有關(guān)物質(zhì)、含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證指標(biāo)的可接受標(biāo)準(zhǔn)

1、審評(píng)四部黃曉龍摘要：本文介紹了在對(duì)含量測(cè)定所用的分析方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)，各項(xiàng)指標(biāo)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，以利于判斷該分析方法的可行性。關(guān)鍵詞：含量測(cè)定分析方法驗(yàn)證可接收標(biāo)準(zhǔn)在進(jìn)行質(zhì)量研究的過(guò)程中，一項(xiàng)重要的工作就是要對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中所涉及到的分析方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，以保證所用的分析方法確實(shí)能夠用于在研藥品的質(zhì)量控制。為規(guī)范對(duì)各種分析方法的驗(yàn)證要求，我國(guó)已于2005年頒布了分析方法驗(yàn)證的指導(dǎo)原則。該指導(dǎo)原則對(duì)需要驗(yàn)證的分析方法及驗(yàn)證的具體指標(biāo)做了比較詳細(xì)的闡述。但是文中未涉及各具體指標(biāo)在驗(yàn)證時(shí)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)際上已頒布的指導(dǎo)原則中也未發(fā)現(xiàn)相關(guān)的要求。另一方面，大多數(shù)藥品研發(fā)單位在進(jìn)行質(zhì)量研究時(shí)，已逐步認(rèn)識(shí)到

2、分析方法驗(yàn)證的必要性與重要性，大都也在按照指導(dǎo)原則的要求進(jìn)行分析方法驗(yàn)證，但驗(yàn)證完后卻因沒(méi)有一個(gè)明確的可接受標(biāo)準(zhǔn)，而難以判斷該分析方法是否符合要求。本文結(jié)合國(guó)外一些大型藥品研發(fā)企業(yè)在此方面的要求，提出了在對(duì)含量測(cè)定方法進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，供國(guó)內(nèi)的藥品研發(fā)單位在進(jìn)行研究時(shí)參考。1 .準(zhǔn)確度該指標(biāo)主要是通過(guò)回收率來(lái)反映。驗(yàn)證時(shí)一般要求分別配制濃度為80%、100%和120%的供試品溶液各三份，分別測(cè)定其含量，將實(shí)測(cè)值與理論值比較，計(jì)算回收率?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在98.0%-102.0%之間，9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD應(yīng)不大于2.0%。2 .線性線性一般通過(guò)線性回歸

3、方程的形式來(lái)表示。具體的驗(yàn)證方法為：在80%至120%的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，分別測(cè)定其主峰的面積，計(jì)算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標(biāo)（X）,峰面積為縱坐標(biāo)（Y）,進(jìn)行線性回歸分析?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.998,Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。3 .精密度1 ）重復(fù)性配制6份相同濃度的供試品溶液，由一個(gè)分析人員在盡可能相同的條件下進(jìn)行測(cè)試，所得6份供試液含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。2 ）中間精密度配制6份相同濃度的供試品溶液，分別由兩個(gè)分析人員使用不同的儀器與試劑進(jìn)行測(cè)試，所得12個(gè)含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不

4、大于2.0%。4 .專屬性可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：空白對(duì)照應(yīng)無(wú)干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0。以二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行純度分析時(shí)，主峰的純度因子應(yīng)大于980。5 .檢測(cè)限主峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于3。6 .定量限主峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測(cè)6份溶液主峰的保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。7 .耐用性分別考察流動(dòng)相比例變化土5%、流動(dòng)相pH值變化±0.2、柱溫變化±5C、流速相對(duì)值變化±20%時(shí)，儀器色譜行為的變化，每個(gè)條件下各測(cè)試兩次。可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：主峰的拖尾因子不得大于2.0,主

