實驗報告-不同因素對酶的影響

1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上專業(yè)： 姓名： 學號： 日期： 地點： 裝 訂 線 實驗報告生物化學實驗（甲）酶的基本性質實驗底物專一性劑、激活劑和抑制、最適溫度 課程名稱： 指導老師： 成績： 實驗名稱： 實驗類型： 分離鑒定實驗 同組學生姓名： 一、實驗目的和要求（必填）二、實驗內容和原理（必填）三、主要儀器設備（必填）四、操作方法和實驗步驟五、實驗數(shù)據(jù)記錄和處理六、實驗結果與分析（必填）七、討論、心得.酶的基本性質底物專一性一、實驗目的和要求1. 了解酶的專一性。2. 掌握驗證酶的專一性的基本原理及方法。3. 學會排除干擾因素，設計酶學實驗。二、實驗基本原理酶是一種具有催化功能的蛋白質。酶蛋白

2、結構決定了酶的功能酶的高效性，酶催化的反應（酶促反應）要比相應的沒有催化劑的反應快103-1017 倍。 酶催化作用的一個重要特點是具有高度的底物專一性，即一種酶只能對某一種底物或一類底物起催化作用，對其他底物無催化反應。根據(jù)各種酶對底物的選擇程度不同，它們的專一性可以分為下列幾種：1.相對專一性 一種酶能夠催化一類具有相同化學鍵或基團的物質進行某種類型的反應。2.絕對專一性： 有些酶對底物的要求非常嚴格只作用于一種底物，而不作用于任何其他物質。如脲酶只能催化尿素進行水解而生成二氧化碳和氨。如麥芽糖酶只作用于麥芽糖而不作用其它雙糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纖維素。3.立體異構專一性 有些

3、酶只有作用于底物的立體異構物中的一種，而對另一種則全無作用。如酵母中的糖酶類只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。 本實驗以唾液淀粉酶、蔗糖酶對淀粉、蔗糖水解反應的催化作用來觀察酶的專一性。采用Benedict試劑檢測反應產物。Benedict試劑是堿性硫酸銅溶液，具有一定的氧化能力，能與還原性糖的半縮醛羥基發(fā)生氧化還原反應，生成磚紅色氧化亞銅沉淀。 Na2CO3+ 2H2O 2NaOH + H2CO3 CuSO4+ 2NaOH Cu(OH)2+ Na2SO4 還原糖(CHO or C=O)+ 2Cu(OH)2 Cu2O (磚紅色或黃色) + 2H2O + 糖的氧化產物在分子結構上，淀粉幾乎

4、沒有，而蔗糖、棉子糖全無半縮醛基，它們均無還原性，因此它們與Benedict試劑無呈色反應。 淀粉被淀粉酶水解，產物為葡萄糖；蔗糖和棉子糖被蔗糖酶水解，其產物為果糖和葡萄糖，它們都為具有自由半縮醛羥基的還原糖，與Benedict試劑共熱，即產生紅棕色Cu2O沉淀。本實驗以此顏色反應觀察淀粉酶、蔗糖酶對淀粉和蔗糖的水解作用。三、實驗材料與試劑1、實驗材料 蔗糖酶(樣品）； 新鮮唾液（含唾液淀粉酶）；2、實驗試劑 蔗糖酶液 蔗糖酶液(樣品）加蒸餾水適當稀釋，備用； 唾液淀粉酶液（學生自制） 取0.5mL唾液至25ml量筒中，用蒸餾水（稀釋）到25ml，用棉花過濾備用。唾液稀倍數(shù)因人而異，可稀釋50

5、400倍，甚至更高； 5%蔗糖（A.R.）溶液； 0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）； Benedict試劑 ；四、實驗器材與儀器1.漏斗， 2.脫脂棉花； 3.恒溫水?。?7，100）； 4.量筒；5.試管；6.燒杯；7.吸量管。 五、實驗操作方法和步驟 檢查試劑 取3支試管，按下表操作：注：1、檢查目的：試劑是否有干擾因素存在。2、也可對蔗糖酶液、唾液淀粉酶液進行檢查是否也有干擾因素存在，請自己設計。淀粉酶的專一性取三支試管，按下表操作：注：可增加一組唾液淀粉酶液 經100加熱3min處理后的樣品對照組。蔗糖酶的專一性取三支試管，按下表操作：注：可增加一組蔗糖酶液 經100加熱3min

