第二章蛋白質(zhì)化學

1、第二章第二章 蛋白質(zhì)化學蛋白質(zhì)化學 (10學時學時) 蛋白質(zhì)的生物學意義 蛋白質(zhì)的元素組成蛋白質(zhì)的氨基酸組成 (重點重點)肽蛋白質(zhì)的結構 (重點重點)蛋白質(zhì)分子結構與功能的關系蛋白質(zhì)的性質(zhì) (重點重點)蛋白質(zhì)的分類 （1 1）熟悉蛋白質(zhì)的基本結構單位：氨基酸；）熟悉蛋白質(zhì)的基本結構單位：氨基酸；肽；蛋白質(zhì)的一級結構、二級結構、超二級結肽；蛋白質(zhì)的一級結構、二級結構、超二級結構和結構域、三級結構四級結構；蛋白質(zhì)的兩構和結構域、三級結構四級結構；蛋白質(zhì)的兩性性質(zhì)、等電點與電泳、紫外吸收性質(zhì)、膠體性性質(zhì)、等電點與電泳、紫外吸收性質(zhì)、膠體性質(zhì)、蛋白質(zhì)的沉淀；變性與復性；蛋白質(zhì)的性質(zhì)、蛋白質(zhì)的沉淀；變性

2、與復性；蛋白質(zhì)的呈色反應。呈色反應。 （2 2）了解蛋白質(zhì)的分類；蛋白質(zhì)分子結構與）了解蛋白質(zhì)的分類；蛋白質(zhì)分子結構與功能的關系。功能的關系。 目的與要求是由許多不同的-氨基酸按一定的序列通過酰胺鍵（肽鍵）縮合而成的，具有較穩(wěn)定的構象并具有一定生物功能的大分子。一、蛋白質(zhì)的生物學意義1. 生物體的組成成分2. 酶3. 運輸4. 運動5. 抗體6. 干擾素7. 遺傳信息的控制8. 細胞膜的通透性9. 高等動物的記憶、識別機構二、蛋白質(zhì)的元素組成二、蛋白質(zhì)的元素組成C（5055%）、H（68%）、O（2023%）、N（1518%）、 S（04%）、N的含量平均為16%凱氏（Kjadehl）定氮法的

3、理論基礎三、蛋白質(zhì)的氨基酸組成三、蛋白質(zhì)的氨基酸組成氨基酸氨基酸 是蛋白質(zhì)的基本組成單位。從細菌到人類，所有蛋白質(zhì)都由20種標準氨基酸（20 standard amino acids)組成。（一）氨基酸的結構通式：19種氨基酸具有一級氨基（-NH3+）和羧基（-COOH）結合到碳原子（C），同時結合到（C）上的是H原子和各種側鏈（R）；Pro具有二級氨基（-亞氨基酸）不帶電形式 H2NCHCOOHR +H3NCHCOO-R兩性離子形式C如是不對稱C（除Gly），則： 具有兩種立體異構體 D-型和L-型2. 具有旋光性 左旋（-）或右旋（+）（二）氨基酸的分類根據(jù)根據(jù)R的化學結構的化學結構（1）

4、脂肪族氨基酸：1）疏水性：Gly甘、Ala丙、Val纈、Leu亮、Ile異、Met甲、Cys半；2）極性：Arg精、Lys賴、Asp天、Glu谷、Asn天、Gln谷、Ser絲、Thr蘇（2）芳香族氨基酸：Phe苯、Tyr酪（3）雜環(huán)氨基酸：Trp色、His組（4）雜環(huán)亞氨基酸：Pro脯根據(jù)根據(jù)R的極性的極性（1）極性氨基酸：1）不帶電：Ser、Thr、Asn、Gln、Tyr、Cys；2）帶正電：His、Lys、Arg；3）帶負電：Asp、Glu（2）非極性氨基酸：Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Met、Pro、Trp（三）氨基酸的重要理化性質(zhì)一般物理性質(zhì) 無色晶體，熔點極高（2

