紫外分光光度法測定荔枝核抗乙肝成份的含量

1、紫外分光光度法測定荔枝核抗乙肝成份的含M【關(guān)鍵詞】荔枝核；，抗乙肝；，黃酮類；，紫外分光光度法摘要：目的研究荔枝核抗乙肝成份黃酮類化合物的測定方式。方式紫外分光光度法在510nm處測定。結(jié)果成立了回歸方程C(Ug/ml)=61+26A,相關(guān)系數(shù)8,平均加標(biāo)回收率為%(RSD)。測定荔枝核抗乙肝成份黃酮類化合物含量為。結(jié)論該方式簡便,準(zhǔn)確,可用于測定荔枝核抗乙肝成份黃酮類化合物的含量。關(guān)鍵詞：荔枝核；抗乙肝；黃酮類；紫外分光光度法DeterminationoftheContentofAntihepatitisBConsituentsinLitchiSeedbySpectrophotometric

2、MethodAbstract：ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofthecontentofantihepatitisBconstituentsflavonoidsinLitchicontentofanti-hapatitisBconsituentsflavnoidsinLitchiSeedwasdeterminedbyspectrophtometricmethodat510nm.ResultsTheregressionequationC(Hg/ml)+AandR=oftherelationshipbetweenconcentratio

3、nandabsorbancewereestablished.Theaveragerecoverywas%andRSDwas%.ThecontentofantihepatitisBconsituentsflavonoidsinLitchiSeedwas%.ConclusionThemethodiseasyandaccurate,andcanbeusedfordeterminationofthecontentofantihepatitisBconsituentsflavnoidsinLitchiSeed.Keywords：LitchiSeed;AntihepatitisB;Flavonoids;S

4、pectrophometicmethod荔枝核是無患子科植物荔枝的干燥成熟種子，要緊散布在福建、臺(tái)灣、廣西、廣東等省。我國古代藥典記載荔枝核性溫，歸肝、腎經(jīng)，能祛寒止痛。現(xiàn)代臨床實(shí)驗(yàn)研究顯示荔枝核能夠降低血糖、調(diào)劑血脂和提高抗氧化能力、抑制乙肝病毒的作用1,2。徐慶等3發(fā)覺荔枝核中黃酮類化合物具有專門好的抑制乙肝病毒表面抗原HBsAg的功效。目前除少量荔枝核被藥用外，大量荔枝核都被遺棄浪費(fèi)。為了充分利用該資源、變廢為寶、研究如何開發(fā)荔枝核抗乙肝成份黃酮類化合物很成心義和價(jià)值。天然藥用植物中黃酮類化合物測定方式要緊有紫外可見分光光度法4、高效液相色譜法5、薄層色譜法6等。國內(nèi)外文獻(xiàn)關(guān)于荔枝核中黃

5、酮類化合物的測定方式尚未見報(bào)導(dǎo)，木文成立了鋁鹽顯色分光光度法測定荔枝核抗乙肝成份黃酮類化合物的方式，并測定荔枝核抗乙肝成份黃酮類化合物的含量。1儀器與材料儀器756MC紫外-可見光分光光度計(jì)（上海分析儀器總廠）;WS2-133-74多功能電子恒溫水浴鍋（廣東汕頭醫(yī)療器械二廠），Explorer-11140電子天平（瑞士0HAUS公司）。材料荔枝核購自中藥材公司，產(chǎn)地廣西；蘆丁對照品來自中國藥品生物制品檢定所；氯化鋁、亞硝酸鈉、氫氧化鈉（分析純）；95%乙醇；石油酸；水為蒸儲(chǔ)水。2方式與結(jié)果測定方式依據(jù)以蘆丁為對照品測定荔枝核抗乙肝成份黃酮類化合物的含量，加入鋁離子試劑，同時(shí)操縱適宜pH值，使黃

6、酮類化合物與鋁鹽形成配合物在可見光區(qū)能取得穩(wěn)固的特點(diǎn)吸收峰。試樣品溶液的配制荔枝核打成粉過40目的篩。取必然量的荔枝核粉，加入適量50%乙醇浸提。提取液過濾后加入石油酸萃取以除去酯類物質(zhì)和色素，分液去掉石油酸層取得荔枝核黃酮類化合物的提取溶液。對照品溶液的配制精準(zhǔn)稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品mg,用50%乙醇溶解后定容，配制成蘆丁50%乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（mg/ml）o檢測波長的選擇各取試樣品溶液和蘆丁對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液少量，按2.5方式顯色后在400650nm區(qū)間掃描，確信二者在510nm處均有一強(qiáng)吸收峰（圖廣2）,應(yīng)選擇510nm為測定波長。圖1蘆丁標(biāo)樣顯色掃描曲線（略）標(biāo)準(zhǔn)曲線的成立精準(zhǔn)量取蘆丁對照溶液，ml于