6、處理后的樣品對照組。六、結果分析討論各試管觀察結果依次是：（一）：1號藍綠色，2號藍色， 3號藍色Benedict試劑是堿性硫酸銅溶液，具有一定的氧化能力，能與還原性糖的半縮醛羥基發(fā)生氧化還原反應，生成磚紅色氧化亞銅沉淀。3只試管都為藍色說明幾只試管中都沒有果糖和葡萄糖，說明在不加酶時，淀粉和蔗糖不易水解。試劑無干擾因素的存在。（1號試管是藍綠色可能是因為有少部分的淀粉水解）（二）：1號土黃色，2號黃綠色，3號藍色加入唾液淀粉酶，1號試管底物是淀粉，所以很容易水解成葡萄糖，與Benedict試劑共熱，即產生紅棕色Cu2O沉淀。所以1號顏色變化比較大。（2號可能是因為蔗糖在37恒溫水浴中也有少部

7、分水解，所以顏色變化，但變化不明顯。）總的來看可以看出唾液淀粉酶只對淀粉有催化活性，不能催化蔗糖水解，具有對淀粉的底物專一性。3號是對照。（三）：1號藍色， 2號紅棕色，3號藍色加入蔗糖酶，2號試管底物是蔗糖，所以很容易水解成果糖和葡萄糖，與Benedict試劑共熱，即產生紅棕色Cu2O沉淀。所以2號顏色變化比較大。（1號可能是因為淀粉在37恒溫水浴中也有部分水解，所以有顏色變化，但變化不明顯。）從這三支試管看出蔗糖酶只對蔗糖的水解 有催化作用，對淀粉無催化作用，具有對蔗糖的底物專一性。3號是對照。七、思考題1觀察酶專一性實驗為什么要設計這3組實驗？每組各有何意義？蒸餾水有何用？第一組作為整個

8、實驗的空白對照組，檢測 Benedict 試劑對實驗結果的顏色有何影響，排除干擾因素的存在。第二組作為檢測淀粉酶的專一性實驗組，第三組作為檢測蔗糖酶的專一性的實驗組。蒸 餾水作為每一個組中的空白對照，與組內其余兩組進行對照。2將酶液煮沸10min后，重做二、三的操作，觀察有何結果？各試管都為藍色，因為酶在煮沸過程中 已經變性，失去催化活性，故不能催化各自對應底物的水解反應。3在此實驗中，為什么要用0.5%淀粉(0.3%NaCl)溶液？0.3%NaCl的作用是什么？0.3%NaCl 中的Cl- 是作為激活劑激活唾液淀粉酶的活性，使實驗結果不至于因為唾液淀 粉酶的活性不足而導致不同。八、注意事項1

9、.試管要干凈，所有試劑加量準確，加好試劑后要搖勻。2.使用試劑時不要人為造成試劑間的互相污染；試劑用好瓶蓋要立即蓋好，防止試劑間的互相污染。以免實驗結果的錯誤。. 影響酶活性的因素激活劑和抑制劑一、實驗目的和要求1. 了解激活劑和抑制劑對酶促反應速度的影響。2. 學習檢定激活劑和抑制劑影響酶促反應速度的原理和方法。二、實驗基本原理在酶促反應過程中，酶的活性常受某些物質的影響，有些物質能使酶的活性增加，稱為激活劑；某些物質它們并不引起酶蛋白變性，但能使酶分子上的某些必需基團（主要是指酶活性中心上的一些基團）發(fā)生變化，因而引起酶活力下降，甚至喪失，致使酶反應速度降低，稱為酶的抑制劑。酶的激活劑種類

10、： 1、一些簡單的無機離子，如Mg2+、Cl-等； 2、一些中等大小的有機分子，如抗壞血酸等也是激活劑，它們對某些含巰基的酶具有激活作用； 3、有些酶的催化作用易受某些抑制劑的影響，因而能除去抑制劑的物質也可稱為激活劑，如EDTA能除去重金屬，因而能解除重金屬對酶的抑制作用。4、具有蛋白質性質的大分子物質，這些激活劑是指可對某些無活性的酶原起作用的酶。 酶的抑制劑有許多種： 如重金屬離子（Ag+、Hg2+、Pb2、Cu2等）、CO、氯化物、H2S、砷化物、氟化物、生物堿、有機磷農藥等都是抑制劑。 少量的激活劑或抑制劑就能影響酶的活性，而且常具有特異性。值得注意的是激活劑和抑制劑不是絕對的，各種