5、00以上），不同味道；水中溶解度差別較大（極性和非極性），不溶于有機溶劑。兩性解離和等電點 氨基酸在水溶液中或在晶體狀態(tài)時都以離子形式存在，在同一個氨基酸分子上帶有能放出質(zhì)子的NH3+正離子和能接受質(zhì)子的COO-負離子，為兩性電解質(zhì)。3. 化學性質(zhì)（1）與茚三酮的反應：Pro產(chǎn)生黃色物質(zhì)，其它為藍紫色。在570nm（藍紫色）或440nm（黃色）定量測定（幾g）。調(diào)節(jié)氨基酸溶液的pH，使氨基酸分子上的+NH3基和COO-基的解離程度完全相等時，即所帶凈電荷為零，此時氨基酸所處溶液的pH值稱為該氨基酸的等電點（pI）。 H3NCHCOOHR+在酸性溶液中的氨基酸（pHpI）H3NCHCOO-R+在

6、晶體狀態(tài)或水溶液中的氨基酸（pH=pI）H2NCHCOO-R在堿性溶液中的氨基酸（pHpI）（2）與甲醛的反應：氨基酸的甲醛滴定法RCHCOO-NH3+RCHCOO-NH2+ H+OH-中和滴定HCHORCHCOO-NHCH2OHHCHORCHCOO-N(CH2OH)2羥甲基AA二羥甲基AA（3）與2,4-二硝基氟苯(DNFB)的反應NO2FO2N+ HNCHCOOHRNO2O2NHNCHCOOHR+ HF弱堿性DNP-氨基酸穩(wěn)定，黃色H2NCHCOOH + RNCH3CH3O=S=OCl5-二甲氨基萘磺酰氯（DNS-Cl）pH9.7 40NCH3CH3O=S=OHNCHCOOH RDNS-氨

7、基酸取代DNFB測定蛋白質(zhì)N端氨基酸，靈敏度高， 定量測定熒光（4）與異硫氰酸苯酯（PITC）的反應N=C=S + NCHCOOHHHRPITCNCNCHCOOHHHRSPTC-氨基酸NCHRSNCCOPTH-氨基酸pH8.3無水HF重復測定多肽鏈N端氨基酸排列順序，設計出“多肽順序自動分析儀”酸中很穩(wěn)定（5）與熒光胺反應：）與熒光胺反應：根據(jù)熒光強度測定氨基酸含量（ng級）。激發(fā)波長x=390nm，發(fā)射波長m=475nm。產(chǎn)生具熒光物質(zhì)。（6）與）與5,5-雙硫基雙硫基-雙（雙（2-硝基苯甲酸）反應硝基苯甲酸）反應：H2NCHCH2SSHNO2HOOCSNO2COOHCOOH+SSNO2NO

8、2HOOCCOOHH2NCHCOOH +CH2SHpH8.0硫代硝基苯甲酸硫代硝基苯甲酸測定測定Cys含量（含量（pH8.0412nm的摩爾消光系數(shù)的摩爾消光系數(shù)=13600）（7）成鹽反應）成鹽反應RCHCOOH + HClNH2RCHCOOH NH2HCl（8）酰基化和烴基化反應）?；蜔N基化反應RCHCOOH + R X NH2R =?；驘N基 RCHCOOH + HX NHRX =鹵素（Cl、F）（9）成酯反應）成酯反應RCHCOOH + C2H5OHNH2RCHCOOC2H5NH2 HCl氣當羧基變成乙酯后，羧基的化學性質(zhì)就被掩蔽了，而當羧基變成乙酯后，羧基的化學性質(zhì)就被掩蔽了，而

9、氨基的化學性質(zhì)就突出地顯示出來氨基的化學性質(zhì)就突出地顯示出來。（10）酰氯化反應）酰氯化反應YNHCRHCOOH + PCl5?；被狨；被醂NHCRHCOCl?；被Ｂ弱；被Ｂ仁拱被岬聂然罨子诹硪话被岬陌被Y合，使氨基酸的羧基活化，易于另一氨基酸的氨基結合，在合成肽的工作上常用在合成肽的工作上常用。（11）成酰胺反應）成酰胺反應H2NCHRCOOC2H5 + HNH2體外無水H2NCHRCONH2 +C2H5OH氨基酸酰胺有機體內(nèi)：Asp（Glu）+NH4+Asn（Gln）Asn（Gln）合成酶ATP（12）脫羧反應）脫羧反應H2NCHRCOOH脫羧酶CO2 + RCH

