最新高中生物選修三知識(shí)點(diǎn)整理(完整加強(qiáng)版)

1、精品文檔生物選修3知識(shí)點(diǎn)（區(qū)別不同工程和不同操作水平）專題1 基因工程概念：按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，通過體外 DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù)，賦予生物 新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品?；驹?讓目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定且高效的表達(dá)理論基礎(chǔ):DNA是生物遺傳物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)，DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)，遺傳信息傳遞方式核心:構(gòu)建重組DNA分子（一）基本工具（技術(shù)基礎(chǔ)）Cf工具&X具酶1.限制性核酸內(nèi)切酶（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的（不切割自身 DNA勺原因：原核生物中無該限制酶的識(shí)別序列或其已被修飾）（2）功能：識(shí)別和切割 DNA分子內(nèi)一小段特殊的脫氧核甘酸

2、序列（偶數(shù)堿基對(duì)回文序列）特異性表現(xiàn)：識(shí)別特定片段、切割該片段中的特定位點(diǎn)、形成一種末端CfGJ GATCC- & J GATC-（3）結(jié)果：DNA片段末端形成末端堿基互補(bǔ)的黏性末端或平末端用 切割（質(zhì)粒）-根據(jù)目的基因的位置或剪輯序列來確定限制酶的種類切割后的片段要畫全2 .DNA連接酶（1）功能：連接具有末端堿基互補(bǔ)的2個(gè)DNA片段，形成重組 DNA分子Cf DNA聚合酶：只能將單個(gè)脫氧核甘酸逐個(gè)添加到已有的脫氧核甘酸鏈之后，需模板DNA連接磷酸二酯鍵3 .載體（1）條件：能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定保存并大量復(fù)制，基本不影響受體細(xì)胞正常生命活動(dòng)一至多個(gè)限制酶酶切位點(diǎn)（必須在所需如記至因外）

3、，供外源DNA片段插入標(biāo)記基因，便于篩選含有重組DNAi亓的受體細(xì)胞往往需要根據(jù)需求改造天然載體（2）功能：作為運(yùn)載工具將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞內(nèi)載體選質(zhì)粒的原因：具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)，能夠攜帶目的基因利用它在受體細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量復(fù)制和轉(zhuǎn)錄/表達(dá)（3）質(zhì)粒（最常用的載體）一種能夠自主復(fù)制，在細(xì)菌 （或酵母菌）中獨(dú)立于染色體之外存在的雙鏈環(huán)狀DNA分子（4）其它載體：噬菌體、動(dòng)植物病毒（二）基因工程的基本操作程序第一步：獲取目的基因1 .目的基因：人們所需要的編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因2 .方法（1）序列已知化學(xué)合成法較長(zhǎng)DNAI鏈合成過程中容易出現(xiàn)堿基缺失如反轉(zhuǎn)錄法（e.g獲取mRN砥轉(zhuǎn)錄成cDNA

4、再用DNA聚合酶生成雙鏈）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增Polymerase Chain Reaction（1）原料：水、緩沖液、4種游離脫氧核甘酸、TaqDNA聚合酶、模板DNA（基因）、 對(duì)一基因特異的2段DNA弓I物（防止相互或自身折疊）（2）過程：第一步：加熱至 9095 C, DNM高溫下變性解鏈第二步：冷卻到 5560 C,引物結(jié)合到互補(bǔ) DNAB1 （退火）第三步：加熱至7075 C,熱穩(wěn)定DNAm合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成 能量來源于dNTP（2）序列未知建立基因文庫：建立一個(gè)包括目的基因在內(nèi)的基因文庫（保存在受體菌中）,再從基因文庫中獲取3 .目的基因大量擴(kuò)增/分子水平的克隆利

5、用受體細(xì)胞（如 E.coli ）無性繁殖，利用基因探針釣取，再導(dǎo)入最終受體細(xì)胞e.g目的基因一大腸桿菌一農(nóng)桿菌一植物細(xì)胞一植物（主要在細(xì)菌分裂時(shí)幾何級(jí)擴(kuò)增，盡管質(zhì)粒獨(dú)立于擬核，可在分裂時(shí)發(fā)生自我復(fù)制，但由于多數(shù)細(xì)菌對(duì)胞內(nèi)質(zhì)粒數(shù)量有限制，故該種復(fù)制對(duì)擴(kuò)增效果不大）PC叱術(shù)第二步：形成重組 DN酚子（基因表達(dá)載體：?jiǎn)?dòng)子+目的基因+終止子+標(biāo)記基因）1 .目的：轉(zhuǎn)運(yùn)目的基因，并使在受體內(nèi)穩(wěn)定存在、復(fù)制、表達(dá)/轉(zhuǎn)錄并穩(wěn)定遺傳（基因型X0）2 .過程：（1）單酶切：用同種限制酶分別切割目的基因和載體從而形成相同的粘性末端, 然后用DNA連接酶將目的基因和載體連接起來有時(shí)用不同限制酶也可以形成相同的粘性

