訶子提取物含藥血清對乳鼠心肌細(xì)胞損傷的保護作用

1、訶子提取物含藥血清對乳鼠心肌細(xì)胞損傷的保護作用         11-01-14 15:06:00     編輯：studa20                    作者：張東 鄔國棟 張述禹 王玉華 楊玉梅【摘要】  目的：研究訶子提取物含藥血清對H2O2所致心肌細(xì)胞損傷的保

2、護作用。方法：采用H2O2處理培養(yǎng)心肌細(xì)胞，造成氧化應(yīng)激模型，通過檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH、CK漏出量、MDA含量和SOD活性反映訶子提取物含藥血清對H2O2氧化模型的影響。結(jié)果：與模型組比較，訶子提取物含藥血清能顯著減少LDH、CK漏出量（P0.05,P0.01）；降低培養(yǎng)液中MDA含量（P0.05,P0.01），升高SOD活性（P0.01）。結(jié)論:訶子提取物含藥血清可減輕H2O2對心肌細(xì)胞的損傷程度，對心肌細(xì)胞具有保護作用，其機制可能與穩(wěn)定細(xì)胞膜和抗氧化有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  訶子;過氧化氫;心肌細(xì)胞培養(yǎng)；血清藥理學(xué)    Abstract 

3、Objective: To investigate the protective effects of the Terminalia chebula extract serum on myocardial cells injury in cultured rats induced by H2O2. Methods: Oxidative damage model were induced by H2O2, the leakage level of lactidehydrogenase (LDH), creatine kinase (CK), the content level of methyl

4、enedioxyamphetamine (MDA),the activity of superoxide dismutase (SOD) were measured in medium to observe the effects of the Terminalia chebula extract serum on myocardial cells injury in cultured  rats induced by Hydrogen peroxide(H2O2). Results: Compared with the model control, the content of L

5、DH, CK, MDA decreased significantly（P0.05,P0.01） and the activity of SOD increased significantly（P0.01）. Conclusion: the Terminalia chebula extract serum can mitigate injury of Hydrogen peroxide(H2O2) on myocardium ,it has protecting effect on damaged myocardium. It is suggested that the protecting&

6、#160; mechanism may be related to stabilizing  membrane and its antioxidant properties.    Key words  Terminalia chebula; Hydrogen peroxide; Cardiac myocyte culture; Serum pharmacology1  材料與方法1.1  實驗動物Wistar大鼠乳鼠（14 d）,Wistar大鼠（體重200±20 g）,均購自內(nèi)蒙古大學(xué)實驗動物中心，合格證號：S

7、CXK（蒙）2002-0001。1.2  主要藥品與試劑 訶子購自呼和浩特市凱蒙大藥房，經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院植化教研室龐秀生教授鑒定為使君子科植物訶子（Terminalia chebula Retz.）或絨毛訶子（Terminalia chebula Retz.Var. tomentella Kurt.）的干燥成熟果實。RPMI-1640、胎牛血清購自Gibco公司，過氧化氫（22）購自Sigma公司，乳酸脫氫酶試劑盒、肌酸激酶試劑盒購自北京北化康泰臨床試劑有限公司，丙二醛試劑盒、超氧化物歧化酶試劑盒購自南京建成生物工程研究所。1.3  主要儀器 MCO

8、-15AC型CO2培養(yǎng)箱(日本三洋)，CJ-2F型醫(yī)用凈化工作臺(蘇州市金燕凈化設(shè)備有限公司)，SCOUT-型半自動生化分析儀（意大利MENARINI公司）。1.4  方法訶子果實粉碎后用70 %丙酮提取3次，濾液合并后減壓回收丙酮，用乙醚和乙酸乙酯分別萃取，揮干2。無菌迅速取出出生14 d的Wistar乳鼠的心臟，用PBS液充分洗凈血液并去除多余組織，將心臟剪成約1 mm3的小塊，加入5 mL 37 孵育的0.08 %胰蛋白酶，在恒溫磁力攪拌器上、37 水浴消化8 min；首次消化所得的消化液棄之不用，再加入8 mL胰蛋白酶，依上述條件消化；將消化液轉(zhuǎn)移入50 mL離心管中，并加入

9、等量培養(yǎng)基以終止消化，余下的組織塊中再加入8 mL新的胰酶繼續(xù)消化，重復(fù)多次，直至心肌組織全部消化；消化液以1 000 r/min離心10 min，棄上清液，再加入3 mL培養(yǎng)基混懸細(xì)胞沉淀，離心后棄上清液，再加培養(yǎng)基混懸；將此細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移入培養(yǎng)瓶中，于37 、5 % CO2孵箱中靜置120 min，差速貼壁以減少成纖維細(xì)胞的污染；收集培養(yǎng)瓶中的上清液，計數(shù)后稀釋，接種入96孔培養(yǎng)板，繼續(xù)培養(yǎng)3。將體重200±20 g Wistar大鼠按體重分層隨機分成5組，每組5只。第1組為對照組，灌胃蒸餾水1 mL/100 g體重;第25組為訶子提取物、組，灌胃劑量分別為90.0 mg/100 g體重、60.0 mg/100 g體重、30.0 mg/100 g體重、6.0 mg/100 g體重；以上各組每日灌胃2次，連續(xù)3天。末次給藥前12 h禁食、不禁水。末次給藥后1 h無菌腹主動脈取血，靜置過夜后，于次日3 000 r/min離心15 min，分離含藥血清，-20 冰箱保存?zhèn)溆?。細(xì)胞培養(yǎng)實驗中，每隔48 h換液一次，待有大部分心肌細(xì)胞搏動時開始實驗。按隨機原則分為6組：對照組：在培養(yǎng)基中加入對照血清，使對照血清的體積百分比含量為15 %，用溶有對照血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞30 h；模型組：方法同對照組，用含15 %對照血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h,然后加入H2O2，使其終濃度為