生孢梭菌制備

1、不知樓主是要計(jì)可培養(yǎng)的數(shù)量還是測(cè)菌液內(nèi)菌的數(shù)量。如果計(jì)可培養(yǎng)的數(shù)量的話就直接涂布到瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計(jì)數(shù)就可以。若是要計(jì)菌液里的數(shù)量可以測(cè)一下ODfi或者用熒光燃料染色后再在顯微鏡下計(jì)數(shù)。作者：yushanyou12你是在藥廠工杯的？恩，菌懸液的濃度要求的確是每毫升小于100cfu,但是最好在50到100cfu之間，小于50的話容易出現(xiàn)假陰性。還有你是要做無(wú)菌的方法驗(yàn)證還是無(wú)菌培養(yǎng)基的靈敏度檢查呢？至于確定菌的量，是在硫乙醇中計(jì)數(shù)的。其實(shí)無(wú)菌方法驗(yàn)證中的菌懸液的制備也是依中國(guó)藥典（2005年版二部）附錄XIH無(wú)菌檢查法中“培養(yǎng)基靈敏度檢查”項(xiàng)下的方法，制備成小于100CFU/ml的對(duì)照用菌液

2、。所以無(wú)論你做什么，菌懸液的制備方法都是一樣的。具體方法就是，先把生抱梭菌在硫乙醇中培養(yǎng)24小時(shí)，然后吸取1毫升培養(yǎng)液用生理鹽水進(jìn)行10倍稀釋，我的經(jīng)驗(yàn)是，稀釋到10的-7次方就是在100cfu以下了（這個(gè)你得自己多做幾次平行實(shí)驗(yàn)或驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，看到底稀釋到多少倍。最初不好把握的時(shí)候可以同時(shí)培養(yǎng)幾個(gè)臨近的梯度），然后取至少200ml的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基到試管里（要求無(wú)菌），然后接種1ml制備好的菌懸液到硫乙醇試管里，在32.5度下培養(yǎng)18h,然后開(kāi)始計(jì)數(shù)。生抱梭菌在液體的硫乙醇里會(huì)長(zhǎng)成梭子一樣的單個(gè)菌落，這時(shí)拿的時(shí)候千萬(wàn)不要震動(dòng)，然后開(kāi)始計(jì)數(shù)（一個(gè)單獨(dú)的“梭子”計(jì)一個(gè)菌落）。注：如果培養(yǎng)時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)

3、生渾濁，不便于計(jì)數(shù)。如果震動(dòng)試管也會(huì)渾濁。硫乙醇的量盡量大一點(diǎn)，這樣便于計(jì)數(shù)。一些具體的東西，還需要你實(shí)際去操作后，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，再解決問(wèn)題。貌似你現(xiàn)在的經(jīng)驗(yàn)不是很足，最好的是找個(gè)懂的人帶你做幾次，或去別的公司或研究所參觀學(xué)習(xí)，這樣學(xué)起來(lái)會(huì)快一點(diǎn)。最后祝賀你成功。推薦方便的生抱梭菌計(jì)數(shù)方法附件：,一一生抱梭菌計(jì)數(shù)采用流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（含瓊脂）,稱取培養(yǎng)基15g,再加入純化瓊脂粉0.40.5g加入500ml蒸播水后加熱使溶解后分裝至30*200的大試管中,50ml/管，加塞，包扎后滅菌，培養(yǎng)基溫度保持在4550攝氏度時(shí)，將稀釋好的生抱梭菌菌液用吸管吸取1ml加入至培養(yǎng)基中，輕輕搖勻后置3035攝氏度培養(yǎng)1620小時(shí)（不強(qiáng)求厭氧環(huán)境培養(yǎng)），立即觀察點(diǎn)計(jì)菌數(shù),切記培養(yǎng)期間不可搖動(dòng)試管，生長(zhǎng)的微生物群體在培養(yǎng)基中分散成小米狀，注意選擇菌數(shù)在3050之間的試管，便于點(diǎn)計(jì).把我計(jì)數(shù)時(shí)的圖附上，以便大家參考生抱梭菌計(jì)數(shù)采用流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（含瓊脂）,稱取培養(yǎng)基15g,再加入純化瓊脂粉0.40.5g加入500ml蒸播水后加熱使溶解后分裝至30*200的大試管中,50ml/管，加塞，包扎后滅菌，培養(yǎng)基溫度保持在4550攝氏度時(shí)，將稀釋好的生抱梭菌菌液用吸管吸取1ml加入至培養(yǎng)基中，輕輕搖勻后置3035攝氏度培養(yǎng)1620小時(shí)（不強(qiáng)求厭氧環(huán)境培養(yǎng)），立即觀