eagvuas醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)資料總結(jié)1

1、| You have to believe, there is a way. The ancients said:" the kingdom of heaven is trying to enter". Only when the reluctant step by step to go to it 's time, must be managed to get one step down, only have struggled to achieve it. - Guo Ge Tech醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)資料總結(jié)一、名詞解釋1、質(zhì)粒是細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)攜帶的染色體外的DNA分子

2、，是共價(jià)閉合的環(huán)狀DNA分子，能獨(dú)立進(jìn)行復(fù)制。質(zhì)粒只有在宿主細(xì)胞內(nèi)才能夠完成自己的復(fù)制。2、基因指貯存有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA序列及表達(dá)這些信息所需的全部核苷酸序列，是核酸分子中貯存遺傳信息的遺傳單位。3、癌基因是細(xì)胞內(nèi)控制細(xì)胞生長和分化的基因，具有潛在的誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的特性，它的結(jié)構(gòu)異?；虮磉_(dá)異常，可以引起細(xì)胞癌變。4、基因克隆是指把一個(gè)生物體的遺傳信息（基因片段）轉(zhuǎn)入另一個(gè)生物體內(nèi)進(jìn)行無性繁殖，得到一群完全相同的基因片段，又稱DNA克隆。5、抑癌基因是指存在于正常細(xì)胞內(nèi)的一大類可抑制細(xì)胞生長并具有潛在抑癌作用的基因，當(dāng)這類基因在發(fā)生突變、缺失或失活時(shí)可引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。

3、6、基因診斷是以DNA和RNA為診斷材料，通過檢查基因的存在、缺陷或表達(dá)異常，對(duì)人體狀態(tài)和疾病作出診斷的方法和過程。7、管家基因是在生命過程都是必需的，是在一個(gè)生物個(gè)體的幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)的基因，它較少受環(huán)境因素的影響，其表達(dá)方式為組成性基因表達(dá)。8、klenow片段亦稱DNA聚合酶1大片段，為DNA聚合酶I經(jīng)枯草桿菌蛋白酶裂解后產(chǎn)生的大片段，它除了保留53聚合酶活性及35外切酶活性外，失去了53外切酶活性，它具有的35外切酶活性能保證DNA復(fù)制的準(zhǔn)確性，把DNA合成過程中錯(cuò)誤配對(duì)的堿基去除，再把正確的核苷酸接上去。9、核蛋白體系tRNA與蛋白質(zhì)結(jié)合生成的一種復(fù)合體，是蛋白質(zhì)生物合成的場(chǎng)所

4、。10、限制性內(nèi)切核酸酶能識(shí)別DNA的特異序列，并在識(shí)別位點(diǎn)或其附近切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切核酸酶，是基因克隆中最重要的工具酶，通常所說的限制酶是指2型酶。主要從原核細(xì)胞中提取，大多數(shù)限制性內(nèi)切酶是錯(cuò)位切割雙鏈DNA，產(chǎn)生粘性末端，部分酶則沿對(duì)稱軸切割DNA而產(chǎn)生平端。11、Tm值DNA變性是在一個(gè)相當(dāng)窄的溫度范圍內(nèi)完成的，在這一范圍內(nèi)，紫外吸收值達(dá)到最大值的50%時(shí)的溫度稱為DNA的解鏈溫度，又稱融解溫度（Tm），其大小與G+C含量成正比?；?雙鏈DNA變性一半所需要的溫度叫DNA的融解溫度. 12、DNA的甲基化是指DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)中，有一些堿基可以通過加上一個(gè)甲基而被修飾，其作用是對(duì)自身

5、DNA產(chǎn)生保護(hù)作用。13、原位雜交是核酸保持在細(xì)胞或組織切片中，經(jīng)適當(dāng)方法處理細(xì)胞或組織后，將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交的方法。14、DNA微陳列系直接將大量DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面所組成的微陳列（基因芯片）稱為DNA微陳列。. 15、順序作用元件是指那些與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)，能被基因調(diào)控蛋白異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列,抱括啟動(dòng)子.上游啟動(dòng)子元件.增強(qiáng)子.加尾信號(hào)和一些反應(yīng)元件。16轉(zhuǎn)位因子是指能夠在一個(gè)DNA分子內(nèi)或2個(gè)DNA分子之間移動(dòng)的DNA片段。17、基因治療-是指通過在特定靶細(xì)胞中表達(dá)該細(xì)胞本來不表達(dá)的基因，或采用特定方式關(guān)閉和抑制異常表達(dá)基

6、因，達(dá)到治療疾病目的的治療方法。二、綜合內(nèi)容 1、DNA的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及特點(diǎn) 一級(jí)結(jié)構(gòu)是指DNA分子中核苷酸的排列順序，二級(jí)結(jié)構(gòu)是指兩條DNA單鏈形成的雙螺旋結(jié)構(gòu)、三股螺旋結(jié)構(gòu)和四股螺旋結(jié)構(gòu)；三級(jí)結(jié)構(gòu)是指雙鏈DNA進(jìn)一步扭曲盤旋形成的超螺旋結(jié)構(gòu)。DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的基本特點(diǎn)：4種脫氧核糖核苷酸以3，5磷酸二酯鍵相連，形成長鏈，鏈中的脫氧核糖和磷酸都是相同的。組成DNA的堿基有腺嘌呤（A）、鳥嘌呤（G）、胞嘧啶（C）和胸腺嘧啶（T）。DNA是由兩條單鏈結(jié)合在一起形成的雙鏈分子，兩條單鏈都是由A、T、G、C以千變?nèi)f化的排列組合而形成的。大多數(shù)生物的遺傳信息都是儲(chǔ)存在DNA分子中。DNA分子主要攜帶兩類遺