5、峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離；各條件下的含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。8 、系統(tǒng)適應(yīng)性配制6份相同濃度的供試品溶液進(jìn)行分析，主峰峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%,主峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0,主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離，主峰的理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。有關(guān)物質(zhì)檢查方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)，各項(xiàng)指標(biāo)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，以利于判斷該分析方法的可行性。藥品中的有關(guān)物質(zhì)泛指在藥品的生產(chǎn)與儲(chǔ)存過(guò)程中產(chǎn)生的工藝雜質(zhì)或降解產(chǎn)物。由于這些有關(guān)物質(zhì)的存在會(huì)影響到藥品的純度，進(jìn)而可能會(huì)產(chǎn)生毒副作用，所以有關(guān)物質(zhì)的控制是藥品研發(fā)的一個(gè)重要方面，也是我們?cè)谒幤穼?/p>

6、評(píng)中一直重點(diǎn)關(guān)注的要點(diǎn)之一。而要對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行嚴(yán)格的控制，就離不開專屬性強(qiáng)、靈敏度高的分析方法，這就涉及到分析方法的篩選與驗(yàn)證。從現(xiàn)有的申報(bào)資料看，藥品研發(fā)單位已基本上意識(shí)到分析方法驗(yàn)證的重要性，但是對(duì)驗(yàn)證時(shí)各具體指標(biāo)是否可行尚沒(méi)有一個(gè)明確的可接受標(biāo)準(zhǔn)，從而難以對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行評(píng)判。為解決這一問(wèn)題，本文結(jié)合國(guó)外一些大型藥品研發(fā)企業(yè)在此方面的要求，提出了在對(duì)有關(guān)物質(zhì)檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，供國(guó)內(nèi)的藥品研發(fā)單位在進(jìn)行研究時(shí)參考。1 .準(zhǔn)確度該指標(biāo)主要是通過(guò)回收率來(lái)反映。驗(yàn)證時(shí)一般要求根據(jù)有關(guān)物質(zhì)的定量限與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中該雜質(zhì)的限度分別配制三個(gè)濃度的供試品溶液各三份（例如某雜質(zhì)的限度為0.2%,則

7、可分別配制該雜質(zhì)濃度為0.1%、0.2%和0.3%的雜質(zhì)溶液），分別測(cè)定其含量，將實(shí)測(cè)值與理論值比較，計(jì)算回收率，并計(jì)算9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD。該項(xiàng)目的可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在80%-120炕間，如雜質(zhì)的濃度為定量限，則該濃度下的平均回收率可放寬至70%-130%相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%2 .線性線性一般通過(guò)線性回歸方程的形式來(lái)表示。具體的驗(yàn)證方法為：在定量限至一定的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，分別測(cè)定該雜質(zhì)峰的面積，計(jì)算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標(biāo)（X）,峰面積為縱坐標(biāo)（Y）,進(jìn)行線性回歸分析。可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.990,Y軸

8、截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%3.精密度1）重復(fù)性配制6份雜質(zhì)濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，由一個(gè)分析人員在盡可能相同的條件下進(jìn)行測(cè)試，所得6份供試液含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于15%2）中間精密度配制6份雜質(zhì)濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，分別由兩個(gè)分析人員使用不同的儀器與試劑進(jìn)行測(cè)試，所得12個(gè)含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于20%4 .專屬性可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：空白對(duì)照應(yīng)無(wú)干擾，該雜質(zhì)峰與其它峰應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0。5 .檢測(cè)限雜質(zhì)峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于3。6 .定量限雜質(zhì)峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于10。另外，配

9、制6份最低定量限濃度的溶液，所測(cè)6份溶液雜質(zhì)峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%,峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于5.0%。7 .耐用性分別考察流動(dòng)相比例變化土5%、流動(dòng)相pH值變化±0.2、柱溫變化土5C、檢測(cè)波長(zhǎng)變化土5nm流速相對(duì)值變化土20%以及采用三根不同批號(hào)的色譜柱進(jìn)行測(cè)定時(shí)，儀器色譜行為的變化，每個(gè)條件下各測(cè)試兩次?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：各雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于2.0,雜質(zhì)峰與其他成分峰必須達(dá)到基線分離；各條件下的雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含量的絕對(duì)值在土0.1%以內(nèi)。8 、系統(tǒng)適應(yīng)性配制6份相同濃度的雜質(zhì)溶液進(jìn)行分析，該雜質(zhì)峰峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%,保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。另外，雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于2.0,理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。9.溶液穩(wěn)定性按照分析方法分別配置對(duì)