腦憶清膠囊對老年小鼠和擬癡呆大鼠記憶功能的影響

1、    腦憶清膠囊對老年小鼠和擬癡呆大鼠記憶功能的影響黃世福梁啟勇陳勤夏宗勤 摘要：選用老年小鼠和 A1C13溶液制備的擬癡呆大鼠動物模型(DMR )，研究腦憶清膠囊(NYQ)對實驗動物記憶功能的影響及其作用機理。結果表明，DMR 大腦 皮層組織(Cer)中膽堿酯酶(AchE)活性比正常大鼠提高(P0.01)，而老年小鼠 Cer 中 M-受體Rt值比正常青年小鼠降低(P HT5"K0.01)，NYQ 可顯著降低實驗動物 Cer 中 AchE 活性(P 0.050.01)，增加M-受體Rt值(P0.050.01)。提示 NYQ 可通過降低實驗動物

2、Cer中AchE活性，增加M-受體Rt值而明顯提高記憶能力，對老年癡呆有一定的治療作用。 關鍵詞：腦憶清膠囊/藥理學；記憶/藥物作用；膽堿酯酶類/分析；受體，膽堿能/分析； 癡呆，老年性/中藥療法 中圖分類號：R285.5；R338.64文獻標識碼：A文章編號：1003-9783(1999)03-0153-03 腦憶清膠囊系根據(jù)明代古方改劑型而研制的中藥新制劑。具有補腎益精、養(yǎng)心安神、健腦益智的功效。臨床多用于主治中老年人記憶力減退、失眠、多夢以及神經(jīng)衰弱、小兒智力發(fā)育不全等癥。我們利用老年小鼠和模擬老年癡呆的病理模型大鼠來研究NYQ對實驗動物膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的影響，以探討其延緩腦功能衰老和促進

3、記憶的機理。 1材料與方法 1.1材料 1.1.1藥物與試劑腦憶清膠囊為本所自制，由制首烏、熟地、枸杞子、酸棗仁、柏子仁、石菖蒲、茯神、山藥等藥味組成，批號：961015。腦復康片由合肥制藥廠生產(chǎn)，批號：960422。柳酸毒扁豆堿、乙酰硫代膽堿(AThch)、5，5'-聯(lián)硫代-雙-(2-硝基苯甲酸)(DTNB)，均由上?；瘜W試劑采購供應站提供，進口分裝。谷胱甘肽，由上?；瘜W試劑分裝廠提供，批號：950810。3H-QNB，英國Amersharm產(chǎn)品，比活度1.5TBq(42Ci).mmo1-1。其他均為分析純試劑。 1.1.2動物及分組Wistar大鼠(180220g)，老年小鼠(24

4、月齡)，青年小鼠(4月齡)，均由安徽醫(yī)科大學動物實驗中心提供。大鼠60只，雌雄各半，隨機分為6組：即正常組、癡呆模型組、模型加腦復康組、模型加NYQ小、中、大劑量組，除正常組外，其余每鼠投以AlCl320mg.d-1，共飼養(yǎng)90d，給藥及劑量見表1。老年小鼠50只，隨機分5組，即老年組、腦復康組、NYQ小、中、大劑量組，另設青年對照組10只，給藥90d，給藥及劑量見表2。 表1NYQ對癡呆大鼠記憶能力的影響(±s) 組別 劑量 /(g.kg-1) 潛伏期/s 5min錯誤 百分率/% 正常組 N.S 221.50±114.57 30 模型組 N.S 100.63±

5、96.72 80 腦復康組 0.15 210.69±122.79* 40 NYQ小劑量組 0.88 236.40±108.50* 30 NYQ中劑量組 1.75 256.80±80.87* 40 NYQ大劑量組 3.50 227.69±118.88* 30 注：與正常組比較，P0.01；與模型組比較，*P0.01；N=10。 表2NYQ對擬癡呆大鼠腦AchE的影響(±s) 組別 劑量/(g.kg-1) 每克腦組織AchE 含量/g 正常組 N.S 107.63±13.82 模型組 N.S 127.63±10.14 腦復康組