7、傳信息，即有功能活性的DNA序列所攜帶的信息和調(diào)控信息。DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)是指DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，其特點(diǎn)為：脫氧核糖與磷酸交替排列構(gòu)成了DNA主鏈；兩條脫氧核苷酸鏈?zhǔn)欠聪蚱叫信帕?，一條是53方向，另一條為35方向；以右手方向盤繞成雙螺旋構(gòu)型；A配T，G配C。生物體的閉環(huán)DNA都以超螺旋形式存在，如細(xì)菌質(zhì)粒、一些病毒、線粒體的DNA等。 2、RNA的結(jié)構(gòu)、功能、特點(diǎn)由4種基本的核苷酸以3，5-磷酸二酯鍵連接而成的長鏈，堿基中沒有T，而為尿嘧啶（U）。分為mRNA（信使RNA），tRNA（轉(zhuǎn)RNA，轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸）和核蛋白體RNA（rRNA）。mRNA結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：不穩(wěn)定、代謝活躍，更新迅速，壽命短。原核生物

8、mRNA具有操縱子結(jié)構(gòu)，主要是多順反子，mRNA5端無帽子結(jié)構(gòu)，3端一般無多聚A尾巴，沒有修飾堿基；真核mRNA5端有帽子結(jié)構(gòu)、3端大多有多聚腺苷酸尾巴、分子中可能有修飾堿基，主要有甲基化、有編碼區(qū)和非編碼區(qū)。tRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及作用：作用：在蛋白質(zhì)合成過程轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸，參與蛋白質(zhì)的翻譯。一級(jí)結(jié)構(gòu)含有稀有堿基如DHU，3端為3個(gè)同樣的核苷酸序列（CCA）序列，此序列是tRNA結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)安基酸而生成氨酰tRNA所必需的。5端為G、具有TC；二級(jí)結(jié)構(gòu)為三葉草形，三級(jí)結(jié)構(gòu)為倒L形； C、rRNA即核蛋白體RNA：為細(xì)胞內(nèi)含量最豐富的RNA，約占細(xì)胞總RNA的80%以上,參與組成核蛋白體，作為蛋白質(zhì)生物

9、合成的場(chǎng)所。原核生物核糖體的沉降系數(shù)為70S，由50S和30S兩個(gè)大小亞基組成，30S小亞基含16SrRNA和21種蛋白質(zhì),50S大亞基含23S和5SrRNA以及34種蛋白質(zhì)；真核生物細(xì)胞核糖體的沉降系數(shù)為80S，由大小亞基組成，40S小亞基含18SrRNA及30多種蛋白質(zhì)，60S大亞基含3種rRNA(28S.5.8S.5S)以及大約45種蛋白質(zhì)。hnRNA即核內(nèi)不均-RNA，為真核生物轉(zhuǎn)錄生成的mRNA前體。SnRNA即小分子核內(nèi)RNA，不單獨(dú)存在，常與多種特異的蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，形成小分子核內(nèi)核蛋白顆粒，在mRNA的剪接中起重要作用。反義RNA，又稱調(diào)節(jié)RNA，主要封閉RNA。 3、參與蛋

10、白質(zhì)合成的氨基酸在特異的氨基酰tRNA合成酶催化下，與其相應(yīng)的tRNA結(jié)合成氨基酰tRNA。真核生物起始tRNA結(jié)合的氨基酸為蛋氨酸，結(jié)合形成Met-tRNAimet，翻譯起始時(shí)首先與40S核糖體小亞基結(jié)合形成復(fù)合物。原核生物的起始氨基酸為甲?；鞍彼幔Y(jié)合形成fMet-tRNAffmet。導(dǎo)致DNA變性的常用方法有熱變性、堿變性和化學(xué)試劑變性。DNA變性的結(jié)果：粘性降低，密度增加，A260紫外吸收值增加。 4、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能特點(diǎn) 蛋白質(zhì)又稱為“功能分子”，根據(jù)功能分為結(jié)構(gòu)蛋白、活性蛋白和信息蛋白。蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)是指蛋白質(zhì)多肽鏈中氨基酸排列的順序。蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，可以使蛋白質(zhì)的功

11、能發(fā)生改變，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致疾病的發(fā)生。因基因突變而導(dǎo)致的蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)改變后表現(xiàn)出生理功能的異常，使機(jī)體出現(xiàn)病態(tài)現(xiàn)象，稱為分子病。蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)單元（形式）有a-螺旋、-折疊、-轉(zhuǎn)角、無規(guī)則卷曲。一級(jí)結(jié)構(gòu)的化學(xué)鍵是肽鍵及二硫鍵；二級(jí)結(jié)構(gòu)主要化學(xué)鍵為氫鍵；三級(jí)結(jié)構(gòu)的主要靠疏水作用、離子鍵、氫鍵和范得華力等；四級(jí)結(jié)構(gòu)的結(jié)合力主要是疏水作用、氫鍵和離子鍵。 5、端粒的主要特點(diǎn)和功能：特點(diǎn)為：位于真核生物染色體末端、端粒酶催化端粒DNA延長、在決定細(xì)胞壽命中起重要作用、含短的高度重復(fù)序列。其主要功能有：保護(hù)線性DNA的完整復(fù)制、保護(hù)染色體末端、決定細(xì)胞的壽命。 6、DNA聚合酶（DNApol） 作用是