6、末端（2）雙酶切：用兩種限制酶切割使目的基因和載體兩端各形成兩種粘性末端，防止載體和目的基因自身環(huán)化第三步：將重組DN肪子導(dǎo)入受體細(xì)胞需將目的基因整合到動(dòng)植物細(xì)胞的染色體DNA±目的基因是否整合到染色體DNAh決定于基因表達(dá)載體上是否有相關(guān)序列（形成酶）1 .植物體細(xì)胞：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（插入 Ti質(zhì)粒上的T-DNA）,基因槍法、花粉管通道法導(dǎo)入葉綠體 DNA中，由于細(xì)胞質(zhì)/器DNA勺遺傳與性別相關(guān)聯(lián)，故可避免因花粉傳播而造成基因污染（目的基因傳播到非轉(zhuǎn)基因生物中）2 .動(dòng)物受精卵：顯微注射技術(shù)用（如顯微注射）技術(shù)/方法將目的基因?qū)?cf轉(zhuǎn)基因/基因工程技術(shù)3 .原核細(xì)胞：CaCl2/

7、Ca2+處理法（先用Ca2+處理增加細(xì)胞壁通透性，使之成為感受態(tài)細(xì)胞，再將重組質(zhì)粒與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定溫度下感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子）原核生物作為受體細(xì)胞的原因 ：繁殖快體積小新陳代謝旺盛（目的產(chǎn)物合成效率高）遺傳物質(zhì)少（便于操作）、 單細(xì)胞（容易培養(yǎng)）第四步：篩選含有目的基因的受體細(xì)胞1 .原因：受體細(xì)胞接納重組 DN后子存在概率2 .原理：載體如質(zhì)粒上的抗性基因等標(biāo)記基因3 .方法：利用選擇培養(yǎng)基篩選蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白：僅以蔗糖作為碳源的培養(yǎng)基菌落表現(xiàn)型：抗不抗第五步：目的基因的檢測(cè)和表達(dá)目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞可能僅進(jìn)行大量擴(kuò)增，但不一定以此為目的1. DNA股酸分子雜交技術(shù)用cDNA乍為探針

8、與從受體細(xì)胞中提取并解旋的DNA/mRN雜交，觀察是否會(huì)出現(xiàn)雜交帶檢測(cè) 染色體DNAk是否插入了目的基因論目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA 一種基因探針只能檢測(cè)水體中的一種病毒；檢測(cè)病毒可對(duì)照核酸序列放射性同位素標(biāo)記探針基因探針 是一小段cDNA 可以與相應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄出的 mRNA吉合（即使被切割）采用DN酚子雜交技術(shù)/方法，用基因探針檢測(cè)2 .抗原抗體雜交：目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)如E.coli合成人胰島素原3 .個(gè)體水平的鑒定：如轉(zhuǎn)基因抗蟲植物（讓害蟲吞食該轉(zhuǎn)基因棉植株的葉片，觀察害蟲存 活情況,以確定其是否具有抗蟲形狀）根本原因：聯(lián)系基因?qū)用?，cf基因序列&堿基對(duì)/脫氧核甘酸序列（三

9、）基因工程的應(yīng)用1 .動(dòng)植物基因、細(xì)胞工程：優(yōu)點(diǎn)所需時(shí)間短克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的缺陷（對(duì)應(yīng)傳統(tǒng)缺點(diǎn)）2 .基因工程藥物：首次是生長(zhǎng)素釋放抑制激素，然后胰島素（ E.coli產(chǎn)酶原）、干擾素等干擾素：我國第一個(gè)基因重組新藥。一組具有多種功能的活性蛋白質(zhì)（主要是糖蛋白） , 是一種由單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子。具有抗病毒、抗細(xì)胞分裂、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)功能，是治療病毒性肝炎和腫瘤的藥物。干擾素是一種廣譜抗病毒劑，并不直接殺傷或抑制病毒，而主要是通過細(xì)胞表面受體作用使細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白， 從而抑制乙肝病毒的復(fù)制； 同時(shí)還可增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞 （NK細(xì)胞）、 巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的活力，從而起到免