6、0.15 115.20±9.92* NYQ小劑量組 0.88 117.49±15.03* NYQ中劑量組 1.75 113.18±11.52* NYQ大劑量組 3.50 114.17±10.22* 注：與正常組比較，P0.001；與模型組比較，*P0.05，*P0.01；N=10。 1.2方法 1.2.1大鼠記憶能力檢測采用跳臺法1略加改進。實驗裝置為30×30×30cm的反射箱，箱底鋪以銅柵，通50V電流，箱內(nèi)放一高達10cm的絕緣跳臺。非條件刺激為足底受電法。訓練時，電擊10s，間歇20s，直至大鼠跳上跳臺為止。記錄5min內(nèi)的觸

7、電次數(shù)及從電擊區(qū)跳到跳臺安全區(qū)后第一次重新觸電的潛伏期(大于5min按5min計)和5min錯誤百分率。第1天訓練，讓每只大鼠均遭電擊然后跳上跳臺一次，第2天測驗。 1.2.2大鼠腦膽堿酯酶的測定2將大鼠斷頭，冰臺上分離出腦組織，精密稱取約100mgCer,加0.1mol.L-1pH7.4PBS10mL勻漿。再取腦勻漿0.2mL(對照管加0.1%柳酸毒?扁?豆?堿1滴)，再加0.1mol.L-1pH7.4PBS1.3mL,37水浴5min，加入2.5mmol.L-1ATHch0.5mL，繼續(xù)水浴15min，反應結束后測定管加0.1%柳酸毒扁豆堿1滴。取出加1.5mol.L-1DTNB0.5mL

8、，混勻，4000r.min-1離心15min，取上清液，在412nm波長處測光密度。標準曲線用不同濃度的谷胱甘肽液加入DTNB制成。 1.2.3小鼠記憶能力檢測采用跳臺法和避暗法，分別記錄每組動物5min內(nèi)的錯誤次數(shù)及潛伏期，詳見文獻3。 1.2.4M受體測定4先將小鼠斷頭，迅速取出大腦，冰浴上制備腦膜受體蛋白標本。再根據(jù)3H-QNB與腦膜蛋白結合的特性，使用單點法，完成放射配基結合反應系統(tǒng)。采用微量Lowry法，測量蛋白質(zhì)濃度。然后根據(jù)配基的比活度和復合物的放射性求得受體結合點數(shù)，單點法Rt值計算如下： 2結果 2.1對擬癡呆大鼠記憶能力的影響從一次被動回避試驗結果看，模型組動物潛伏期比正常

9、組縮短(P0.01)，而且錯誤百分率也比正常組高出50%，說明大鼠投以AlCl390d后已造成實驗性癡呆模型。腦復康及NYQ各劑量組大鼠的潛伏期比模型組明顯延長(P0.01)，而且5min內(nèi)的錯誤百分率亦比模型組低得多，提示腦復康和NYQ各劑量組對實驗性癡呆模型有一定的治療作用，均可改善大鼠的學習記憶功能，基本上達到正常組水平。見表1。 2.2對實驗性癡呆大鼠AchE活性的影響測定各組動物Cer中AchE含量，結果表明：模型組與正常組比較有極顯著性差異(P0.001)，說明投以AlCl3已造成大鼠腦AchE的含量升高，進而造成實驗性癡呆模型，與其學習記憶功能低下相一致。腦復康及NYQ各劑量組與

10、模型組相比較，有非常顯著性差異(P0.050.01)，提示腦復康與NYQ各劑量均能夠對抗大鼠因長期服用AlCl3所引起的腦AchE的升高，二者具有同等的藥理作用，說明NYQ對實驗性癡呆模型大鼠具有一定的治療作用。見表2。 2.3對老年小鼠記憶能力的影響老年小鼠隨著增齡，其學習記憶能力明顯低于青年小鼠(P0.050.01)，而連續(xù)灌服NYQ90d后，可使衰退的學習記憶功能明顯得到改善，跳臺反應和避暗反應的潛伏期延長(P0.050.01)，5min錯誤反應次數(shù)減少(P0.050.01)。結果見表3。 表3NYQ對老年小鼠記憶能力的影響(±s) 組別 劑量 /(g.kg-1) 跳臺法 避暗