12、催化DNA合成，其活性需要Mg2+的存在。大腸桿菌DNA聚合酶有I-II、II3種（即原核生物DNA聚合酶）。DNApolI的功能有：a、聚合作用，使DNA鏈沿53方向延伸，b、35外切酶活性，即能從DNA鏈3端開始沿35進(jìn)行水解反應(yīng)，產(chǎn)生5單核苷酸，糾正復(fù)制過程中的錯(cuò)誤，保證DNA復(fù)制的正確性，因而具有校對(duì)功能；C、53外切酶活性，參與RNA生物的切除、填補(bǔ)岡崎片段間的空隙以及DNA損傷的修復(fù)。DNApolII：具有53DNA聚合酶活性及35外切核酸酶活性，可能參與DNA損傷的應(yīng)急狀態(tài)修復(fù)。DNApolII：亞基具有催化合成DNA的功能；亞基具有35外切酶活性及編輯和校對(duì)功能，則為裝配所必需

13、，是原核生物復(fù)制延長中真正起催化作用的酶。DNA聚合酶的共同性質(zhì)是：需要DNA模板；RNA或DNA作為引物；ATP與Mg2+的參與；以dNTP作底物；DNA合成的方向是53。反應(yīng)特點(diǎn)：新生鏈的延伸方向?yàn)?'3'；半保留方式合成子代DNA雙鏈；反應(yīng)需要DNA引物。共同具有的酶活性：5'3'聚合酶活性；3'5'核酸外切酶活性。 7、RNA聚合酶 RNA聚合酶也稱依賴DNA的RNA聚合酶，能以DNA為模板，四種核苷三磷酸為底物，按照堿基配對(duì)原則，從53方向延長RNA鏈。原核生物的RNA聚合酶只有一種，是由四種亞基2'組成的五聚體蛋白質(zhì)，稱為全酶

14、。去掉亞基后，剩下的2稱為核心酶。活細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄起始，需要全酶；而核心酶負(fù)責(zé)催化RNA鏈的延伸。 真核生物RNA聚合酶有三種，即RNA聚合酶I、II、III。RNA聚合酶I定位在核仁，主要轉(zhuǎn)錄5.8S、18S、28S-rRNA基因；酶II定位在核漿，主要轉(zhuǎn)錄編碼蛋白質(zhì)的基因，即主要轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生mRNA；酶III定位在核漿，主要轉(zhuǎn)錄tRNA和5S-rRNA基因。RNA聚合酶催化聚合反應(yīng)時(shí)需要有Mg2+或Mn2+的存在，無35外切酶海性，無校對(duì)功能。8、密碼子分為起始密碼和終止密碼，起始密碼為AUG，終止密碼為UAA、UAG和UGA，共有64種不同的密碼。可作為原核生物起始密碼的是：AUG.GUG.UU

15、G。9、遺傳密碼具有以下特點(diǎn)： A、連續(xù)性：兩個(gè)密碼子之間沒有任何核苷酸加以分隔，即密碼是無標(biāo)點(diǎn)的。B、方向性：mRNA中密碼子的排列是有方向性的，即起始密碼子總是位于編碼區(qū)5末端，而終止密碼子位于3末端。每個(gè)密碼子的三個(gè)核苷酸也是53方向閱讀，不能倒讀。C、簡(jiǎn)并性：是指遺傳密碼中除色氨酸和甲硫氨酸僅有一個(gè)密碼子外，其余氨基酸有26個(gè)密碼子為其編碼。D、通用性：從最簡(jiǎn)單的病毒、原核生物、直至人類，都使用同一套遺傳密碼。E、擺動(dòng)性：翻譯過程中，氨基酸的正確加入，要靠mRNA上的密碼子與tRNA上的反密碼子相辯認(rèn)。密碼子與反密碼子配對(duì)辯認(rèn)時(shí)，有時(shí)不完全遵守堿基互補(bǔ)規(guī)律，即使不嚴(yán)格互補(bǔ)也能辯認(rèn)配對(duì)，

16、這種現(xiàn)象稱為擺動(dòng)。10、轉(zhuǎn)錄的過程及特點(diǎn) 轉(zhuǎn)錄是以DNA為模板，以4種NTP為原料，依堿基配對(duì)規(guī)律，在DNA指導(dǎo)的RNA聚合酶催化下合成RNA的過程，其過程包括：起始、延長和終止三個(gè)階段。轉(zhuǎn)錄的特點(diǎn)：A、對(duì)于一個(gè)基因組來說，轉(zhuǎn)錄只發(fā)生在一部分基因，而且每個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄都受到相對(duì)獨(dú)立的控制。B、轉(zhuǎn)錄是不對(duì)稱的。C、轉(zhuǎn)錄時(shí)不需要引物，而且RNA鏈的合成是連續(xù)的。D、轉(zhuǎn)錄的單向性，即RNA生物合成時(shí)，只能向一個(gè)方向進(jìn)行聚合，所依賴的模板DNA鏈的方向?yàn)?5，而RNA鏈的合成方向?yàn)?3。E、有特定的起始和終止位點(diǎn)。參與轉(zhuǎn)錄終止的因素為因子或轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的3'端發(fā)夾結(jié)構(gòu),轉(zhuǎn)錄終止的修飾點(diǎn):AATAAA

17、+GT序列。11、原核生物DNA復(fù)制的過程及特點(diǎn) 復(fù)制過程包括：起始（復(fù)制起始位點(diǎn)識(shí)別、解螺旋酶解開DNA雙鏈，引發(fā)體合成RNA引物）延伸（DNA聚合酶催化聚合反應(yīng)，連續(xù)合成前導(dǎo)鏈，不連續(xù)合成隨從鏈）。終止（RNA引物去除、岡崎片段連接、在特殊的終止結(jié)構(gòu)區(qū)域停止）。復(fù)制的共同特點(diǎn)為：半保留復(fù)制和半不連續(xù)復(fù)制、聚合反應(yīng)都需要模板、底物、DNA聚合酶及其它酶和蛋白質(zhì)。 12、真核生物染色體DNA復(fù)制的特點(diǎn)：（原核相反） 復(fù)制起始點(diǎn)為多個(gè)；復(fù)制叉移動(dòng)速度慢；復(fù)制方向大多數(shù)為雙向；RNA引物短；岡崎片段短，不可連續(xù)復(fù)制 13、翻譯的主要過程及特點(diǎn) 起始：形成翻譯起始復(fù)合物延長：指每加一個(gè)氨基酸經(jīng)過進(jìn)位

