化妝品中苯甲醇的檢測(cè)方法

1、附件10：化妝品中苯甲醇的檢測(cè)方法氣相色譜法1 范圍 本方法規(guī)定了采用氣相色譜法測(cè)定化妝品中防腐劑苯甲醇（CAS：100-51-6）含量的方法。 本方法適用于膏霜、乳、液、粉類化妝品中苯甲醇含量的測(cè)定。暫無(wú)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明本方法適用于蠟質(zhì)類化妝品中苯甲醇含量的測(cè)定。2 方法提要樣品經(jīng)過(guò)提取后，采用氣相色譜儀分離，氫火焰離子化檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)保留時(shí)間定性，峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。本方法的檢出限為0.0012g，定量下限為0.0039g。若取1.0g樣品，本方法對(duì)苯甲醇的檢出濃度為0.0012%，最低定量濃度為0.004%。必要時(shí)，采用氣相色譜-質(zhì)譜（GC/MS）確證。3 試劑和材料除另有規(guī)

2、定外，所用試劑均為分析純。3.1 無(wú)水乙醇。3.2 苯甲醇，純度99.5%。3.3 苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（苯甲醇）=1.0g/L：精密稱取苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)品0.1000g于100mL的容量瓶中,用無(wú)水乙醇（3.1）溶解并稀釋至刻度。即得質(zhì)量濃度為1.0mg/mL的苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。該儲(chǔ)備液應(yīng)在04冰箱冷藏保存。3.4 系列濃度苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別精密量取一定體積的苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.3）于10mL量瓶中，以無(wú)水乙醇（3.1）稀釋并定容至刻度，得系列濃度為0.05mg/mL 、0.10mg/mL、0.20mg/ mL、0.30g/mL、0.40mg/mL、0.50mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。4 儀器和設(shè)備

3、4.1 氣相色譜儀:具氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）、質(zhì)譜檢測(cè)器（MSD）。4.2 分析天平：感量為0.0001g。4.3 分析天平：感量為0.01g。4.4 容量瓶：10mL、100mL。4.5 具塞刻度離心試管：10mL。4.6 渦旋振蕩器。4.7 恒溫水浴鍋。4.8 超聲波清洗儀。4.9 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不小于5000r/min。4.10 注射式樣品過(guò)濾器（有機(jī)溶媒型，0.45m）。5 測(cè)定步驟5.1 樣品處理稱取0.5g1.0g（精確至0.01g）樣品于10mL容量瓶中，加入5mL無(wú)水乙醇（3.1），渦旋振蕩使試樣與提取溶劑充分混勻，置于50水浴中加熱5min（液體類樣品不需水浴加熱），超聲

4、提取20min，冷卻至室溫后，用無(wú)水乙醇（3.1）稀釋至刻度，混勻后轉(zhuǎn)移至10mL刻度離心管中，以5000r/min離心5min。上清液經(jīng)0.45m濾膜過(guò)濾，濾液作為試樣溶液備用。若樣品中苯甲醇的質(zhì)量濃度超過(guò)了線性范圍的上限，需對(duì)待測(cè)液進(jìn)行適當(dāng)稀釋。5.2 色譜條件 氣相色譜（GC/FID）參考條件a) 色譜柱：HP-FFAP石英毛細(xì)管色譜柱（30m0.25mm0.25m，硝基對(duì)苯二酸改性的聚乙二醇)，或相當(dāng)者；b) 柱溫程序：初始溫度150，以10/min的速率升溫至180，保持3min后，再以20/min的速率升溫至230，保持5min；c) 進(jìn)樣口溫度：240；d) 檢測(cè)器溫度：250；

5、e) 載氣：N2，流速：1.0mL/min；f) 氫氣流量：40mL/min；g) 空氣流量：400mL/min；h) 尾吹氣氮?dú)饬髁浚?0mL/min；i) 進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比:40:1；j) 進(jìn)樣量：1L。注：載氣、空氣、氫氣流速隨儀器而異，操作者可根據(jù)儀器及色譜柱等差異，通過(guò)試驗(yàn)選擇最佳操作條件，使苯甲醇與化妝品中其他組分峰獲得完全分離。 氣相色譜-質(zhì)譜（GC/MS）參考條件a) 色譜柱：HP-FFAP石英毛細(xì)管色譜柱（30m0.25mm0.25m，硝基對(duì)苯二酸改性的聚乙二醇)或相當(dāng)者；b) 柱溫程序：程序升溫：初始溫度150，以10/min的速率升溫至180，保持3min后，再

6、以20/min的速率升溫至230，保持5min；c) 進(jìn)樣口溫度：230；d) 接口溫度：240；e) 載氣：氦氣1.0 mL/min；f) 電離方式：EI；g) 電離能量：70ev；h) 監(jiān)測(cè)方式：全掃描； i) 監(jiān)視離子范圍（m/z）：20110；j) 進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比：40:1k) 進(jìn)樣量：1.0L。5.3 測(cè)定按“5.2.1”項(xiàng)下色譜條件，取系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.4）分別進(jìn)樣，進(jìn)行氣相色譜分析，以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。取“5.1”項(xiàng)下樣品待測(cè)溶液進(jìn)樣1L，將測(cè)定成分的峰面積，代入回歸方程計(jì)算苯甲醇的濃度。按“6”