11、法 潛伏期/s 5min錯誤次數(shù)/次 潛伏期/s 5min錯誤次數(shù)/次 青年組 N.S 230.50±68.70 0.33±0.52 203.27±67.52 0.85±0.77 老年組 N.S 137.50±108.31 1.50±1.08 108.00±89.16 2.40±1.58 腦復康組 0.30 247.00±101.55* 0.40±0.70* 226.67±87.86* 0.78±0.83* NYQ小劑量組 1.75 253.18±81.56* 0.

12、36±0.50* 201.82±90.61* 0.82±0.75* NYQ中劑量組 3.50 236.25±99.62* 0.42±0.67* 207.08±88.27* 0.83±0.58* NYQ大劑量組 7.00 250.00±87.78* 0.63±0.49* 198.75±83.53* 1.08±0.99* 注：與青年組比較，P0.05，P0.01；與老年組比較，*P0.05，*P0.01;N=10。 2.4對老年小鼠腦M受體的影響由表4可看出，老年模型小鼠Cer中M-受體R

13、t值比正常青年小鼠明顯降低，差異有非常顯著性意義(P0.01)，而NYQ可提高老年小鼠腦M-受體Rt值，與老年對照小鼠比較，差異有顯著性(P0.05)。 表4NYQ對老年小鼠腦M-受體Rt值的影響(±s) 組別 劑量 /(g.kg-1) N/只 每毫克膜蛋白中 M-受體Rt值/fmol 青年組 N.S 9 1130±174 老年組 N.S 9 946±320 腦復康組 0.30 9 1132±120* NYQ小劑量組 1.75 8 1044±810* NYQ中劑量組 3.50 9 1085±124* NYQ大劑量組 7.00 9 11

14、06±163* 注：與青年組比較，P0.01；與老年組比較，*P0.05，*P0.01。 3討論 膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的變化與學習記憶功能密切相關。癡呆模型動物，其大腦組織中M-受體Rt值明顯低于正常青年動物，而腦AchE活性則升高，并伴有明顯的行動遲緩、學習記憶功能減退等一系列腦功能減退現(xiàn)象5。我們用AlCl3造成了動物記憶功能障礙，腦組織Cer中AchE含量增高的擬癡呆大鼠動物模型，用中藥NYQ進行治療，從實驗結果可看出NYQ可改善癡呆大鼠的記憶功能，并可對抗因AlCl3引起的腦AchE含量升高，進而改善癡呆大鼠膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)功能低下的癥狀；老年小鼠服用NYQ后，動物的學習記憶功能明顯

15、改善，腦Cer中M-受體Rt值明顯升高。文獻報道中藥益智作用機理主要與提高老年小鼠腦M受體Rt值、衰老模型小鼠Cer中單胺類遞質(zhì)含量6及降低擬癡呆大鼠Cer中AchE活性、衰老模型小鼠腦MAO-B活性7有關，從而達到改善腦功能，延緩腦細胞衰老，增強記憶的目的，與中藥NYQ具有健腦益智作用相吻合。 基金項目：國家醫(yī)藥管理局青年科研基金資助課題(95-Q-09) 作者單位：黃世福梁啟勇：安徽省藥物研究所，合肥230022；陳勤夏宗勤：上海第二醫(yī)科大學細胞調(diào)控研究室，上海200025 參考文獻： 1李儀奎.中藥藥理實驗方法學M.上海：上?？茖W技術出版社，1991.173. 2倪正新.腦膽堿酯酶Ellman測定法的改良J.南通醫(yī)學院學報，1990；10(3)：235. 3張均田，齋藤洋.十二種化學藥品破壞小鼠被動回避性行為跳臺試驗和避暗試驗作用的比較觀察J.藥學學報，1986；21(1)：12. 4胡雅兒，易寧育，夏宗勤，等.用放射配基