10、2NH2胺（13）迭氮反應）迭氮反應H2N-CHR-COOHYHN-CHR-COOH?；被醂HN-CHR-COOCH3酰化氨基酸甲酯NH2NH2（無水肼）（-CH3OH）YHNCHRCONHNH2?；被岬碾卵苌颒NO2YHNCHRCON3 + 2H2O酰化氨基酸迭氮四、肽四、肽一個氨基酸的-羧基和另一個氨基酸的-氨基脫水縮合而成的化合物。 氨基酸之間脫水后形成的鍵稱肽鍵（酰胺鍵）。 當兩個氨基酸通過肽鍵相互連接形成二肽，在一端仍然有游離的氨基和另一端有游離的羧基，每一端連接更多的氨基酸。氨基酸能以肽鍵相互連接形成長的、不帶支鏈的寡肽（25個氨基酸殘基以下）和多肽（多于25個氨基酸殘基

11、）。多肽仍然有游離的-氨基和-羧基。肽鏈寫法肽鏈寫法：游離-氨基在左，游離-羧基在右，氨基酸之間用“-”表示肽鍵。H2N-絲氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-COOHSer-Leu-Phe（S-L-F）（一）谷光甘肽（一）谷光甘肽（GSH）H2N-CHCH2CH2COCOOH-GluNHCHCOCH2SHCysNHCH2COOHGly2GSHGSSG（二）催產(chǎn)素和升壓素（二）催產(chǎn)素和升壓素 均為9肽，第3位和第9位氨基酸不同。催產(chǎn)素使子宮和乳腺平滑肌收縮，具有催產(chǎn)和促使乳腺排乳作用。升壓素促進血管平滑肌收縮，升高血壓，減少排尿。（三）促腎上腺皮質(zhì)激素（三）促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH） 39肽，活性部位為

12、第410位的7肽片段： Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly。（四）腦肽（四）腦肽腦啡肽具有強烈的鎮(zhèn)痛作用（強于嗎啡），不上癮。Met-腦啡肽 Tyr-Gly-Gly-Phe-MetLeu-腦啡肽 Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-內(nèi)啡肽（31肽）具有較強的嗎啡樣活性與鎮(zhèn)痛作用。（五）膽囊收縮素（五）膽囊收縮素（六）胰高血糖素（六）胰高血糖素由胰島-細胞分泌（-細胞分泌胰島素），29肽。胰高血糖素調(diào)節(jié) 維持血糖濃度。五、五、 蛋白質(zhì)的結構蛋白質(zhì)的結構 蛋白質(zhì)是氨基酸以肽鍵相互連接的線性序列。在蛋白質(zhì)中，多肽鏈折疊形成特殊的形狀（構象）（conformation）。在結構

13、中，這種構象是原子的三維排列，由氨基酸序列決定。蛋白質(zhì)有四種結構層次：一級結構（primary），二級結構（secondary），三級結構（tertiary）和四級結構（quaternary）（不總是有）。（一）蛋白質(zhì)的一級結構（化學結構）（一）蛋白質(zhì)的一級結構（化學結構）一級結構就是蛋白質(zhì)分子中氨基酸殘基的排列順序，即氨基酸的線性序列。在基因編碼的蛋白質(zhì)中，這種序列是由mRNA中的核苷酸序列決定的。一級結構中包含的共價鍵（covalent bonds）主要指肽鍵（peptide bond）和二硫鍵（disulfide bond）HPhe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly

14、-Ser-His- Leu-Val- Glu- Ala- Leu- Tyr Leu -Val-Cys-GlyGlu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys-AlaOHB鏈157101519 20212530HGly-Ile-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-Ala-Ser-Val-Cys-Ser-Leu-Tyr-Gln-Leu-Glu-Asn-Tyr-Cys-AsnOH15102015A鏈711621SSSS牛胰島素的化學結構SS一級結構確定的原則：將大化小，逐段分析，制成兩套肽片段，找出重疊位點，排出肽的前后位置，最后確定蛋白質(zhì)的完整序列。目前往往采用從待測蛋白

