羊布氏桿菌brucellosis酶聯(lián)免疫分析

1、如有幫助，歡迎下載。羊布氏桿菌(brucellosis酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書本試劑盒僅供研究使用。96T使用目的：本試劑盒用于測(cè)定羊血清、血漿及相關(guān)液體樣本中布氏桿菌(brucellosis)表達(dá)。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中羊布氏桿菌(brucellosis)表達(dá)。用純化的羊布氏桿菌(brucellosis)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中布氏桿菌(brucellosis)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的布氏桿菌(brucellosis)抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)

2、色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(0D值)，與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中羊布氏桿菌(brucellosis)的存在與否。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20mlX1瓶7終止液6mlX1瓶2酶標(biāo)試劑6mIX1瓶8r陽(yáng)性對(duì)照0.5mlX1瓶3酶標(biāo)包被板12孔X8條9陰性對(duì)照0.5mlX1瓶4樣品稀釋液6mIX1瓶10說(shuō)明書1份5顯色劑A液6mIX1瓶11圭寸板膜P張6顯色劑B液6mlX1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2 .不能

3、檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1 .編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)2 .加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50P。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液4on，然后再加待測(cè)樣品1?？?。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，3 .溫育：用封板膜封板后置37C溫育30分鐘。4 .配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餛水30倍稀釋后備用5 .洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后奔去，如此重復(fù)5次，拍干。6 .

4、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑504，空白孔除外。7 .溫育：操作同3。8 .洗滌：操作同5。9 .顯色：每孔先加入顯色劑A504，再加入顯色劑B50d，輕輕震蕩混勻，37C避光顯色15分鐘.10 .終止：每孔加終止液504，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11 .測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié):準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，3廠C反應(yīng)30分鐘洗板5次，加入酶標(biāo)試劑，37c反應(yīng)30分鐘洗板5次，加入顯色液A、B,37C顯色10分鐘加入終止液15分鐘之內(nèi)讀0D值計(jì)算計(jì)算和結(jié)果判定：試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平

5、均值羽.00；陰性對(duì)照平均值0.10臨界值（CUTOFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15陰性判定：樣品OD值V臨界值（CUTOFF）者為布氏桿菌（brucellosis）陰性陽(yáng)性判定：樣品OD值臨界值（CUTOFF）者為布氏桿菌（brucellosis）陽(yáng)性注意事項(xiàng)1 操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。2 -試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。4封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5底物請(qǐng)避光保存。6試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)