破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基主要原材料的替代研究.docx

1、論著破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基主要原材料的替代研究曹玲，楊海珍,孫一玫，李國(guó)晏，謝澎蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司甘肅省疫苗工程技術(shù)研究中心，甘肅蘭州730046摘要：目的探索用干粉狀的肝浸粉、映骼腺、麻蹤代替?zhèn)鹘y(tǒng)破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基中使用的豬肝水透析外液、胰酶酪蛋白消化液、濃腺水,以滿足規(guī)?；a(chǎn)的需求。方法與傳統(tǒng)的破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基同時(shí)用于破傷風(fēng)類毒素的生產(chǎn)過(guò)程，由小批故生產(chǎn)逐步轉(zhuǎn)化到規(guī)模化批髭生產(chǎn),經(jīng)多批次試驗(yàn).以檢測(cè)不同組分制備的培養(yǎng)基各生化指標(biāo)和接種細(xì)菌后培養(yǎng)的產(chǎn)毒水平進(jìn)行比對(duì)。先確定肝汲粉可以取代豬肝水透析外液，在此基礎(chǔ)上徘選出代替濃豚水的脫豚，再以待用的胰酪豚配合肝浸粉、月示盼r制備

2、多批次不同生產(chǎn)量的破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基。結(jié)果經(jīng)過(guò)多批次小批擴(kuò)大到批域規(guī)模化生產(chǎn)的試驗(yàn)，用肝溪粉、胰酪豚、豚豚配制的破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基與傳統(tǒng)工藝制備的破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基相比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)o結(jié)論肝浸粉、胰酪腺、月示陳可以替代傳統(tǒng)破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基中的豬肝水透析外液、胰醐酪蛋白消化液、濃豚水.適用于破傷風(fēng)類毒素的規(guī)模化生產(chǎn)。關(guān)鍵詞:培養(yǎng)基;破傷風(fēng)梭狀芽胞桿菌;原材料中圖分類號(hào)：K378.8*!文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.13309/j.enki.pmi.2014.01.007ThereplacementofmainmaterialsforcultureofClostri

3、dium.tetaniinatoxinproductionmediumCAOling,YANGHai-zhen,SUNYi-mei,UGuo-yan,XIEPengLanzhouInstituteofBiologicalProductsCo.,Ltd.,CenterforGansuProvincialVaccineEngineeringResearch,Lanzhou730046,GansuProvince,ChinaCorrespondingauthor:UGuo-yan,E-mail:1)6001Abstract:ObjectiveToexploreusingdrypowderedlive

4、rextractpowder,trypticase,andpeptoneasmainmaterials,itistheneedforlarge-scaleproduction,preparationwascarriedoutforthemediumproductionoftetanustoxininsteadofthetraditionalmediumcontainedliverextracellularfluid,trypsindigestiunofcaseinandconcentratedpeptonewater.MethodsThepreparedrnideaandthetraditio

5、nalmediawerex)山usedinproductionprocessoftetanustoxin,fromasimpleprocedure(oalargescalegradually,differentcomponentsoftheculturemediumwerechangedbythemulti-batchexperimentsandinoculatebacterialseeds,andculturedtoxinproductionlevelswereobtainedandcompared,sodidforindexofbiochemicalstandard.Firstly,ont

6、hebasisofthereplacementofliverextractpowdertotheextradialysisfluid,thenselectionpeptone(oreplaceconcentratedpeptonewaterwascarriedout.Incombinationofthesethreematerialsinatoxinproductionmedium,comparativetestswereperfonnedinbothofmedia.ResultsSeveraltestsarecompleted,fromasmallcapacitytoaproductionp

7、rocess,thebiochemistryindexesareobtainedinmediaaftercultivationofbacteria.Inpreparationoftoxin,themediumconlainedliverextractpowder,irj-pticaseandpeptonewascomparedtothetraditionalmedium,ithasnostatisticalsignificantdifference(P>0.05)inbothmedia.ConclusionsTheliverextractpowder,trypticase,andpept