15、質(zhì)的基因序列反推出蛋白質(zhì)的一級結構。（二）蛋白質(zhì)的空間結構（構象、高級結構）（二）蛋白質(zhì)的空間結構（構象、高級結構）蛋白質(zhì)分子中所有原子在三維空間的排列分布和肽鏈的走向。由于羰基碳-氧雙鍵的靠攏，允許存在共振結構（resonance structure），碳與氮之間的肽鍵有部分雙鍵性質(zhì)，由CO-NH構成的肽單元呈現(xiàn)相對的剛性和平面化，肽鍵中的4個原子和它相鄰的兩個-碳原子多處于同一個平面上。CCNCOHC NO-H+CC氨基的H與羰基的O幾乎總是呈反式（trans）而不是順式（cis）。蛋白質(zhì)構象穩(wěn)定的原因：蛋白質(zhì)構象穩(wěn)定的原因：1）酰胺平面；2）R的影響。1. 蛋白質(zhì)的二級結構蛋白質(zhì)的二級結

16、構指蛋白質(zhì)多肽鏈本身的折疊和盤繞方式（1）-螺旋（螺旋（-helix）Pauling和Corey于1965年提出。結構要點：結構要點：1）螺旋的每圈有）螺旋的每圈有3.6個氨基酸，螺旋間距離為個氨基酸，螺旋間距離為0.54nm，每，每個殘基沿軸旋轉個殘基沿軸旋轉100。2）每個肽鍵的羰基氧與遠在第四個氨基酸氨基上的氫）每個肽鍵的羰基氧與遠在第四個氨基酸氨基上的氫形成氫鍵（形成氫鍵（hydrogen bond），氫鍵的走向平行于螺旋），氫鍵的走向平行于螺旋軸，所有肽鍵都能參與鏈內(nèi)氫鍵的形成軸，所有肽鍵都能參與鏈內(nèi)氫鍵的形成。C(NHCCO)3 NOHHR3.613 (ns)左手螺旋與右手螺旋3)

17、R側鏈基團伸向螺旋的外側側鏈基團伸向螺旋的外側。R基團越大，空間位阻，螺旋不易形成。RRRRRRRRR螺旋的橫截面4）Pro的的N上缺少上缺少H，不能形成氫鍵，經(jīng)常出現(xiàn)在，不能形成氫鍵，經(jīng)常出現(xiàn)在-螺螺旋的端頭，它改變多肽鏈的方向并終止螺旋。旋的端頭，它改變多肽鏈的方向并終止螺旋。連續(xù)存在帶相同電荷的氨基酸殘基（連續(xù)存在帶相同電荷的氨基酸殘基（R基帶電荷），同基帶電荷），同種電荷相互排斥，螺旋不易形成。種電荷相互排斥，螺旋不易形成。 于穩(wěn)定于穩(wěn)定-螺旋的力量是氫鍵，那么在疏螺旋的力量是氫鍵，那么在疏水環(huán)境中很少有極性基團干擾氫鍵的形水環(huán)境中很少有極性基團干擾氫鍵的形成，而在親水環(huán)境中則存在較多

18、的極性成，而在親水環(huán)境中則存在較多的極性基團或極性分子，它們干擾基團或極性分子，它們干擾-螺旋中氫螺旋中氫鍵使之變的不穩(wěn)定。所以多肽鏈片斷在鍵使之變的不穩(wěn)定。所以多肽鏈片斷在疏水環(huán)境中更利于疏水環(huán)境中更利于-螺旋的形成。螺旋的形成。 （2）-折疊結構（折疊結構（-pleated sheet）是一種肽鏈相當伸展的結構。肽鏈按層排列，依靠相鄰肽鏈是一種肽鏈相當伸展的結構。肽鏈按層排列，依靠相鄰肽鏈上的羰基和氨基形成的氫鍵維持結構的穩(wěn)定性。肽鍵的平面上的羰基和氨基形成的氫鍵維持結構的穩(wěn)定性。肽鍵的平面性使多肽折疊成片，氨基酸側鏈伸展在折疊片的上面和下面。性使多肽折疊成片，氨基酸側鏈伸展在折疊片的上面