18、、成肽和轉(zhuǎn)位，使肽鏈從N端向C端延長。終止（當(dāng)mRNA分子中的終止密碼子出現(xiàn)后，多肽鏈合成停止，肽鏈從肽酰-tRNA中釋出，mRNA、核蛋白體等分離）。蛋白制合成是一個(gè)耗能過程，每生成一個(gè)肽鍵，要消耗2個(gè)高能磷酸鍵，氨基酸活化要消耗2個(gè)高能磷酸鍵，整個(gè)過程可能多于4個(gè)高能磷酸鍵。14、原核生物mRNA的加工：轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA分子不需加工。tRNA結(jié)構(gòu)基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物需要加工，才能成為具有生物功能的成熟分子。tRNA前體的加工包括剪切作用（切除多余核苷酸）、添加和修復(fù)3'端CCA序列，某些堿基的化學(xué)修飾（成熟tRNA分子中有稀有堿基）。 15、翻譯后的加工修飾： 加工包括：A、去掉N-

19、甲?；-蛋氨酸或N端序列。B、個(gè)別氨基酸的修飾（羥化、磷酸化形成-S-S-等）。C、多蛋白水解修飾，D、分子伴侶，蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶，肽-脯氨酰順反異構(gòu)酶輔助折疊成空間構(gòu)象。E、亞基聚合，F(xiàn)、輔基的結(jié)合（糖基化等）。其中A、B、C屬一級(jí)結(jié)構(gòu)修飾，D、E、F屬空間結(jié)構(gòu)修飾。多肽鏈形成后，氨基酸殘基可進(jìn)行多種共價(jià)修飾，包括；磷酸化，羥基化，ADP-核糖基化，形成胱氨酸及乙酰化。翻譯過程涉及多種分子之間的相互作用，可以歸納為：RNA-蛋白質(zhì)相互作用，蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用及RNA-RNA相互作用。參與翻譯終止的蛋白質(zhì)因子包括：RF、PR、IF。廣義的核蛋白體循環(huán)包括：翻譯起始，進(jìn)位，成肽，轉(zhuǎn)位和

20、翻譯終止。 16、真核生物mRNA的加工包括： 5端加帽（由加帽酶催化5端加入7-甲苷烏苷酸，形成帽子結(jié)構(gòu)m7GpppmNP-）。 3端加入Poly(A)尾（A、組蛋白的成熟mRNA無需加polyA尾；B、加尾信號(hào)包括AAUAAA和富含GU的序列；C、加尾不需模板；D剪切過程需要多種蛋白質(zhì)因子的輔助）。mRNA前體的剪接（剪接加工以除去內(nèi)含子序列，并將外顯子序列連接成為成熟的有功能的mRNA分子。內(nèi)含子兩端的結(jié)構(gòu)通常是5-GUAG-3。選擇性剪接的作用機(jī)制包括；A使用不同的剪接位點(diǎn)，B選擇使用外顯子，C、反式剪接，D、使用不同的啟動(dòng)子，E、使用不同的多腺苷酸化位點(diǎn)）。RNA的編輯（發(fā)生于轉(zhuǎn)錄后

21、水平，改編mRNA序列，CU或AG，增加遺傳信息容量）。 17、基因表達(dá)是指生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系列過程，合成特定的蛋白質(zhì)，進(jìn)而發(fā)揮特定的生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)的全過程。但并非所有基因表達(dá)過程都產(chǎn)生蛋白質(zhì)，tRNA、rRNA編碼基因轉(zhuǎn)錄生成RNA的過程也屬于基因表達(dá)?；虮磉_(dá)受到多級(jí)水平的調(diào)控，具有階段特異性（時(shí)間特異性）和組織特異性（空間特異性）?；虮磉_(dá)分為幾個(gè)階段：基因活化、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯、翻譯后加工等、產(chǎn)物是RNA和有功能的蛋白質(zhì)。 18、原核生物基因表達(dá)調(diào)控的環(huán)節(jié)，主要在轉(zhuǎn)錄水平，其次是翻譯水平。原核生物基因多以操縱子的形式存在，轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)

22、控涉及到啟動(dòng)子、因子（能與RNA聚合酶結(jié)合）、阻遏蛋白(負(fù)調(diào)控)、正調(diào)控蛋白、倒位蛋白、RNA聚合酶抑制物、衰減子等多種因素。而翻譯水平的調(diào)控涉及到SD序列（位于AUG前）、mRNA的穩(wěn)定性（不穩(wěn)定，其5端和3端的發(fā)夾結(jié)構(gòu)可保護(hù)其不被酶水解，mRNA的5端與核糖體結(jié)合，可明顯提高其穩(wěn)定性）、翻譯產(chǎn)物及小分子RNA的調(diào)控作用。 19、真核生物基因表達(dá)的調(diào)控環(huán)節(jié)較多，在DNA水平可通過染色體丟失，基因擴(kuò)增、基因重排、DNA甲基化以及染色體結(jié)構(gòu)改變影響基因表達(dá)，在轉(zhuǎn)錄水平則主要通過反式作用因子的作用調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子與TATA盒的結(jié)合、RNA聚合酶與轉(zhuǎn)錄因子-DNA復(fù)合物的結(jié)合及轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成；在轉(zhuǎn)