8、onecanreplacetheliverextra-dialysisfluid,trypsindigestionofcaseinandconcentratedpeptonewaterinthetraditionalmediuminpreparationoftetanustoxininanindustrialproduction.Keywords:Medium,Clostridium,tetani,Rawmaterial破傷風(fēng)梭狀芽胞桿菌(Clostridium,tetani,以下簡(jiǎn)稱為破傷風(fēng)桿菌)是一種革蘭陽(yáng)性厭氧芽胞桿作者簡(jiǎn)介：我玲，醫(yī)學(xué)生物學(xué)工程師，主要從事細(xì)詢性疫苗培養(yǎng)基配方選擇及制備

9、工作。通訊作者：李國(guó)晏.E-mail：S偵)01菌，是破傷風(fēng)(Tetanus)的病原菌。它侵入傷口內(nèi)繁殖、分泌內(nèi)毒素旦引起急性的特異性感染，主要表現(xiàn)為全身或局部肌肉的持續(xù)性收縮和陣發(fā)性痙攣。1962年,Latham開(kāi)發(fā)出了適合破傷風(fēng)芽胞桿菌生長(zhǎng)的半合成培養(yǎng)基，此培養(yǎng)基含有胰酶消化酪蛋白，至今仍廣泛使用。目前使用的干酪素胰酶消化液(胰酪消化液）和牛肉胃酶消化液（濃腺水）為主的基礎(chǔ)液，是破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基的氮源主要原材料，配合使用的豬肝水透析外液是提供破傷風(fēng)桿菌生長(zhǎng)所需要的生長(zhǎng)因子和微量元素。這些基礎(chǔ)液都是自制、以液體形式保存，每次制備費(fèi)時(shí)費(fèi)力、制備量有限，僅能滿足傳統(tǒng)玻璃立瓶培養(yǎng)的需要。隨著新

10、技術(shù)的開(kāi)發(fā)應(yīng)用，破傷風(fēng)類毒素的需求量逐步急劇增加，迫使傳統(tǒng)的生產(chǎn)工藝發(fā)生改變，由玻璃立瓶培養(yǎng)轉(zhuǎn)變?yōu)榘l(fā)酵罐培養(yǎng)，制備的一批基礎(chǔ)液難以滿足規(guī)模化連續(xù)批量發(fā)酵罐培養(yǎng)的要求。從2008年起，嘗試用新的原材料替代生產(chǎn)中原來(lái)使用的培養(yǎng)基組分。1材料與方法11材料20%胰酪消化液,濃豚水，豬肝水透析外液，胰酪K（OXOID,Solabia），月示豚（BD）,脫豚（NZP）,肉豚（NZP）,肉豚（美國(guó)），肝浸粉，磷酸氫二鈉，磷酸二氫鉀，結(jié)晶乙酸鈉，硫酸鎂，葡萄糖，甘油，氯化高鐵,B族維生素（B】、B2、B6、BQ,尿嗟嚏,泛酸鈣，煙酸，無(wú)水乙醇，鹽酸，注射用水等。12儀器培養(yǎng)基制備罐（1200LJOOL）,發(fā)

11、酵罐（1200L、500L、300L）,玻璃立瓶，電子天平,pH計(jì)，量筒，量杯，吸管等。1.3方法131培養(yǎng)基的制備方法先在培養(yǎng)基制備罐中注入適量注射用水，根據(jù)破傷風(fēng)培養(yǎng)基的氨基氮含量的要求,控制基礎(chǔ)液或主要原材料中的氮源，精確計(jì)算稱量后,加入培養(yǎng)基制備罐中，加熱并充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?逐一加入其他各項(xiàng)材料,充分?jǐn)嚢杈鶆蛑镣耆芙猓{(diào)節(jié)pH值至所需，加熱煮沸，復(fù)調(diào)pH值至所需，補(bǔ)充注射用水至制備總量，攪拌均勻，過(guò)濾，濾液注入玻璃立瓶或發(fā)酵罐中，經(jīng)高壓滅菌后使用。L3.2破傷風(fēng)產(chǎn)毒培養(yǎng)基的質(zhì)量檢測(cè)方法主要檢測(cè)項(xiàng)目為：氨基氮含量"】，總氮含量l21,pH值,Fe，,含量。1.3.3破傷風(fēng)桿