11、激活劑對酶的作用是不同的。 本實驗利用淀粉被水解的不同階段產物與碘有不同顏色反應，定性觀察唾液淀粉酶在酶促反應中激活或抑制現(xiàn)象。淀粉經酶促水解為葡萄糖的不同階段的產物與碘作用的顏色反應如下：本實驗中，Cl-為唾液淀粉酶的激活劑； Cu2+為唾液淀粉酶的抑制劑。利用淀粉被水解的不同階段產物與碘有不同的呈色反應，定性觀察唾液淀粉酶在酶促反應中激活和抑制現(xiàn)象。淀粉 + 碘 藍色淀粉 + 淀粉酶 水解產物 + 碘 顏色變化水解的程度是通過水解混合物遇碘溶液所呈現(xiàn)的顏色之變化來判斷的。三、實驗材料與試劑1、實驗材料 新鮮唾液2、實驗試劑 唾液淀粉酶（學生自制） 取唾液1ml至25ml量筒中，用蒸餾水稀釋

12、至25ml，用棉花過濾備用。唾液稀釋倍數(shù)因人而異，可稀釋50400倍，甚至更高。 0.1% 淀粉溶液 1.0% 氯化鈉溶液 1.0% 硫酸銅溶液 1.0% 硫酸鈉溶液 碘化鉀-碘液四、實驗器材與儀器1.試管及試管架2.量筒3.漏斗4.脫脂棉花5.點滴板6.吸量管7.恒溫水?。?7） 五、實驗操作方法和步驟取試管4支，按下表操作：注意： 找出準確的保溫時間，是本實驗是實驗能否成功的關鍵步驟之一，唾液淀粉酶液濃度可根據(jù)個人情況而定，通過37水浴溶保溫計時，反應時間最好在815min以內，只有確定準確的保溫時間才能進行實驗。 （2） 加入酶液后，務必充分搖勻，保證酶與全部淀粉液接觸的反應才能得到理想

13、的顏色梯度變化結果。（3）碘化鉀碘液不要過早地加到點滴板上，以免碘液揮發(fā)，影響顯色效果。六、結果分析討論1號試管為藍紫色，2號為淺黃色，3號為褐色，4號為淺褐色。試管 1 中顏色最深，說明 CuSO 4 可以抑制淀粉酶的活性；試管 2 中顏色最淺，基 本呈碘色，故淀粉酶活性最高，說明 NaCl 可以激活淀粉酶的活性；試管 3、4 中顏色基本 一致，且深淺居于試管1、2 之間，淀粉酶活性一般，說明Na+、SO 4 2- 對淀粉酶活性都沒有 影響。故總體上看，可以得出Cl - 是唾液淀粉酶的激活劑，Cu 2+ 是唾液淀粉酶的抑制劑。七、思考題1. 激活劑可分哪幾類？本實驗中NaCl、硫酸銅是屬于哪

14、種類型？激活劑可分為：簡單無機離子、中等大小有機分子、能除去抑制劑的物質、具有蛋白質性質的大分子物質等。NaCl 屬于簡單無機離子；CuSO4 屬于重金屬抑制劑。2. 本實驗中，1，2，3，4管各有何用意？為什么要設計第3管和第4管？1 管可觀察抑制劑對反應影響的現(xiàn)象，2管可觀察激活劑對反應影響的現(xiàn)象，第3管可以將1管中的Na+ 和2 管中的SO42- 對反應的影響去除，4管作為空白對照。3. 抑制劑與變性劑有何不同？試舉例說明。抑制劑只改變酶的催化活性，并不使蛋白質變性，其影響是可逆的；變性劑破壞了蛋白質的高級結構，使蛋白質變性，并且多數(shù)變性劑的影響是不可逆的。如：Cu2+ 是唾液淀粉酶的抑

15、制劑，但如果將Cu2+ 去除淀粉酶的活性又可以變?yōu)檎Ｋ?。八、注意事?.試管要干凈，所有試劑加量準確，加好試劑后要搖勻。2.使用試劑時不要人為造成試劑間的互相污染，以免實驗結果的錯誤。3.試劑用好瓶蓋要立即蓋好，防止試劑間的互相污染。4.兩種淀粉不要弄錯。5.激活劑抑制劑實驗中，注意運用點滴板（顯色板）來控制保溫時間； 如1，2，3，4管顏色反應無明顯差別，可能是唾流淀粉酶活力太高或太低，若酶活性太高可將酶稀釋后重做；若酶活性太低，可延長保溫時間或增加酶的濃度。. 影響酶活性的因素溫度，最適溫度測定一、實驗目的和要求1. 了解溫度對酶活力的影響；2. 學習測定最適溫度的原理和方法；二、實驗