23、錄后水平主要通過RNA修飾、剪接及mRNA運(yùn)輸?shù)目刂苼碛绊懟虮磉_(dá)；影響翻譯水平的因素有影響起始翻譯的阻遏蛋白、5AUG、5端非編碼區(qū)的長度、mRNA的穩(wěn)定性調(diào)節(jié)及小分子RNA等。真核基因調(diào)控中最重要的環(huán)節(jié)是基因轉(zhuǎn)錄，真核生物基因表達(dá)需要轉(zhuǎn)錄因子、啟動(dòng)子、沉默子和增強(qiáng)子。 20、反式作用因子：指能直接或間接辨認(rèn)和結(jié)合轉(zhuǎn)錄上游區(qū)段DNA的蛋白質(zhì)，其主要特點(diǎn)包括三個(gè)功能結(jié)構(gòu)域（DNA識(shí)別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域、結(jié)合其它蛋白的結(jié)合域）、能識(shí)別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)的順式作用元件、對(duì)基因表達(dá)有正性和負(fù)性調(diào)控作用。其活性調(diào)節(jié)方式：表達(dá)式調(diào)節(jié)，共價(jià)修飾，配體結(jié)合及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。作用方式:成環(huán)、扭曲、滑動(dòng)、

24、Oozing。DNA結(jié)構(gòu)域包括：鋅指、螺旋轉(zhuǎn)角螺旋、亮氨酸拉鏈和螺旋環(huán)螺旋。轉(zhuǎn)錄激活域富含：酸性氨基酸、脯氨酸和谷氨酰胺。 21、參與DNA復(fù)制（合成）的物質(zhì)包括：模板（解開成單鏈的DNA母鏈）。引物（提供3OH未端使dNTP可以依次聚合）。底物（dATP，dGTP，dCTP和dTTP）。聚合酶（依賴DNA的DNA聚合酶（DNApol）。其它的酶和蛋白質(zhì)因子。DNA復(fù)制的基本過程包括：DNA雙鏈解開，RNA引物的合成，DNA鏈的延長，切除引物，填補(bǔ)缺口，連接相鄰DNA片段，切除和修復(fù)錯(cuò)配堿基。22、結(jié)構(gòu)基因突變的類型包括點(diǎn)突變、缺失、插入和倒位四類，遺傳密碼的改變分為錯(cuò)義突變、無義突變、同義突

25、變和移碼突變。23、癌基因惡性激活的機(jī)制包括：原癌基因點(diǎn)突變，原癌基因獲得外源啟動(dòng)子而激活，原癌基因因甲基化程度降低而激活，基因易位或重排使原癌基因激活。24、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是基因治療中最常用的載體。造血肝細(xì)胞是基因治療中最重要的靶細(xì)胞，禁用生殖細(xì)胞?；蜣D(zhuǎn)移技術(shù)(基因治療技術(shù))包括生物學(xué)方法和非生物學(xué)方法:生物學(xué)方法有:逆轉(zhuǎn)錄病毒載體.腺病毒載體.腺相關(guān)病毒載體.單純皰疹病毒載體;非生物學(xué)方法有：脂質(zhì)體、直接注射、受體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移技術(shù)、DNA磷酸鈣沉淀法、電穿孔法、顯微注射、顆粒轟擊。25、DNA甲基化的一個(gè)特點(diǎn)是它們經(jīng)過細(xì)胞許多代分裂之后仍保持穩(wěn)定。在真核生物DNA中，幾乎所有甲基化均發(fā)生

26、于二核苷酸序列5mCG3上。26、一個(gè)基因所包括的序列有：編碼蛋白質(zhì)肽鏈或RNA的核酸序列、保證轉(zhuǎn)錄所必需的調(diào)控序列、位于編碼區(qū)5端上游的非編碼序列、內(nèi)含子、位于編碼區(qū)3'端下游的非編碼序列。27、啟動(dòng)子是RNA聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列,啟動(dòng)子具有方向性，真核生物的啟動(dòng)子必須與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合后，才能被DNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合，真核生物的啟動(dòng)子元件是TATA蓋,TATA盒的核心序列是TATA(A/T)A(A/T)，位于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游25bp處,啟動(dòng)子決定轉(zhuǎn)錄方向.模板鏈及轉(zhuǎn)錄效率。上游啟動(dòng)子元件包括：CAAT盒，CACA盒和GC盒。28、逆轉(zhuǎn)錄：是指以RNA為模板，利用宿主細(xì)胞中4

27、種dNTP為原料，在引物的3'端以5'3'方向合成與RNA互補(bǔ)的DNA鏈的過程，此過程與中心法則方向相反，故稱為逆轉(zhuǎn)錄。 29、原癌基因產(chǎn)物的類型及細(xì)胞定位 生長因子及其類似物，由細(xì)胞分泌，如C-sis家族 （sis編碼血小板源生長因子，表達(dá)產(chǎn)物與PDGF鏈結(jié)構(gòu)同源）?？缒どL因子受體型的酪氨酸蛋白激酶，如erb-B,表皮細(xì)胞生長因子（EGF）受體；fims,巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體；定位于質(zhì)膜。細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)分子，定位于胞夜,包括A、低分子量G蛋白，如H-ras等基因表達(dá)產(chǎn)物；B、胞內(nèi)蛋白激酶（包括與膜結(jié)合的蛋白酪氨酸激酶和胞漿絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶），如src、ab