7、項(xiàng)下計(jì)算公式計(jì)算樣品中苯甲醇的含量。苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液氣相色譜圖參見(jiàn)附錄A的圖A.1。5.4 確證必要時(shí)，采用氣相色譜-質(zhì)譜確證陽(yáng)性結(jié)果，以檢查化妝品中是否有其它物質(zhì)干擾苯甲醇的測(cè)定。氣相色譜-質(zhì)譜條件參見(jiàn)（），如果檢出的色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)，且所選擇的離子的相對(duì)豐度比與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的相對(duì)豐度比一致，則可判斷樣品中存在苯甲醇。苯甲醇的全掃描圖參見(jiàn)附錄C的圖C.1；苯甲醇的質(zhì)譜圖參見(jiàn)附錄C的圖C.2。6 計(jì)算式中：（苯甲醇） 樣品中苯甲醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%； 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中得出的測(cè)試溶液中苯甲醇濃度， mg/mL；V 樣品定容體積， mL

8、；m 樣品取樣量， g。7 回收率當(dāng)樣品添加標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度在0.05%0.5%范圍內(nèi)，測(cè)定結(jié)果的平均回收率在97.9%108.7%。8 允許差在重復(fù)條件下獲得的同一樣品溶液兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過(guò)算術(shù)平均值的10%。高效液相色譜法1 范圍本方法規(guī)定了采用高效液相色譜法測(cè)定化妝品中防腐劑苯甲醇（CAS：100-51-6）含量的方法。 本方法適用于膏霜、乳、液、粉類化妝品中苯甲醇含量的測(cè)定。暫無(wú)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明本方法適用于蠟質(zhì)類化妝品中苯甲醇含量的測(cè)定。2 方法提要樣品在經(jīng)過(guò)提取后，采用高效液色譜儀分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)保留時(shí)間定性，峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。本方法對(duì)苯甲醇的檢出限

9、為0.000005g，定量下限為0.00002g。若取1.0g樣品，本方法對(duì)苯甲醇的檢出濃度為0.0000005%；最低定量濃度為0.000002%。3 試劑和材料水為超純水。3.1 甲醇：色譜純。3.2 苯甲醇，純度99.5%。3.3 苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（苯甲醇）=1.0g/L：精密稱取苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)品0.1000g于100mL的容量瓶中,用甲醇（3.1）溶解并稀釋至刻度。即得質(zhì)量濃度為1.0mg/mL的苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。該儲(chǔ)備液應(yīng)在04冰箱冷藏保存。3.4 系列濃度苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別精密量取一定體積的苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.3）于10mL量瓶中，以甲醇（3.1）稀釋并定容至刻度，得系列濃度為

10、0.05mg/mL 、0.10mg/mL、0.20mg/ mL、0.30g/mL、0.40mg/mL、0.50mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。4 儀器和設(shè)備4.1 液相色譜儀:具紫外檢測(cè)器。4.2 分析天平：感量為0.0001g。4.3 分析天平：感量為0.01g。4.4 容量瓶：10mL、100mL。4.5 具塞刻度離心試管：10mL。4.6 渦旋振蕩器。4.7 超聲波清洗儀。4.8 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不小于5000r/min。4.9 恒溫水浴鍋。4.10 注射式樣品過(guò)濾器（有機(jī)溶媒型，0.45m）。5 測(cè)定步驟5.1 樣品處理稱取0.5g1.0g（精確至0.01g）樣品于10mL容量瓶中，加入5mL甲醇（

11、3.1），渦旋振蕩使試樣與提取溶劑充分混勻，置于50水浴中加熱5min（液體類樣品不需水浴加熱），超聲提取20min，冷卻至室溫后，用甲醇（3.1）稀釋至刻度，混勻后轉(zhuǎn)移至10mL刻度離心管中，以5000r/min離心5min。上清液經(jīng)0.45m濾膜過(guò)濾，濾液作為試樣溶液備用。若樣品中苯甲醇的質(zhì)量濃度超過(guò)了線性范圍的上限，需對(duì)待測(cè)液進(jìn)行適當(dāng)稀釋。5.2 色譜條件a) 色譜柱：C18柱（250mm 4.6mm，5m，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑）；b) 流動(dòng)相：甲醇-水，梯度洗脫參考條件見(jiàn)下表：時(shí)間（min）甲醇（%）水（%）0356512356515703020100035100040356

12、5453565注：梯度洗脫條件，操作者可根據(jù)樣品的不同選擇最佳條件，使苯甲醇與化妝品中其他組分峰獲得完全分離。c) 流速：1.0mL/min；d) 檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；e) 柱溫: 35；f) 進(jìn)樣量：10L。5.3 測(cè)定按“5.2”項(xiàng)下色譜條件，取系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.4）分別進(jìn)樣，進(jìn)行液相色譜分析，以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。取“5.1”項(xiàng)下樣品待測(cè)溶液進(jìn)樣10L，將測(cè)定成分的峰面積，代入回歸方程計(jì)算苯甲醇的濃度。按“6”項(xiàng)下計(jì)算公式計(jì)算樣品中苯甲醇的含量。苯甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液高效液相色譜圖參見(jiàn)附錄B的圖B.1。6 計(jì)算 式中：（苯甲醇） 樣品中苯甲醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%； 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中得出的測(cè)試溶液中苯甲醇濃度， mg/mL；V 樣品定容體積， mL；m 樣品取樣量， g。7 回收率當(dāng)樣品添加標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度在0.05%0.5%范圍內(nèi)，測(cè)定結(jié)果的平均回收率在91.9%102.7%。8 允許差在重復(fù)條件下獲得的同一樣品溶液兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過(guò)算術(shù)平均值的10%。附錄A（資料性附錄） 氣相