19、和下面。CCCCCCRRRRRRNNCNNCCC平行反平行-折疊片中，相鄰多肽鏈折疊片中，相鄰多肽鏈平行平行或或反平行反平行（較穩(wěn)定）。（較穩(wěn)定）。（3）-轉角（轉角（-turn）為了緊緊折疊成緊密的球蛋白，多肽鏈常常反轉方向，成為了緊緊折疊成緊密的球蛋白，多肽鏈常常反轉方向，成發(fā)夾形狀。一個氨基酸的羰基氧以氫鍵結合到相距的第四發(fā)夾形狀。一個氨基酸的羰基氧以氫鍵結合到相距的第四個氨基酸的氨基氫上。個氨基酸的氨基氫上。N1CHCC2CHNHO=C3CHNC4CHNRRHOHRROHO-轉角經(jīng)常出轉角經(jīng)常出現(xiàn)在連接反平現(xiàn)在連接反平行行-折疊片的折疊片的端頭。端頭。（4）自由回轉）自由回轉沒有一定規(guī)

20、律的松散肽鏈結構。酶的活性部位沒有一定規(guī)律的松散肽鏈結構。酶的活性部位。2. 超二級結構和結構域超二級結構和結構域超二級結構超二級結構是指若干相鄰的二級結構中的構象單元彼此相是指若干相鄰的二級結構中的構象單元彼此相互作用，形成有規(guī)則的，在空間上能辨認的二級結構組合互作用，形成有規(guī)則的，在空間上能辨認的二級結構組合體。是蛋白質(zhì)二級結構至三級結構層次的一種過渡態(tài)構象體。是蛋白質(zhì)二級結構至三級結構層次的一種過渡態(tài)構象層次。層次。結構域結構域是球狀蛋白質(zhì)的折疊單位。多肽鏈在超二級結構的是球狀蛋白質(zhì)的折疊單位。多肽鏈在超二級結構的基礎上進一步繞曲折疊成緊密的近似球行的結構，具有部基礎上進一步繞曲折疊成緊

21、密的近似球行的結構，具有部分生物功能。對于較大的蛋白質(zhì)分子或亞基，多肽鏈往往分生物功能。對于較大的蛋白質(zhì)分子或亞基，多肽鏈往往由兩個以上結構域締合而成三級結構。由兩個以上結構域締合而成三級結構。3. 蛋白質(zhì)的三級結構蛋白質(zhì)的三級結構指多肽鏈上的所有原子（包括主鏈和側鏈）在三維指多肽鏈上的所有原子（包括主鏈和側鏈）在三維空間的分布空間的分布。肌紅蛋白4. 蛋白質(zhì)的四級結構蛋白質(zhì)的四級結構多肽亞基（多肽亞基（subunit）的空間排布和相互作用。亞基）的空間排布和相互作用。亞基間以非共價鍵連接。間以非共價鍵連接。血紅蛋白共價鍵次級鍵化學鍵化學鍵 肽鍵一級結構氫鍵二硫鍵二、三、四級結構疏水鍵鹽鍵范德

22、華力三、四級結構（三）蛋白質(zhì)分子中的共價鍵與次級鍵（三）蛋白質(zhì)分子中的共價鍵與次級鍵六、蛋白質(zhì)分子結構與功能的關系六、蛋白質(zhì)分子結構與功能的關系蛋白質(zhì)分子具有多樣的生物學功能，需要一定的化學蛋白質(zhì)分子具有多樣的生物學功能，需要一定的化學結構，還需要一定的空間構象。結構，還需要一定的空間構象。（一）蛋白質(zhì)一級結構與功能的關系（一）蛋白質(zhì)一級結構與功能的關系1. 種屬差異種屬差異蛋白質(zhì)一級結構的種屬差異十分明顯，但相同部分氨蛋白質(zhì)一級結構的種屬差異十分明顯，但相同部分氨基酸對蛋白質(zhì)的功能起決定作用。根據(jù)蛋白質(zhì)結構上基酸對蛋白質(zhì)的功能起決定作用。根據(jù)蛋白質(zhì)結構上的差異，可以斷定它們在親緣關系上的遠近