28、l。核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子：如myc、fos等，定位于細(xì)胞核內(nèi)。胞漿調(diào)節(jié)蛋白，如crk的產(chǎn)物是存在于胞漿中的調(diào)節(jié)蛋白，定位于胞漿?？扇苄缘鞍桌野彼峒っ甘荏w和非蛋白激酶受。 30、細(xì)胞周期的主要調(diào)控點(diǎn) 細(xì)胞周期的運(yùn)行受多種因素所調(diào)控，有2個(gè)主要調(diào)控點(diǎn)，亦稱為檢測(cè)點(diǎn)。 G1/S期檢測(cè)點(diǎn)：在酵母中稱起點(diǎn)，在哺乳細(xì)胞中稱限制點(diǎn),是控制細(xì)胞進(jìn)入S期檢測(cè)點(diǎn)（G1期檢測(cè)點(diǎn)）,cyclinB與CDK4和CDK6結(jié)合，cyclinE與CDK2，CDK3結(jié)合，通過磷酸化使它們活化。cyclin-CDK復(fù)合物可使Rb蛋白磷酸化，從而釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F，促進(jìn)DNA復(fù)制相關(guān)基因的表達(dá)。CDK2也可和cyclinA、cyclinA

29、1結(jié)合，促進(jìn)早S期DNA合成的起始。 G2/M期檢測(cè)點(diǎn)：是控制細(xì)胞進(jìn)入M期檢測(cè)點(diǎn)（G2期檢測(cè)點(diǎn)），促有絲分裂因子（MPF）由cyclinB和CDK1組成，是啟動(dòng)有絲分裂的關(guān)鍵因子。細(xì)胞何時(shí)進(jìn)入M期取決于Cdc2的磷酸化狀態(tài)。 31、真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染的基本方法： 磷酸鈣沉淀法。電穿孔法。脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因?qū)敕?。DEAE-葡聚糖法。顯微注射法。 32、DNA損傷的主要類型 堿基和糖基破壞錯(cuò)配DNA鏈斷裂：電離輻射致DNA損傷的主要形式DNA變聯(lián)。上述DNA損傷可導(dǎo)致DNA模板發(fā)生堿基的置換、插入、缺失、鏈的斷裂，并可影響到染色體的高級(jí)結(jié)構(gòu)。DNA鏈中一種嘌呤被另一種嘌呤取代，或嘧啶被另一種嘧啶所取代，

30、稱為轉(zhuǎn)換；嘌呤被嘧呤取代，或反之，稱為顛換；轉(zhuǎn)換和顛換在DNA復(fù)制時(shí)可引起堿基錯(cuò)配，導(dǎo)致基因突變；堿基的插入和缺失可引起移碼突變。 33、DNA修復(fù)機(jī)制的主要類型 光修復(fù)；切除修復(fù)；重組修復(fù)；SOS修復(fù)；錯(cuò)配修復(fù)。 34、基因文庫篩選的主要方法及原理(1)根據(jù)抗藥性標(biāo)志篩選：對(duì)于帶有某種抗藥性標(biāo)志基因，只有轉(zhuǎn)化成功的受體菌才可能在含該抗生素的培養(yǎng)基中生存并形成菌落；而沒有轉(zhuǎn)化成功的受體菌，不能在培養(yǎng)基中生長，以此可選擇陽性菌。(2)根據(jù)菌落的呈色反應(yīng)篩選（互補(bǔ)、藍(lán)-白篩選）：根椐菌落的顏色并結(jié)合插入片段的序列測(cè)定篩選。(3)營養(yǎng)缺陷型標(biāo)記法:(4)核酸分子雜交法：即采用與目的基因部分互補(bǔ)的DN

31、A片段作為探針，與含有重組體的細(xì)菌菌落進(jìn)行雜交，以確定重組體中帶目的基因。包括原位雜交和southern印跡雜交。（5）遺傳互補(bǔ)法：載體上的營養(yǎng)代謝標(biāo)記可以對(duì)宿主細(xì)胞的營養(yǎng)代謝缺陷進(jìn)行互補(bǔ)，以此作為篩選重組體的標(biāo)記。（6）免疫學(xué)方法：如果克隆基因的產(chǎn)物是已知的，并且在菌落或噬菌斑中表達(dá)，因而可以用相應(yīng)的抗血清或單克隆抗體，通過放射免疫、化學(xué)發(fā)光或顯色反應(yīng)進(jìn)行篩選。 35、PCR的主要步驟及引物設(shè)計(jì)的基本要求 PCR的主要步驟：PCR又稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是在體外進(jìn)行的DNA復(fù)制反應(yīng)過程。其基本過程包括：A、雙鏈DNA模板加熱變性成單鏈(變性),溫度95度左右。B、在低溫下引物與單鏈DNA互補(bǔ)配對(duì)

32、(退火),85-90度。C、延伸：在四種DNTP底物及Mg2+存在條件下，TaqDNA聚合酶在最適作用溫度（7075）下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，從特異結(jié)合到DNA模板上的引物3-OH端開始摻入單核苷酸，合成新的DNA分子。引物設(shè)計(jì)的基本要求：A、引物長度一般為1530個(gè)核苷酸。B、引物中的堿基組成盡可能隨機(jī)分布，避免出現(xiàn)嘌呤、嘧啶堿基堆積現(xiàn)象，尤其在3端避免連續(xù)3個(gè)G或C。C、引物自身不應(yīng)存在互補(bǔ)序列以避免折疊成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，引物自身存在的連續(xù)互補(bǔ)序列，一般不超過3bp。D、兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其應(yīng)避免3端的互補(bǔ)重疊。E、引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過70%，引物3末端連續(xù)8

33、個(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有完全互補(bǔ)序列。F、引物與模板結(jié)合時(shí)，引物的5端可以修飾。 36、乳糖操縱子的正、負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制乳糖操縱子包含3個(gè)結(jié)構(gòu)基因Z.Y.A（編碼-半乳糖苷酶，-半乳糖苷通透酶和轉(zhuǎn)乙酰基酶）、3個(gè)調(diào)控元件（啟動(dòng)子、操縱基因和CAP結(jié)合位點(diǎn)）和1個(gè)調(diào)節(jié)基因（編碼阻遏蛋白）。乳糖操縱子的轉(zhuǎn)錄起始是由CAP和阻遏蛋白兩種調(diào)控因子來調(diào)控的。（1）阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控：無乳糖時(shí)，阻遏蛋白結(jié)合操縱基因，妨礙RNA聚合酶結(jié)合啟動(dòng)子，從而抑制結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄。有乳糖時(shí)，生成半乳糖（誘導(dǎo)劑）結(jié)合阻遏蛋白，使阻遏蛋白構(gòu)象改變，變構(gòu)的阻遏蛋白不能與操縱序列結(jié)合，阻遏機(jī)制解除，結(jié)構(gòu)基因可以轉(zhuǎn)錄，基因得以表達(dá)。cA