10、疫調(diào)節(jié)作用，并增強(qiáng)抗病毒能力。3 .基因治療：將正常功能的外源基因?qū)肴毕菁?xì)胞內(nèi)（初級(jí)實(shí)驗(yàn)階段、未臨床實(shí)踐）Cf有基因缺陷的染色體/DNA分子上：具體與哪條 DNA分子結(jié)合隨機(jī)治療隱性遺傳?。ㄕ；蛳鄬?duì)缺陷基因呈顯性）4 .安全性問題：在導(dǎo)入目的基因的同時(shí)可能會(huì)導(dǎo)入其他基因如抗生素抗性基因，可能會(huì)使人體內(nèi)細(xì)菌抗藥性增強(qiáng)，以致某些藥物的藥效減弱（四）蛋白質(zhì)工程的概念蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。蛋白京工程（基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)）_預(yù)期功能生

11、物功能分節(jié)軸:氮基酸序列|二二，亳赧席|有薪力爭(zhēng)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)錄 翻譯 中心法則專題2 細(xì)胞工程（一）克隆1 .克隆clone ：無性繁殖系（只由一個(gè)模板分子、母細(xì)胞或母體直接形成新一代）2 .克隆技術(shù)cloning :從眾多基因或細(xì)胞群體中通過無性繁殖和選擇獲得目的基因或特定類 型細(xì)胞的操作技術(shù)3 .內(nèi)容：（1）分子水平：基因克隆即目的基因的復(fù)制（受體細(xì)胞的無性繁殖）、分離（特 定基因探針選擇、釣取目的基因）過程（2）細(xì)胞水平：雜交瘤制備單克隆抗體（3）個(gè)體水平：不通過兩性細(xì)胞的結(jié)合，從一個(gè)單一（體）細(xì)胞繁殖出生物個(gè)體胚胎細(xì)胞克隆以胚胎/卵細(xì)胞作為供體、利用核移植，不是嚴(yán)格 意義上的動(dòng)物個(gè)體克隆4

12、.條件：（1）理論條件：細(xì)胞全能性/細(xì)胞有發(fā)育成完整個(gè)體的全套遺傳物質(zhì)（根本原因）（2）基本條件：具有包含物種完整基因組的細(xì)胞核的活細(xì)胞具有能有效調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育的細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)e.g去核卵細(xì)胞完成胚胎發(fā)育的必要的環(huán)境條件e.g胚胎早期培養(yǎng)環(huán)境/子宮5 .非正面影響：豐富生物多樣性，促進(jìn)生物進(jìn)化，維護(hù)生態(tài)平衡（二）植物克隆1 .全能性表達(dá)的難易程度：受精卵生殖細(xì)胞胚胎 /全能干細(xì)胞多能（干）細(xì)胞專能（干）細(xì)胞體細(xì)胞；生殖細(xì)胞在一定刺激下染色體可加倍；一些動(dòng)物存在孤雌生殖植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞；低等動(dòng)物高等動(dòng)物不同種類植物或同種植物的不同基因型個(gè)體間全能性的表達(dá)程度大不相同長(zhǎng)期培養(yǎng)后的全能性下降原因：染色體

13、畸變、核變異、非整倍體產(chǎn)生； 細(xì)胞或組織中激素平衡被打破；細(xì)胞對(duì)外源生長(zhǎng)物質(zhì)的敏感性改變;形成缺乏成胚性的細(xì)胞系植株在多次繼代培養(yǎng)后，會(huì)逐漸喪失細(xì)胞全能性的表達(dá)能力2 .植物組織培養(yǎng)（植物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)）（1）理論基礎(chǔ)：植物細(xì)胞全能性，即植物體的每個(gè)生活細(xì)胞都具有遺傳上的全能性,因而都具有發(fā)育成完整植株的潛能（2）過程：離體植物細(xì)胞、組織或器官（外植體）一獲得愈傷組織一誘導(dǎo)形成試管苗一新植株外植體選取形成層（分生組織）部分易于誘導(dǎo)形成愈傷組織A. 培養(yǎng)條件：首先是離體培養(yǎng)（生物體內(nèi)細(xì)胞中基因在特定時(shí)間和空間條件下選擇性表達(dá)，細(xì)胞分化為不同組織、器官，故無法表現(xiàn)出全能性）半/固體培養(yǎng)基（固體為例