23、。的差異，可以斷定它們在親緣關系上的遠近。2.分子病分子病蛋白質(zhì)分子一級結構的氨基酸排列順序與正常有蛋白質(zhì)分子一級結構的氨基酸排列順序與正常有所不同的遺傳病。所不同的遺傳病。鐮狀細胞貧血（鐮狀細胞貧血（sick-cell anemia）從患者紅細胞中鑒定出特異的鐮刀型或月牙型細胞從患者紅細胞中鑒定出特異的鐮刀型或月牙型細胞。-鏈 1 2 3 4 5 6 7Hb-A Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-LysHb-S Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Lys Val 取代Glu含氧-HbAO2O2粘性疏水斑點含氧HbS脫氧HbS疏水位點血紅蛋白分子凝集（二）蛋白質(zhì)構象與

24、功能的關系（二）蛋白質(zhì)構象與功能的關系別（變）構作用別（變）構作用：含亞基的蛋白質(zhì)由于一個亞基的構象改變含亞基的蛋白質(zhì)由于一個亞基的構象改變而引起其余亞基和整個分子構象、性質(zhì)和功能發(fā)生改變的作而引起其余亞基和整個分子構象、性質(zhì)和功能發(fā)生改變的作用。因別構而產(chǎn)生的效應稱別構效應。用。因別構而產(chǎn)生的效應稱別構效應。血紅蛋白是別構蛋白，血紅蛋白是別構蛋白，O2結合到一個亞基上以后，影響結合到一個亞基上以后，影響與其它亞基的相互作用。與其它亞基的相互作用。24681012140.51.01.52.0OH-加入的當量pHpK1pIpK2（3）（2）（1）Gly的滴定曲線的滴定曲線OH-OH-+H3NCC

25、OOHHH（1）+H3NCCOO-HH（2） H2NCCOO-HH（3）Gly解離作用解離作用七、蛋白質(zhì)的性質(zhì)七、蛋白質(zhì)的性質(zhì)（一）蛋白質(zhì)的相對分子量（一）蛋白質(zhì)的相對分子量蛋白質(zhì)相對分子量在蛋白質(zhì)相對分子量在10 0001 000 000之間。測定分子量的之間。測定分子量的主要方法有滲透壓法、主要方法有滲透壓法、超離心法超離心法、凝膠過濾法、聚丙烯酰、凝膠過濾法、聚丙烯酰胺凝膠電泳等胺凝膠電泳等。最準確可靠的方法是最準確可靠的方法是超離心法超離心法（Svedberg于于1940年設計）：年設計）：蛋白質(zhì)顆粒在蛋白質(zhì)顆粒在2550*104 g離心力作用下從溶液中沉降下來離心力作用下從溶液中沉降

26、下來。沉降系數(shù)（s）：單位（cm）離心場里的沉降速度。 s = v2x v =沉降速度（dx/dt）=離心機轉子角速度（弧度/s） x =蛋白質(zhì)界面中點與轉子中心的距離（cm）沉降系數(shù)的單位常用S，1S=110-13（s）蛋白質(zhì)分子量（M）與沉降系數(shù)（s）的關系M = RTsD（1V）R氣體常數(shù)（8.314107ergsmol -1 度-1）T絕對溫度D擴散常數(shù)（蛋白質(zhì)分子量很大，離心機轉速很快，則忽略不計）V蛋白質(zhì)的微分比容（m3g-1）溶劑密度（20，gml-1） s沉降系數(shù)（二）蛋白質(zhì)的兩性電離及等電點（二）蛋白質(zhì)的兩性電離及等電點蛋白質(zhì)在其等電點偏酸溶液中帶正電荷，在偏堿蛋白質(zhì)在其等電