34、MP-CAP復(fù)合物的正調(diào)控:無葡萄糖時(shí)，cAMP濃度高，形成的cAMP-CAP復(fù)合物結(jié)合于CAP結(jié)合位點(diǎn)，增強(qiáng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)下游基因得以表達(dá)；有葡萄糖時(shí)，cAMP濃度低，cAMP-CAP復(fù)合物形成受阻，影響轉(zhuǎn)錄活性。正、負(fù)調(diào)控機(jī)制相輔相成：cAMP-CAP復(fù)合物是轉(zhuǎn)錄必需的，同時(shí)阻遏蛋白進(jìn)一步控制轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)。綜上，乳糖操縱子最強(qiáng)的表達(dá)條件是有乳糖而無葡萄糖。37、雙脫氧末端終止法DNA測(cè)序的主要步驟：雙脫氧末端終止法是以單鏈或雙鏈DNA為模板，采用DNA引物引導(dǎo)新生DNA的合成，又稱為引物合成法，或酶促引物合成法。其主要步驟為：制備單鏈模板。模板與測(cè)序引物結(jié)合。摻入法標(biāo)記反應(yīng)。延伸-終止反

35、應(yīng)。 變性膠電泳。放射自顯影。閱讀測(cè)序結(jié)果。 38、常用的分子生物學(xué)技術(shù)的原理、過程及特點(diǎn) 核酸分子雜交技術(shù)：基本原理是：具有互補(bǔ)序列的兩條單鏈核酸分子在一定條件下堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，重新形成雙鏈；在這一過程中，核酸分子經(jīng)歷了變性和復(fù)性的變化，以及復(fù)性過程中各分子間鍵的形成和斷裂等。特點(diǎn)：直接檢測(cè)血清中病毒基因組，無須擴(kuò)增，靈敏度較PCR低。在雜交體系中已知的核酸序列稱作探針。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：PCR的原理是根據(jù)待測(cè)DNA片段兩端的核苷酸序列，設(shè)計(jì)并人工合成兩個(gè)分別與DNA片段兩端互補(bǔ)的寡聚核苷酸引物，在有過量的引物、過量的底物（4種dNTP）、DNA聚合酶以及模板（待擴(kuò)增片段的DNA分子

36、）的反應(yīng)體系中，經(jīng)過高溫變性（使DNA鏈解開）、低溫退火（使引物與模板結(jié)合）和適溫延伸（新合成的DNA片段）三個(gè)階段的循環(huán)周期，對(duì)DNA分子進(jìn)行擴(kuò)增。特點(diǎn):極強(qiáng)的擴(kuò)增能力,度高靈敏性,高度特異性，只需微量模板,只需數(shù)小時(shí),擴(kuò)增產(chǎn)物量大,變性.復(fù)性.延伸三個(gè)步聚循環(huán)進(jìn)行,操作簡(jiǎn)便，適用廣泛，但可出現(xiàn)假陽性. DNA序列測(cè)定：DNA序列測(cè)定是在高分辨率變性聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的，包括Sanger雙脫氧鏈末端終止法和化學(xué)降解法。Sanger法的基本原理是：雙脫氧核苷酸（ddNTP）在DNA合成過程中代替相應(yīng)的脫氧核苷酸（dNTP）作為底物，不能形成3，5-磷酸二酯鍵而導(dǎo)致鏈延伸終止

37、?；瘜W(xué)降解法：是采用化學(xué)試劑處理末端放射性標(biāo)記的DNA單鏈片段，造成堿基特異性切割，由此產(chǎn)生一組具有不同長度的DNA鏈的反應(yīng)混合物，經(jīng)凝膠電泳按分子大小分離和放射自顯影，直接讀出待測(cè)DNA的核苷酸順序。 DNA芯片技術(shù)：DNA芯片技術(shù)是一種大規(guī)模集成的固相核酸分子雜交，以大量已知堿基序列的寡核苷酸片段為探針，檢測(cè)樣品中哪些核酸序列與其互補(bǔ)，然后通過定性、定量分析得出待測(cè)樣品的基因序列及表達(dá)的信息。DNA芯片的主要技術(shù)流程包括：芯片的設(shè)計(jì)與制備、靶基因的標(biāo)記（常用熒光色素.生物素或放射性核素標(biāo)記dNTP）、芯片雜交與雜交信號(hào)檢測(cè)。特點(diǎn)：高通量.鑒別診斷。酶：DNA聚合酶。所需探針：合成的寡核苷酸

38、片段，cDNA，已克隆的基因片段，雙鏈或單鏈DNA或RNA，肽核酸。 基因克隆技術(shù)（重組DNA技術(shù)）：基因克隆是指某種目的基因的擴(kuò)增與分離過程，具體是從基因組或DNA大片段中分離并獲得某一特定的基因或DNA片段，再通過DNA序列擴(kuò)增形成由眾多拷貝組成的DNA拷貝群體的過程。其基本過程為：A-目的基因的制備；栽體的選擇與制備；B-DNA分子的體外連接；C-將外源DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞；D-目的基因的篩選與鑒定；E-DNA重組體的擴(kuò)增與表達(dá) 39、原核生物與真核生物轉(zhuǎn)錄調(diào)控的特點(diǎn)比較： 兩者均涉及RNA聚合酶和轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列（啟動(dòng)子等）的相互作用。真核需要多種轉(zhuǎn)錄因子輔助、原核不需要。真核以正調(diào)控為主，