14、）a. 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、蔗糖、維生素、有機(jī)添加劑（氨基酸、瓊月旨凝固劑等）b. 植物?t素/生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（適當(dāng)濃度配比誘導(dǎo)分化出芽/根的頂端分生組織/花）IAA>CTK誘導(dǎo)外植體脫分化形成愈傷組織c. 無菌條件（外植體 70%酉精消毒、器械高溫蒸汽滅菌）一一雜菌爭(zhēng)奪產(chǎn)毒d. 適宜的pH、溫度和滲透壓B. 光照：若外植體是（帶葉）莖段，不經(jīng)歷脫分化再分化，組培全過程均需要光照； 若外植體是非光合作用部位（如胡蘿卜塊根），再分化成芽后光照C. 試管苗移栽前需煉苗（草炭土 /蛭石，逐漸降濕）D. 愈傷組織：排列疏松的高度液泡化的活的薄壁組織團(tuán)外植體一愈傷組織一搖床液體懸浮培養(yǎng)分散成單細(xì)胞一

15、胚狀體一人工種子單細(xì)胞植物克隆，類似受精卵的卵裂、分化、器官發(fā)生、形態(tài)建成A .單細(xì)胞：細(xì)胞質(zhì)豐富、液泡小、細(xì)胞核大（胚性細(xì)胞特征）酶解細(xì)胞壁一原生質(zhì)體培養(yǎng)一新植株（2）用途：微型繁殖、制造人工種子（胚狀體階段）、單倍體育種、作物脫毒（植物分生組織細(xì)胞，分裂旺盛病毒極少Cf抗病毒）、在培養(yǎng)基中加入不同濃度的氯化鈉溶液，可誘發(fā)和篩選抗鹽植株細(xì)胞產(chǎn)物工廠化生產(chǎn)（愈傷組織階段已可，試管培養(yǎng)苗、細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器也可）3 .原生質(zhì)體融合/植物體細(xì)胞雜交（不同植物）獲得原生質(zhì)體：在甘露醇溶液環(huán)境（ 較高滲透壓）中用纖維素酶和果膠酶混合液處理用網(wǎng)篩過濾原生質(zhì)體到離心管內(nèi)，離心后收集沉淀物，用等滲溶液洗滌;檢驗(yàn)

16、原生質(zhì)體是否符合要求：依據(jù)滲透作用原理，采用低滲脹破法（見比較表格）4 .植物細(xì)胞工程：培養(yǎng)植物細(xì)胞（包括原生質(zhì)體），借用基因工程技術(shù)將外源 DNA導(dǎo)入受體 細(xì)胞或通過細(xì)胞融合將不同源的遺傳物質(zhì)重新組合，再通過細(xì)胞培養(yǎng)，獲得具有特定性狀的植株Cf 細(xì)胞工程：細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞融合（若基因型不同為細(xì)胞雜交）基因定位：利用細(xì)胞雜交中染色體丟失與特定基因產(chǎn)物的對(duì)應(yīng)關(guān)系（三）動(dòng)物細(xì)胞工程1 .動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)指明“動(dòng)物”細(xì)胞培養(yǎng)（1）概念：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后 放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。原理：細(xì)胞增殖（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼

17、齡動(dòng)物的器官或組織）機(jī)械消化或用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞（利于細(xì)胞與培養(yǎng)液充分接觸,進(jìn)而吸 收氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并排出廢物）制成細(xì)胞懸液-車t入細(xì)胞培養(yǎng)瓶/卡式瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)細(xì)胞間相互依存，呈現(xiàn)一定程度的組織特性，保持生長(zhǎng)分裂、接觸抑制、衰老死亡貼滿瓶壁的細(xì)胞用胰蛋白酶處理使貼壁細(xì)胞從瓶壁上脫落下來并分散成單個(gè)細(xì)胞稀 釋分裝傳代培養(yǎng)（最初的若干次傳代也歸入原代培養(yǎng)）大多數(shù)細(xì)胞最終衰老、凋亡（營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)耗盡遺傳物質(zhì)沒變，衰老凋亡）動(dòng)物組織培養(yǎng)：動(dòng)物組織在體外及人工條件下維持生活狀態(tài)或生長(zhǎng)特性可伴隨組織分化， 但主要的生命活動(dòng)仍以細(xì)胞為單位；由于細(xì)胞運(yùn)動(dòng)變化，培養(yǎng)物組分發(fā)生變異，長(zhǎng)期培養(yǎng)最終成為簡(jiǎn)單

