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文檔簡介

1、電泳出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象電泳出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，英文成為 smear-,就是彌散。其原因，主要從以下兩個方面考慮：拖尾：產(chǎn)物在凝膠上呈 Smear 狀態(tài)。原因：1 .模板不純2 .Buffer 不合適3 .退火溫度偏低4 .酶量過多5 .dNTP、Mg2 然度偏高6 .循環(huán)次數(shù)過多對策：1 .純化模板2 .更換 Buffer3 .適當(dāng)提高退火溫度4 .適量用酶5 .適當(dāng)降低 dNTPffi 鎂離子的濃度6 .減少循環(huán)次數(shù)1、PCRT 物自身原因：往往由于酶量過多或酶的質(zhì)量差，dNTP度過高，Mg2 袱度過高，退火溫度過低，循環(huán)次數(shù)過多，而造成 PCR 勺非特異性產(chǎn)物過多。對策：減少 Taq 酶的量，或調(diào)換另

2、一來源的酶。減少 dNTP 的濃度。適當(dāng)降低Mg2 然度。增加模板量，減少引物的用量，減少循環(huán)次數(shù)，提高退火溫度。2、電泳體系的問題：（1）電泳緩沖液 TAEc 者 TBE 的污染，建議更換緩沖液。（2）上樣時樣品漂了，建議增加上樣緩沖液的用量，以及小心加樣。（3）電壓太高。（4）適當(dāng)把你的膠的濃度加大。 （根據(jù)你的片斷大小而定）（5）觀察你的 marker 是否也存在拖尾現(xiàn)象，作為對照。PCRfi 尾及假陽性的原因及對策拖尾現(xiàn)象：產(chǎn)物在凝膠上呈 Smear 狀態(tài)。原因：1 .模板不純2 .Buffer 不合適3 .退火溫度偏低4 .酶量過多5 .dNTP、Mg2 然度偏高6 .循環(huán)次數(shù)過多對策：1 .純化模板2 .更換 Buffer3 .適當(dāng)提高退火溫度4 .適量用酶5 .適當(dāng)降低 dNTPffi 鎂離子的濃度6 .減少循環(huán)次數(shù)假陽性現(xiàn)象：空白對照出現(xiàn)目的擴增產(chǎn)物原因：靶序列或擴增產(chǎn)物的交*污染對策：1 .操作時應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外；2 .除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。

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