羊布氏桿菌brucellosis酶聯(lián)免疫分析

1、如有幫助，歡迎下載。羊布氏桿菌(brucellosis酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。96T使用目的：本試劑盒用于測定羊血清、血漿及相關液體樣本中布氏桿菌(brucellosis)表達。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中羊布氏桿菌(brucellosis)表達。用純化的羊布氏桿菌(brucellosis)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中布氏桿菌(brucellosis)相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的布氏桿菌(brucellosis)抗體結合，形成抗體抗原酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍

2、色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(0D值)，與CUTOFF值相比較，從而判定標本中羊布氏桿菌(brucellosis)的存在與否。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20mlX1瓶7終止液6mlX1瓶2酶標試劑6mIX1瓶8r陽性對照0.5mlX1瓶3酶標包被板12孔X8條9陰性對照0.5mlX1瓶4樣品稀釋液6mIX1瓶10說明書1份5顯色劑A液6mIX1瓶11圭寸板膜P張6顯色劑B液6mlX1/瓶12密封袋1個標本要求1 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20C保存，但應避免反復凍融2 .不能

3、檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1 .編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)2 .加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50P。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液4on，然后再加待測樣品1?？?。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，3 .溫育：用封板膜封板后置37C溫育30分鐘。4 .配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餛水30倍稀釋后備用5 .洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后奔去，如此重復5次，拍干。6 .

4、加酶：每孔加入酶標試劑504，空白孔除外。7 .溫育：操作同3。8 .洗滌：操作同5。9 .顯色：每孔先加入顯色劑A504，再加入顯色劑B50d，輕輕震蕩混勻，37C避光顯色15分鐘.10 .終止：每孔加終止液504，終止反應（此時藍色立轉黃色）。11 .測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。操作程序總結:準備試劑，樣品和標準品加入準備好的樣品和標準品，3廠C反應30分鐘洗板5次，加入酶標試劑，37c反應30分鐘洗板5次，加入顯色液A、B,37C顯色10分鐘加入終止液15分鐘之內讀0D值計算計算和結果判定：試驗有效性：陽性對照孔平

5、均值羽.00；陰性對照平均值0.10臨界值（CUTOFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定：樣品OD值V臨界值（CUTOFF）者為布氏桿菌（brucellosis）陰性陽性判定：樣品OD值臨界值（CUTOFF）者為布氏桿菌（brucellosis）陽性注意事項1 操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。2 -試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。3濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。4封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5底物請避光保存。6試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長