人參皂苷Rg1對(duì)慢性腦缺血致癡呆大鼠BDNF及受體TrKB表達(dá)的影響2

1、 慢性腦缺血是臨床上常見(jiàn)的腦損傷之一，是阿爾茨海默?。ˋlzheimer disease，AD）、血管性癡呆（Vascular dementia，VD）和Binswanger（皮層下動(dòng)脈硬化性腦病）病等多種疾病發(fā)展過(guò)程中的一個(gè)共同病理過(guò)程。發(fā)病早期以認(rèn)知功能損害為主要表現(xiàn)，可構(gòu)成持久或進(jìn)展性的認(rèn)知與神經(jīng)功能障礙的病理生理學(xué)基礎(chǔ)。 BDNF（腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子）為神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族中的一種，在神經(jīng)元損傷后再生修復(fù)和防止神經(jīng)細(xì)胞退行性變等多方面發(fā)揮重要作用。 異常的BDNFmRNA表達(dá)可能引起神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)不足并進(jìn)一步帶來(lái)認(rèn)知方面的障礙。 人參的主要成分是人參皂苷。人參皂苷Rg1是皂苷的主要成分之一，具

2、有如下作用： 1. 人參皂苷Rg1抗氧化機(jī)制. 2. 人參皂苷Rg1抗凋亡機(jī)制。 3. 人參皂苷Rg1能夠促進(jìn)Ach（乙酰膽堿）釋放，神經(jīng)末梢重新攝取Ach。 4. 人參皂苷Rg1可以對(duì)tau蛋白的過(guò)度磷酸化產(chǎn)生影響。 1.研究目標(biāo)研究目標(biāo) 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)永久性結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈（2VO）制作出慢性腦缺血致癡呆的動(dòng)物模型，經(jīng)人參皂苷Rg1治療一至四個(gè)月后觀察大鼠的行為學(xué)變化及海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)BDNF（腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子）及受體TrKB（酪氨酸激酶受體B ）表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，探討人參皂苷Rg1對(duì)慢性腦缺血致癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用。 2.研究?jī)?nèi)容研究?jī)?nèi)容 2.1慢性腦缺血的動(dòng)物模型的

3、制備 2.2學(xué)習(xí)記憶能力的測(cè)定 2.3組織病理學(xué)測(cè)定 2.4 BDNF(腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子)及受體TrKB（酪氨酸激酶受體B ）的免疫組織化學(xué)測(cè)定 2.5 RT-PCR 2.6 western blot（蛋白質(zhì)印跡 ） 1. 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈（2VO）制作出慢性腦缺血的動(dòng)物模型。是研究慢性腦缺血致癡呆的理想動(dòng)物模型。 2. Morris水迷宮法進(jìn)行大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的行為學(xué)測(cè)定。定位航行實(shí)驗(yàn)：反映動(dòng)物空間記憶的獲得情況?？臻g探索實(shí)驗(yàn)：反映記憶的保持能力。 3. 首次研究了人參皂苷Rg1對(duì)認(rèn)知功能及神經(jīng)可塑性有重要作用的BDNF-TrKB信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響。1.動(dòng)物模型制備通過(guò)永久

4、性結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈（2VO）制作出慢性腦缺血的動(dòng)物模型。假手術(shù)組除不結(jié)扎、不剪斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈外，其余過(guò)程與手術(shù)組及治療組相同。2.給藥方式：Rg1治療組給予腹腔內(nèi)注射Rg1（5mg/kg），每天一次，連續(xù)注射。正常組、假手術(shù)組、模型組給予每日腹腔內(nèi)注射生理鹽水1毫升。3.學(xué)習(xí)記憶能力的測(cè)定利用Morris水迷宮方法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)（術(shù)后1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月）各組大鼠（正常組、假手術(shù)組、模型組、Rg1治療組）的學(xué)習(xí)記憶功能；術(shù)前各組大鼠先進(jìn)行訓(xùn)練，測(cè)試程序?yàn)槎ㄎ缓叫性囼?yàn)和空間探索試驗(yàn)。4.組織病理學(xué)測(cè)定通過(guò)HE染色，光鏡觀察各組大鼠海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)的組織病理學(xué)變化。 5.免疫組

5、織化學(xué)檢測(cè) 免疫組化染色方法采用免疫組織化學(xué)方法連續(xù)檢測(cè)各組、各時(shí)間點(diǎn)大鼠海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)的BDNF及受體TrKB的表達(dá)變化。測(cè)定陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),進(jìn)行定性和定量分析。 6. RT-PCR TRIZOL試劑提取取視交叉后4mm處至小腦的腦組織的總RNA，設(shè)計(jì)BDNF和TrKB特異性引物，用beta-acting作為內(nèi)參探討各組織中相關(guān)蛋白在mRNA水平的表達(dá)情況western blot 視交叉后4mm處至小腦的腦組織的總蛋白，行SDS-PAGE電泳，專膜至硝酸纖維膜，利用BDNF和TrKB特異性抗體，用beta-acting作為內(nèi)參探討相關(guān)蛋白在蛋白水平的表達(dá)情況。計(jì)劃一年半內(nèi)完成本項(xiàng)目的研究

6、2013年3月-2013年5月（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇（2）分組前Morris水迷宮定向航行試驗(yàn)和空間探索試驗(yàn)（3）行2VO術(shù)完成慢性腦缺血大鼠的模型制備2013年5月-2013年7月（1）分組后Morris水迷宮定向航行試驗(yàn)和空間探索試驗(yàn)（2）繼續(xù)飼養(yǎng)至慢性腦缺血后4個(gè)月2013年8月-2014年3月處死大鼠取腦組織進(jìn)行如下檢測(cè)：（1）組織病理學(xué)觀察（2）免疫組織化學(xué)檢測(cè)（3）RT-PCR檢測(cè)和western blot檢測(cè)2014年4月-2014年6月對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，對(duì)治療效果進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，并進(jìn)一步改進(jìn)。上述研究進(jìn)程將根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整9、 人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2022-3

7、-62022-3-6Sunday, March 06, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022-3-62022-3-62022-3-63/6/2022 8:08:27 PM11、人總是珍惜為得到。2022-3-62022-3-62022-3-6Mar-226-Mar-2212、人亂于心，不寬余請(qǐng)。2022-3-62022-3-62022-3-6Sunday, March 06, 202213、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來(lái)懲罰自己。2022-3-62022-3-62022-3-62022-3-63/6/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年3月6日星期日2022-3-6202

8、2-3-62022-3-615、一個(gè)人炫耀什么，說(shuō)明他內(nèi)心缺少什么。2022年3月2022-3-62022-3-62022-3-63/6/202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022-3-62022-3-6March 6, 202217、一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。2022-3-62022-3-62022-3-62022-3-6 研究工作基礎(chǔ)：本項(xiàng)目組的成員長(zhǎng)期從事神經(jīng)病研究工作基礎(chǔ)：本項(xiàng)目組的成員長(zhǎng)期從事神經(jīng)病學(xué)，內(nèi)分泌學(xué)、生物化學(xué)等方面的工作，均具有學(xué)，內(nèi)分泌學(xué)、生物化學(xué)等方面的工作，均具有碩士學(xué)位，能夠從各方面為本項(xiàng)目提供了技術(shù)與碩士學(xué)位，能夠從各方面為本項(xiàng)目提供了技術(shù)與理論的支持。理論的支持。 現(xiàn)有條件：現(xiàn)有條件：黑龍江省醫(yī)院和吉林大學(xué)第一醫(yī)院可為本試驗(yàn)提供石蠟切片機(jī)、