27、點偏酸溶液中帶正電荷，在偏堿溶液中帶負電荷，在等電點溶液中帶負電荷，在等電點pH時為兩性離子。時為兩性離子。電泳電泳：帶電顆粒在電場中移動的現(xiàn)象。分子大小帶電顆粒在電場中移動的現(xiàn)象。分子大小不同的蛋白質(zhì)所帶凈電荷密度不同，遷移率即異，不同的蛋白質(zhì)所帶凈電荷密度不同，遷移率即異，在電泳時可以分開。在電泳時可以分開。1. 自由界面電泳：自由界面電泳：蛋白質(zhì)溶于緩沖蛋白質(zhì)溶于緩沖液中進行電泳。液中進行電泳。2. 區(qū)帶電泳：將蛋白質(zhì)溶液點在浸了緩沖液的支持物區(qū)帶電泳：將蛋白質(zhì)溶液點在浸了緩沖液的支持物上進行電泳，不同組分形成帶狀區(qū)域。上進行電泳，不同組分形成帶狀區(qū)域。（1）紙上電泳：用濾紙作支持物）紙

28、上電泳：用濾紙作支持物。（2）凝膠電泳：用凝膠（淀粉、瓊脂糖、聚丙烯酰胺）凝膠電泳：用凝膠（淀粉、瓊脂糖、聚丙烯酰胺）作支持物。作支持物。A 圓盤電泳：玻璃管中進行的凝膠電泳圓盤電泳：玻璃管中進行的凝膠電泳。+ B 平板電泳：鋪有凝膠的玻板上進行的電泳平板電泳：鋪有凝膠的玻板上進行的電泳。-+等電聚焦電泳等電聚焦電泳：當?shù)鞍踪|(zhì)在其等電點時，凈電荷為零，當?shù)鞍踪|(zhì)在其等電點時，凈電荷為零，在電場中不再移動在電場中不再移動。+5.06.07.0穩(wěn)定pH梯度5.06.07.0穩(wěn)定pH梯度通電+（三）蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)（三）蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)布郎運動、丁道爾現(xiàn)象、電泳現(xiàn)象，不能透過半透膜，具布郎運動、丁道爾

29、現(xiàn)象、電泳現(xiàn)象，不能透過半透膜，具有吸附能力有吸附能力蛋白質(zhì)溶液穩(wěn)定的原因蛋白質(zhì)溶液穩(wěn)定的原因：1）表面形成水膜（水化層）；）表面形成水膜（水化層）； 2）帶相同電荷）帶相同電荷。+（四）蛋白質(zhì)的沉淀反應（四）蛋白質(zhì)的沉淀反應1. 加高濃度鹽類（鹽析）：加鹽使蛋白質(zhì)沉淀析出加高濃度鹽類（鹽析）：加鹽使蛋白質(zhì)沉淀析出。分段鹽析：調(diào)節(jié)鹽濃度，可使混合蛋白質(zhì)溶液中的分段鹽析：調(diào)節(jié)鹽濃度，可使混合蛋白質(zhì)溶液中的幾種蛋白質(zhì)分段析出。血清球蛋白（幾種蛋白質(zhì)分段析出。血清球蛋白（50%(NH4)2SO4飽和度），清蛋白（飽和飽和度），清蛋白（飽和(NH4)2SO4)。2. 加有機溶劑加有機溶劑3. 加重金屬鹽加重金屬鹽4. 加生物堿試劑加生物堿試劑單寧酸、苦味酸、鉬酸、鎢酸、三氯乙酸能沉淀生單寧酸、苦味酸、鉬酸、鎢酸、三氯乙酸能沉淀生物堿，稱生物堿試劑。物堿，稱生物堿試劑。（五）蛋白質(zhì)的變性（五）蛋白質(zhì)的變性天然蛋白質(zhì)受物理或化學因素的影響，分子內(nèi)部原有的高天然蛋白質(zhì)受物理或化學因素的影響，分子內(nèi)部原有的高度規(guī)律性的空間排列發(fā)生變化，致使其原有性質(zhì)發(fā)生部分度規(guī)