39、原核以負(fù)調(diào)控為主。真核3種RNA聚合酶負(fù)責(zé)不同種類基因的轉(zhuǎn)錄，原核只有1種RNA聚合酶。40、原核生物和真核生基因表達(dá)調(diào)控特點(diǎn)的比較。相同點(diǎn)：轉(zhuǎn)錄起始是基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)不同點(diǎn)：A、原核基因表達(dá)調(diào)控主要包括轉(zhuǎn)錄和翻譯水平；真核基因表達(dá)調(diào)控主要包括染色質(zhì)活化、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯、翻譯后加工多個(gè)層次。B、原核基因表達(dá)調(diào)控主要為負(fù)調(diào)節(jié)，真核主要為正調(diào)節(jié)。C、原核轉(zhuǎn)錄起始不需要轉(zhuǎn)錄因子，RNA聚合酶直接結(jié)合啟動(dòng)子，由因子決定基因表達(dá)的特異性；真核轉(zhuǎn)錄起始需要基礎(chǔ)、特異兩類轉(zhuǎn)錄因子，依賴DNA-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，調(diào)控轉(zhuǎn)錄激活。D、原核基因表達(dá)調(diào)控主要采用操縱子模型，轉(zhuǎn)錄出多順反子R

40、NA，實(shí)現(xiàn)協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)；真核基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子RNA，功能相關(guān)蛋白質(zhì)的協(xié)調(diào)表達(dá)機(jī)制更為復(fù)雜。41、質(zhì)粒的特征：原核細(xì)胞中染色體外的共價(jià)閉合的環(huán)狀DNA分子。能獨(dú)立于細(xì)胞的染色體而進(jìn)行復(fù)制，并依賴于宿主細(xì)胞。在同一宿主中具有不相容性，即具有相同復(fù)制起始位點(diǎn)和分配區(qū)的兩種質(zhì)粒不能共存于一個(gè)宿主菌。具有嚴(yán)格的遺傳控制系統(tǒng)（復(fù)制調(diào)控系統(tǒng)，分配系統(tǒng)，細(xì)胞分裂控制系統(tǒng) ，位點(diǎn)特異重組系統(tǒng)）。其所攜帶的遺傳信息能賦予宿主細(xì)胞特定的遺傳性狀。是DNA重組技術(shù)中所使用的主要載體。作為克隆載體的質(zhì)粒具有的特點(diǎn)：分子量較小，能在細(xì)菌內(nèi)穩(wěn)定存在，有較高的拷貝數(shù)；具有一個(gè)以上的遺傳標(biāo)志；具有多個(gè)限制酶的單一切點(diǎn)，稱為多

41、克隆位點(diǎn)，便于外源基因的插入。42、真核生物基因組結(jié)構(gòu)與功能的特點(diǎn)。每一種真核生物都有一定的染色體數(shù)目， 體細(xì)胞一般為雙倍體。真核基因組遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于原核生物的基因組，具有許多復(fù)制起點(diǎn)。真核基因組由一個(gè)結(jié)構(gòu)基因與相關(guān)的調(diào)控區(qū)組成，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子，即一分子mRNA只能翻譯一種蛋白質(zhì)。真核生物分子含有大量重復(fù)順序。真核生物基因組內(nèi)非編碼的順序占90%以上。真核基因是斷裂基因。功能相關(guān)的基因構(gòu)成各種基因家族。真核生物基因組中也存在一些可移動(dòng)的遺傳因素。 43、蛋白質(zhì)生物合成后的靶向輸送過程及特點(diǎn)： 蛋白質(zhì)合成后，定向地被輸送到最終發(fā)揮生物學(xué)功能的部位稱為靶向輸送。靶向輸送的蛋白質(zhì)的N端往往有一些特異的

42、氨基酸序列，稱為信號(hào)序列，是決定蛋白質(zhì)靶向輸送特性的重要元件，通過信號(hào)序列引導(dǎo)蛋白質(zhì)從胞漿進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng).線粒體.葉綠體和核內(nèi)，靶向不同的蛋白質(zhì)各有特異的信號(hào)序列。分泌型蛋白合成后進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，經(jīng)加工，包裝成分泌小泡，再轉(zhuǎn)移.融合到靶部位或分泌出細(xì)胞，其靶向輸送主要靠信號(hào)肽與胞漿中的信號(hào)肽識(shí)別粒子（SRP）識(shí)別并特異結(jié)合，然后再通過SRP與膜上的對(duì)接蛋白（DP）識(shí)別并結(jié)合后，將所攜帶的蛋白質(zhì)送出細(xì)胞；線粒體蛋白的靶向輸送靠導(dǎo)肽與多種蛋白復(fù)合體介導(dǎo)進(jìn)入基質(zhì)和膜間腔，然后自發(fā)的或在分子伴侶HSP70幫助下折疊形成有功能的蛋白質(zhì)；而細(xì)胞核蛋白的靶向輸送則通過核定位信號(hào)與核輸入受體結(jié)合形成核蛋白-受體復(fù)合物，被導(dǎo)出核孔，再與核孔復(fù)合體結(jié)合后進(jìn)入細(xì)胞核。 44、核酸分子雜交的基本方法包括：Southern印跡雜交（鑒別DNA靶分子的雜交、待測(cè)核酸是DNA片段）、Northern印跡雜交（鑒別RNA靶分子、待測(cè)核酸是RNA）、斑點(diǎn)雜交、原位雜交和液相雜交。 45、DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)