18、的細(xì)胞培養(yǎng)（3）細(xì)胞貼壁和接觸抑制：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞 數(shù)目不斷增多，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互抑制時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這 種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。（4）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件（液體培養(yǎng)基）無菌無毒：培養(yǎng)液和用具無菌處理，一定量的抗生素（種、量），定期更換培養(yǎng)液營(yíng)養(yǎng)：水無機(jī)鹽、葡萄糖、氨基酸、維生素、動(dòng)物（胎牛）血清、滋養(yǎng)細(xì)胞、激素 Cf天然（血清）和人工配制成分適宜滲透壓、溫度、 pH （CO培養(yǎng)箱：維持適宜的 pH值7.27.4 ）提高形成率的措施：選擇適宜的培養(yǎng)基和 CO2 pH胰島素等激素刺激添加血清滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長(zhǎng)（經(jīng)射線照射本身失去增殖力的小

19、鼠成纖維細(xì)胞）（5）細(xì)胞系：可連續(xù)傳代的細(xì)胞（首次傳代細(xì)胞即成為細(xì)胞系）連續(xù)細(xì)胞系e.g異倍體惡性（致癌）/不死性（保留接觸抑制，不致癌） 有限細(xì)胞系e.g二倍體細(xì)胞傳代培養(yǎng)的原因：細(xì)胞密度過大代謝消耗引起營(yíng)養(yǎng)枯竭細(xì)胞株：特殊的細(xì)胞系（6）細(xì)胞克隆/克隆培養(yǎng)法：定義：把一個(gè)單細(xì)胞從群體中分離出來單獨(dú)培養(yǎng)，使之繁衍成一個(gè)新的細(xì)胞群體特點(diǎn)：細(xì)胞群體來自于同一個(gè)細(xì)胞（否則具有異質(zhì)性），遺傳性狀均一，表達(dá)性狀相似要求：最基本：分離出來的細(xì)胞是一個(gè)而非多個(gè)一般選擇連續(xù)細(xì)胞系：對(duì)培養(yǎng)環(huán)境有較大適應(yīng)范圍并具有較強(qiáng)獨(dú)立生存能力 用途：從普通細(xì)胞系中分離出缺乏特殊基因的突變細(xì)胞系2 .動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆

20、動(dòng)物動(dòng)物難以克隆的根本原因：細(xì)胞分化過程中細(xì)胞質(zhì)中的調(diào)節(jié)蛋白關(guān)閉了核中與個(gè)體發(fā)育有關(guān)的基因，使基因選擇性表達(dá)，基因組中基因活動(dòng)不完全(1)原理：動(dòng)物細(xì)胞核的全能性(2)供核細(xì)胞：優(yōu)良動(dòng)物的傳代培養(yǎng)10代以內(nèi)的細(xì)胞后代性別由核供體動(dòng)物個(gè)體的性別決定受體細(xì)胞：去核的 MII中期的卵母細(xì)胞細(xì)胞較大，容易操作細(xì)胞質(zhì)營(yíng)養(yǎng)豐富，具有調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育、促進(jìn)核基因表達(dá)的物質(zhì)黑面綿羊一脈沖良 早期小胎|另一頭母呼羊的于需綠.生£隆端羊多利R(3)體細(xì)胞核移植的大致過程是：顯微操作去核法選擇供悻雄牛受體母牛I I同期發(fā)情處理I龍凝排卵:供體會(huì)牛一配斡4沖卵i ,，質(zhì)量檢杳.培養(yǎng)一* 妊靦移植I妊娠檢支I分

