(chǎn)品編號(hào) 規(guī)格 TMA-DPH染色液稀釋液BB-48111-1 20 -200T 100ul 25mlBB-48111-2 50 -500T 250ul 100ml儲(chǔ)存條件：2-8避光保存。長(zhǎng)期保存-20避光保存。 有效期：一年。注意事項(xiàng)： 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除

2、殘留清潔劑。 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。 染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。 熒光染料均存在淬滅問題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。產(chǎn)品簡(jiǎn)介：膜的流動(dòng)性是生物膜結(jié)構(gòu)的基本特征之一，主要指膜脂肪酸鏈部分及膜蛋白的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)。膜脂類分子在相變溫度以上條件下主要有側(cè)向擴(kuò)散、旋轉(zhuǎn)、左右搖擺、伸縮振蕩、翻轉(zhuǎn)及異化運(yùn)動(dòng)等方式。膜蛋白的運(yùn)動(dòng)方式大體分為側(cè)向及旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)，主要受脂質(zhì)雙分子層的影響。脂肪酸不飽和鍵含量和鏈的長(zhǎng)度明顯影響著膜脂流動(dòng)性，不飽和鍵的存在會(huì)降低膜脂分子間排列的有序性

3、，從而增加膜的流動(dòng)性，短鏈能減低脂肪酸鏈尾部相互作用，在相變溫度下，不易于凝集，此外，脂肪酸烴鏈圍繞C- C鍵由全反式構(gòu)型到歪扭(CAUCHE)的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)運(yùn)動(dòng)，也可使流動(dòng)性加大。生物膜適宜的流動(dòng)性是體現(xiàn)生物膜正常功能的必要條件，在一定范圍內(nèi)，膜流動(dòng)性增加，有利于膜中酶分子的擴(kuò)散和旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)，使酶活性增加。一些載體蛋白分子的運(yùn)動(dòng)性也取決于膜中脂類分子的流動(dòng)性。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤對(duì)化療藥物產(chǎn)生的耐藥性主要與細(xì)胞膜P糖蛋白過度表達(dá)谷胱甘肽及其相關(guān)酶系活性改變有關(guān)，也有許多研究表明耐藥細(xì)胞膜流動(dòng)性較親代敏咨詢郵箱：bestbio 電話產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、

4、化妝品檢測(cè)等用途！產(chǎn)品說明書 感細(xì)胞明顯增加。另有實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)腹水癌細(xì)胞的惡性程度隨著膜流動(dòng)性的增加而增加，白血病及轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞的膜流動(dòng)性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于非轉(zhuǎn)移細(xì)胞。因此，對(duì)敏感及耐藥的腫瘤細(xì)胞膜流動(dòng)性的監(jiān)測(cè)有著重要的意義。膜流動(dòng)性的測(cè)定方法主要有熒光探針標(biāo)記，電子自旋共振以及差示掃描量熱法，x線衍射，棱碰共振等。貝博TMA-DPH試劑盒是利用TMA-DPH測(cè)定膜流動(dòng)性的熒光探針法，它在脂蛋白及其類似系統(tǒng)的單分子層動(dòng)力學(xué)研究中特別有用。DPH 及其衍生物（例如TMA-DPH）都呈圓柱形，會(huì)發(fā)生基于按長(zhǎng)分子軸線平行排列而產(chǎn)生發(fā)射熒光向偶極躍遷。例如，它們對(duì)由于周圍脂類相互作用而導(dǎo)致的再定位非常敏感。它

5、們廣泛地被用于旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)研究中的熒光偏振分析。傳統(tǒng)的DPH探針可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，貝博試劑盒膜示蹤熒光探針TMA-DPH不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此TMA-DPH探針較DPH探針能更準(zhǔn)確的反應(yīng)膜脂流動(dòng)性，本探針的最大激發(fā)波長(zhǎng)為355nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為430nm。試劑盒以外自備試劑和儀器 Hanks balanced salt solution（HBSS）或HEPES或PBS 移液器及吸頭 熒光分光光度計(jì)加偏振裝置使用方法：使用注意事項(xiàng)： 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。 染色后立即進(jìn)行分析。 標(biāo)記的

6、條件因細(xì)胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先確定最佳條件。以下方法僅供參考。1、 染色工作液的配制：用稀釋液稀釋TMA-DPH探針1000倍-10000倍，配制成TMA-DPH染色工作液?！咀ⅰ浚和扑]該探針加載濃度在1000-5000倍稀釋，具體的使用濃度需根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行優(yōu)化。使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)在推薦濃度范圍內(nèi)測(cè)試選定最佳濃度。2、 用染色工作液重懸細(xì)胞，在37孵育15-30 分鐘。3、 用pH7.4 HBSS 或20mM HEPES或PBS洗滌細(xì)胞1次。用pH7.4 HBSS 或20mM HEPES或PBS重懸細(xì)胞4、 用該細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng) 355nm，發(fā)

7、射波長(zhǎng)430nm。按下列公式計(jì)算熒光偏振度P：P=（IVV-GIVHIHV）/(IVV+GIVH)其中校正因子G=IHV/IHH式中IVV:起偏和檢偏器光軸同為垂直方向時(shí)測(cè)得的熒光強(qiáng)度;IVH:起偏和檢偏器光軸分別為垂直和水平方向時(shí)測(cè)得的熒光強(qiáng)度。IHV:起偏和檢偏器光軸分別為水平和垂直方向時(shí)測(cè)得的熒光強(qiáng)度;本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！產(chǎn)品說明書IHH:起偏和檢偏器光軸同為水平方向時(shí)測(cè)得的熒光強(qiáng)度。 P值越大 ,流動(dòng)性越??；P值越小，流動(dòng)性越大。相關(guān)產(chǎn)品：產(chǎn)品Annexin V-FITC/PI凋亡試劑盒 Annexin V-EGFP/PI凋亡試劑盒 MT

8、T細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)試劑盒 CCK-8細(xì)胞增殖毒性檢測(cè)試劑盒 WST-1細(xì)胞增殖毒性檢測(cè)試劑盒 MTS細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒 Hoechst33342/PI雙染試劑盒 DAPI染色試劑盒 細(xì)胞存活率檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品號(hào) BB-4101 BB-4102 BB-4201 BB-4202 BB-4203 BB-4204 BB-4131 BB-4133 BB-4122產(chǎn)品細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒 JC-1線粒體膜電位試劑盒 Caspase 3 活性檢測(cè)試劑盒 Caspase 8 活性檢測(cè)試劑盒 Caspase 9 活性檢測(cè)試劑盒 Caspase 10 活性檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測(cè)試劑盒 Rhodamine 123染色試劑盒 AO/EB雙染試劑盒產(chǎn)品號(hào) BB-410