16、基本原理酶的催化反應受溫度影響很大，每一種酶所催化的反應，在一定條件下，僅在某一溫度范圍內表現(xiàn)出最大的活力，即反應速度最大時的溫度，這個溫度稱為該酶促反應的最適溫度，高于或低于最適溫度時，反應速度逐漸下降。因此，酶促反應與溫度的關系，用酶活力對溫度作圖，通常具有鐘罩形曲線特征。 溫度與酶活力的關系測定是選擇一定的條件，把底物濃度、酶濃度、反應時間、pH等固定在最適狀態(tài)下，然后在一系列不同溫度條件下，進行反應初速度測定，以酶反應初速度對溫度作圖，可以得一個鐘罩形的曲線，即為溫度酶活性曲線，在某溫度有一酶活力最大值，這個溫度即為最適溫度。實驗利用唾液淀粉酶為試驗對象，在065之間選擇不同的溫度，進

17、行酶活力測定。根據(jù)淀粉被唾液淀粉酶水解的程度的不同，遇碘呈現(xiàn)顏色的變化來判斷酶活力的大小及最適溫度。 實驗采用蔗糖酶為試驗對象，在室溫至75之間選擇不同溫度進行酶活力測定。蔗糖酶的活力常以其反應產物還原糖（葡萄糖）的生成量來表示。測定還原糖的方法很多，本實驗選擇3,5二硝基水揚酸法測定還原糖量。在堿性條件下，3,5二硝水楊酸與還原糖溶液共熱后被還原成紅色氨基化合物，并在一定濃度范圍內，還原糖的量與反應溶液所呈棕紅色物質顏色的深淺程度成正比。因此，可以用分光光度法測定酶促反應后生成的還原糖量，從而測定蔗糖水解的速度和酶活力。三、實驗材料與試劑1、實驗材料 蔗糖酶液(樣品）加蒸餾水適當稀釋，備用；

18、 新鮮唾液。2、實驗試劑 0.2mol/L醋酸緩沖液（pH4.6） 5%蔗糖（A.R.）溶液（W/V） 3,5二硝基水揚酸（簡稱DNS）試劑 0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl） KI-I2溶液 四、實驗器材與儀器1.試管及試管架， 2恒溫水浴， 3吸量管, 4滴管, 5點滴板，6分光光度計， 7制冰機。五、實驗操作方法和步驟一、溫度對唾液淀粉酶活力的影響1觀察溫度對酶活動的影響： 取5支試管，按下表操作。注意： 找出準確的保溫時間，是本實驗是實驗能否成功的關鍵步驟之一，唾液淀粉酶液濃度可根據(jù)個人情況而定，通過37水浴溶保溫計時，反應時間最好在815min以內，只有確定準確的保溫時間才能進行

19、實驗。（2）加入酶液后，務必充分搖勻，保證酶與全部淀粉液接觸的反應才能得到理想的顏色梯度變化結果。（3）碘化鉀碘液不要過早地加到點滴板上，以免碘液揮發(fā)，影響顯色效果。各管保溫時間要相同。2、繪制溫度-酶活力曲線圖，以反應溫度為橫坐標，反應液顏色的深淺程度（代表酶活力的大小）為縱坐標。繪制溫度酶活力曲線（鐘罩形），確定唾液淀粉酶的最適溫度。二、溫度對蔗糖酶活力的影響1、蔗糖酶最適溫度的測定 取試管7支進行編號，0號管為空白對照，以蒸餾水代替酶液，17號順序為測定管，向各管加入0.2mol/L醋酸緩沖液（pH4.6）1ml， 2%蔗糖溶液0.5ml，然后將各編號管依次放入相應溫度（見下表）的恒溫水浴或恒溫箱中，預熱2min，再逐管準確計時加入0.5ml經適當稀釋的蔗糖酶液，迅速混勻；精確反應10min后，加入1ml 3,5二硝基水楊酸（DNS）試劑，立即混勻，放入沸水浴中加熱5min。取出用流水冷卻至室溫后，向各管加入5ml蒸餾水，充分混勻。以0號管作空白對照A520值為零，在分光光度計上于520nm波長處測定各管的A520值，并作好記錄。2、繪制溫度酶的活力曲線圖 以反應溫度為橫坐標，相應的A520（表示反應初速度）為縱坐標，繪制出溫度酶活力（A520值）曲線圖，從而可以測出蔗糖酶在本實驗條件下的最適溫度。六