7、251nl容量瓶，加水至6mlo加入5%NaN02溶液ml,混勻后放置6min；再加入10%A1C13溶液ml,混勻后放置6min；最后加入4%NaOH溶液ml顯色，加水至刻度。靜置15mins后在510nm處測定吸光度，以1號(hào)瓶為空白。繪制出吸光度-濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖3）o用最小二乘法求出回歸方程為：C（Ug/ml）=61+26A,相關(guān)系數(shù)r=8,P說明蘆丁含量在線性范圍、Ug/ml之間與吸光度呈良好的線性關(guān)系。圖2荔枝核提取液顯色掃描曲線（略）圖3蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線（略）準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)取荔枝核黃酮類化合物的提取液，加50%乙醇配成不同濃度的3種樣品。取1ml樣品溶液，按2.5顯色測定A。結(jié)果見表lo實(shí)

8、驗(yàn)顯示5次測定A值轉(zhuǎn)變很小，相對標(biāo)準(zhǔn)誤差（RSD）%（n二5）,說明該方式準(zhǔn)確性高。表1準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）穩(wěn)固性實(shí)驗(yàn)取1ml的1號(hào)樣品顯色后，每隔10min測定1次A值。結(jié)果見表2。實(shí)驗(yàn)說明在30min內(nèi)A值維持穩(wěn)固，1h后A值下降約10%,因此提取液顯色后應(yīng)在30min內(nèi)測定吸光度。表2穩(wěn)固性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)取3號(hào)樣品1ml于25ml,再加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，ml,按法顯色測定總黃酮含量，計(jì)算加標(biāo)回收率。結(jié)果見表3。表3加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）從表3可見，總黃酮含量在線形范圍、Ug/ml）內(nèi)，回收率在飛之間,平均回收率達(dá)到出52%）,說明該方式能夠作為荔枝核中抗乙肝成份黃酮類化合物含量

9、的測定方式。荔枝核抗乙肝成份黃酮類化合物含量的測定荔枝核打成粉過40目的篩。平行取5g荔枝核粉5份，加入50%的乙醇溶液100ml,80回流提取兩次，第1次6h,第2次4h。歸并兩次提取液，提取液加入石油酸萃取除去酯類物質(zhì)。取必然體積的萃過液，稀釋至必然倍數(shù)。吸取稀釋液1ml按上面的方式顯色，測定吸光度，通過回歸方程計(jì)算出稀釋液中總黃酮的濃度。荔枝核中總黃酮含量按下式計(jì)算：含量晚戶總黃酮的濃度X25X提取液的體積數(shù)X稀釋倍數(shù)荔枝核原料的質(zhì)量X100%表4是5次平行實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。從表中能夠看到荔枝核中抗乙肝成份黃酮類化合物的平均含量為,RSD=%(n=5)。表4荔枝核黃酮類化合物含量(略)3討論采

10、納紫外分光光度法測定荔枝核抗乙肝成份黃酮類化合物的含量具有快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。提取液顯色前用石油酸萃取掉脂類物質(zhì)和色素，減少了干擾，使含量測定結(jié)果準(zhǔn)確性更高，重現(xiàn)性更好。荔枝核抗乙肝成份黃酮類化合物的含量測定顯示黃酮類化合物的含量較高，能夠作為新的抗乙肝藥物成份來源開發(fā)利用。參考文獻(xiàn):1潘競鏘，郭潔文，韓超，等.荔枝核的藥理實(shí)驗(yàn)研究J.中國新藥雜志,2000,9(1)：14.2肖柳英，潘競鏘，饒衛(wèi)農(nóng)，等.荔枝查對小鼠免疫性肝炎的實(shí)驗(yàn)研究J.中國新醫(yī)藥，2004,3(6)：7.3徐慶，宋蕓娟，陳全斌，等.荔枝核黃酮類化合物對HepG2.2.15細(xì)胞系HBsAg與HBeAg表達(dá)及HV-DNA含量的阻礙J.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004,25(20)：1862.4王仲英，李香蘭.馬齒覽中黃酮類化