無菌檢查標準操作程序

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上無菌檢查標準操作程序1.目的：建立無菌檢查標準操作程序，規(guī)范檢驗操作。2.范圍：適用于本公司產(chǎn)品無菌檢查薄膜過濾法的操作。3.職責：檢驗人員對本程序的實施負責。4.本規(guī)程的編制依據(jù)為2010年版中華人民共和國藥典二部附錄 “無菌檢查法”中的“薄膜過濾法”。5.檢驗環(huán)境要求：5.1本項檢查應在環(huán)境潔凈度C級下的局部潔凈度A級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進行。5.2檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染。5.3單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應按潔凈廠房環(huán)境監(jiān)測規(guī)程（SOP-）及沉降菌監(jiān)測的標準操作規(guī)程（SOP-）、潔凈室懸浮粒子數(shù)測定的標準操作規(guī)程（SOP-）定期

2、進行潔凈度監(jiān)測。隔離系統(tǒng)按相關要求進行驗證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。6.操作規(guī)程：6.1培養(yǎng)基的準備：6.1.1培養(yǎng)基的制備：按培養(yǎng)基配制、滅菌的標準操作規(guī)程（SOP-）制備。 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)好氧菌、厭氧菌）。注意：在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/5，否則，須經(jīng)100水浴加熱至粉紅色消失（不超過20分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并應防止污染。改良馬丁培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)真菌）。6.2培養(yǎng)基的適用性檢查每批培養(yǎng)基應按無菌檢查的標準操作規(guī)程（SOP-）進行培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查。只有本項檢查合格的培養(yǎng)基方可用于供試品無菌檢查。本項檢查

3、可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時進行。6.3稀釋液、沖洗液及其制備方法：6.3.1 0.1%蛋白胨水溶液 取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，調(diào)節(jié)pH值至7.1±0.2，分裝，滅菌。6.3.2 pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液 取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鈉7.23g、氯化鈉4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，滅菌。6.4儀器、用具的準備：過濾器：洗凈，安放孔徑不大于0.45m親水性的微孔濾膜（用前用水浸潤），用牛皮紙包裹，置高壓蒸汽滅菌器內(nèi)，于121126濕熱滅菌20分鐘。不銹鋼剪刀、鑷子、注射器、針頭、燒杯：洗凈后，

4、置適宜的密閉容器中，于160170干熱滅菌2h。無油式真空泵 、耐壓軟管、緩沖瓶等。6.5陽性對照的制備：6.5.2.1根據(jù)供試品的性質(zhì)，選擇陽性對照菌： 無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為對照菌； 抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對照菌； 抗厭氧菌的供試品，以生孢梭菌為對照菌； 抗真菌的供試品，以白色念珠為對照菌。6.5.2.2陽性對照試驗的菌液制備：按無菌檢查的標準操作規(guī)程（SOP-）中“培養(yǎng)基靈敏度檢查”中制備，大腸埃希菌的菌液制備同培養(yǎng)基的靈敏度檢查中的金黃色葡萄球菌。6.6供試品的處理：6.6.1根據(jù)各品種項下的規(guī)定隨機抽取規(guī)定數(shù)量的供試品。6.6.2用消

5、毒液對供試品及檢驗用具的外表面擦拭消毒后，移入無菌檢查室內(nèi)。6.6.3供試品外部消毒：先用75%酒精棉球擦拭供試品外壁及瓶蓋，待干，用消毒鑷子去除鋁塑蓋上的塑蓋，用75%酒精棉球擦拭膠塞及鋁蓋。并用酒精棉球蓋于塞上待取樣。6.6.4供試液制備：用滅菌鑷子取出注射器，在火焰旁將針芯插入針管并安上針頭，供試品瓶蓋和注射器針頭均迅速通過火焰數(shù)次，用注射器吸取適量的稀釋液在已消毒好的穿刺部位刺入小瓶加入溶劑，使溶解，混勻后，將供試品溶液全部轉(zhuǎn)移至滅菌燒杯中，混勻。6.7薄膜過濾6.7.1安裝薄膜過濾器：用耐壓管將過濾器與緩沖瓶瓶及真空泵相連。6.7.2過濾少量的沖洗液以濕潤濾膜。6.7.3將供試品溶液

6、注入過濾器中，啟動真空泵進行減壓抽濾。6.7.4如供試品具有抑菌作用，需用沖洗液沖洗濾膜，每次沖洗量為100ml，沖洗次數(shù)不得少于3次。（具體品種的沖洗次數(shù)，需經(jīng)驗證確定，總沖洗量不宜過大，以免濾膜上的微生物受損傷。）6.8打開過濾器，用滅菌鑷子將濾膜取出，用滅菌不銹鋼剪刀將濾膜分成三等份，分別置于含50ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基的容器中，其中一份做陽性對照用。6.9向上述陽性對照容器中加入小于100cfu的陽性對照菌。6.10陰性對照：取相應的稀釋液和沖洗液同法操作，濾膜分成二等份，分別加至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基中，作為陰性對照。6.11培養(yǎng)與觀察：6.11.1將

7、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置3035，改良馬丁培養(yǎng)基置2328培養(yǎng)14天。6.11.2培養(yǎng)期間，逐日觀察并記錄是否有菌生長。陽性對照管培養(yǎng)4872小時，應生長良好。陰性對照不得有菌生長。6.11.3如在加入供試品后、或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上，細菌培養(yǎng)2天、真菌培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基上是否再出現(xiàn)渾濁或斜面是否有菌生長；或取培養(yǎng)液涂片、染色，鏡檢，判斷是否有菌。6.12結(jié)果判斷若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗結(jié)果無效，即生長的微生物非供試品所含。當符合下列任何一個條件時，方可判試驗結(jié)果無效：）無菌檢查試驗所用的設備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求；）回顧無菌試驗過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素；）陰性對照管有菌生長；）供試品管中生長的微生