21、晚，胚胎移軾聃城牛)多莉羊的成功說明：高度分化細(xì)胞經(jīng)過一定技術(shù)處理，也可以回復(fù)到類似受精卵時(shí)期的功能在胚胎和個(gè)體發(fā)育中，細(xì)胞質(zhì)具有調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育的作用無法培育出相同個(gè)體 /克隆動(dòng)物的 基因來源:受體細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)基因控制性狀表達(dá)細(xì)胞分裂中基因突變 環(huán)境因素3.動(dòng)物細(xì)胞融合比較項(xiàng)目細(xì)胞融合的原理融合前處理誘導(dǎo)手段應(yīng)用植物體細(xì) 胞雜交細(xì)胞膜流動(dòng)性 植物細(xì)胞全能性獲得原生質(zhì)體(1)物理：離心、電 刺激、振蕩(2)化學(xué)：聚乙二醇克服了遠(yuǎn)緣雜 交的/、親和性 研究質(zhì)遺傳動(dòng)物細(xì)胞 融合細(xì)胞膜流動(dòng)性 細(xì)胞增殖細(xì)胞分散(1/2 )植物物化手段(3)滅活的仙臺(tái)病毒制備單克隆抗體細(xì)胞融合時(shí)可出現(xiàn)多種雜種細(xì)胞專題3

22、胚胎工程胚胎工程是指對(duì)動(dòng)物早期胚胎或配子(針對(duì)胚胎發(fā)育過程)所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù)；研究對(duì)象主要限定于高等脊椎動(dòng)物，尤其是哺乳動(dòng)物；重點(diǎn)內(nèi)容包括胚胎移植、體外受精、胚胎分割、胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)等。(一)動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過程1、受精作用：成熟的精卵融合成為受精卵的過程(獲能精子+減ii中期的成熟卵細(xì)胞)過程：精卵識(shí)別、精子附著于卵膜、精卵質(zhì)膜融合受精時(shí)精卵質(zhì)膜融合后，次級(jí)卵母細(xì)胞才最終完成減ii ,精卵核融合場(chǎng)所：輸卵管上段2、胚胎發(fā)育：受精卵發(fā)育到幼體胚后發(fā)育：出生到性成熟個(gè)體發(fā)育：受精卵發(fā)育到性成熟3、動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過程（1）卵裂期（28）:細(xì)胞數(shù)量增加，有機(jī)物總量 /總體積減小，

23、每個(gè)細(xì)胞都具有全能性， 未出現(xiàn)細(xì)胞分化，每個(gè)細(xì)胞都能發(fā)育成完整新個(gè)體（2）桑棋胚（1632）（3）囊胚/胚泡：細(xì)胞開始分化，形成滋養(yǎng)層（胚胎附屬結(jié)構(gòu) /胚外結(jié)構(gòu)）和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)（胚 胎干/ES細(xì)胞，發(fā)育全能性），之間為囊胚腔 注意題目要求填寫滋養(yǎng)層細(xì)胞還是滋養(yǎng)層（4）原腸胚：三胚層分化，其將分化成各種器官原基；哺乳動(dòng)物胚胎有機(jī)物總量增加（胚泡期已著床），其他動(dòng)物有機(jī)物減少PS早期胚胎（桑甚胚和早期囊胚）（二）胚胎干細(xì)胞1、哺乳動(dòng)物胚胎干細(xì)胞來源于囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)（ES）或胎兒的原始性腺（EK）2、形態(tài)特征：具有胚胎細(xì)胞的特性,體積小，核大，核仁明顯，二倍體核型功能特征：具有發(fā)育全能性3、胚胎干細(xì)胞體外

24、培養(yǎng)：分離早期胚胎中的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)；胰酶處理解離培養(yǎng)飼養(yǎng)層（胚胎成纖維細(xì)胞）：促進(jìn)生長(zhǎng)，抑制分化4、胚胎干細(xì)胞的主要用途是：基因敲除;用分化誘導(dǎo)因子誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞定向分化,組織器官移植；治療人類的某些頑疾，修復(fù)壞死或退化的部位；胚胎干細(xì)胞核移植，經(jīng)胚激活、胚胎培養(yǎng)、胚胎移植；改良和創(chuàng)造動(dòng)物新品種（三）胚胎工程的應(yīng)用1 .體外受精（1）卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)：卵巢經(jīng)促性腺激素處理超數(shù)排卵，使用超聲監(jiān)視器確定卵泡位置,插入穿刺針吸取卵泡液,取出卵母細(xì)胞（各階段卵母細(xì)胞均有可能）體外培養(yǎng)至成熟（減II中）（2）精子的采集和獲能（獲得能與卵細(xì)胞結(jié)合的能力）：獲能液由相關(guān)物質(zhì)組成非ATP（3）受精：獲能精子和成熟卵細(xì)胞在體外合適環(huán)境中共同培養(yǎng)試管動(dòng)物/珍稀動(dòng)物保護(hù)（體外受精）Cf克隆動(dòng)物（核移植）2 .3 .胚胎體外培