12、菌產(chǎn)毒方法注入玻璃立瓶或發(fā)酵罐中經(jīng)高壓滅菌后的培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)至所需溫度，接種破傷風(fēng)桿菌，經(jīng)培養(yǎng)并檢測(cè)其產(chǎn)毒水平。1.3.4破傷風(fēng)毒素的檢測(cè)方法按文獻(xiàn)5方法進(jìn)行。1.3.5破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基中主要原材料的替換試驗(yàn)破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基中肝浸粉替代豬肝水透析外液的試驗(yàn)。在破傷風(fēng)產(chǎn)毒培養(yǎng)基中，豬肝水透析外液提供破傷風(fēng)桿菌生長(zhǎng)所需要的生長(zhǎng)因子和微量元素，所起的作用比較容易用其他相似產(chǎn)品替代。首先將豬肝水透析外液用經(jīng)試驗(yàn)后的肝浸粉替代，再對(duì)胰酪消化液和濃豚水做替換試驗(yàn)。用胰酪消化液和濃豚水作基礎(chǔ)液，分別以豬肝水透析外液和肝浸粉制備培養(yǎng)基，在裝有培養(yǎng)基的玻璃立瓶和發(fā)酵罐中同時(shí)接種破傷風(fēng)桿菌進(jìn)行培養(yǎng)，與用豬肝

13、水透析外液和肝浸粉制備的培養(yǎng)基培養(yǎng)的破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒水平相比較,以探索肝浸粉能否替代豬肝水透析外液。破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基中豚豚的選擇和脈豚替代濃豚水的試驗(yàn)。確定用肝浸粉代替豬肝水透析外液后，在保證培養(yǎng)基中其他組分不變及不加入濃豚水的條件下，使用商品化的干粉豚類產(chǎn)品制備培養(yǎng)基，同時(shí)接種破傷風(fēng)桿菌進(jìn)行培養(yǎng)。對(duì)待選的美國(guó)肉豚、NZP肉豚和脈肱X所配制的培養(yǎng)基進(jìn)行生化檢測(cè)和破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒水平的分析，選擇其中可用的肱類產(chǎn)品。破傷風(fēng)產(chǎn)毒培養(yǎng)基中胰酪肱代替胰酶酪蛋白消化液的試驗(yàn)。選用某品牌的胰酪豚，以期代替自制的胰酶酪蛋白消化液。在其他組分不變時(shí),配合不同的豚類產(chǎn)品，制備不同組別的破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基,同時(shí)接

14、種培養(yǎng)破傷風(fēng)桿菌。對(duì)所配制的培養(yǎng)基進(jìn)行生化檢測(cè)和破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒水平的分析，以確定所選用的胰酪腺能否可用于制備其細(xì)菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基,并確定配合使用最佳的豚類產(chǎn)品。主要原材料置換后小量破傷風(fēng)產(chǎn)毒培養(yǎng)墓的生化檢測(cè)和其培養(yǎng)的產(chǎn)毒水平。用選定品牌的肝浸粉、胰酪腺、脈豚作主要原材料，配合培芥基中的其他組分，制備小量（54L）破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基以及與同期的傳統(tǒng)培養(yǎng)基（540L）,接種破傷風(fēng)桿俯。檢測(cè)其培養(yǎng)基的生化指標(biāo)和破傷風(fēng)桿前的產(chǎn)毒水平。主要原材料置換后擴(kuò)大制備量的破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基的生化檢測(cè)和其培養(yǎng)產(chǎn)毒水平。用選定的肝浸粉、胰酪豚、豚豚作主要原材料，配合培養(yǎng)基中的其他組分，制備500L破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)

15、基及同時(shí)生產(chǎn)傳統(tǒng)培養(yǎng)基540L,接種破傷風(fēng)桿菌。檢測(cè)培養(yǎng)基的生化指標(biāo)和其細(xì)筋產(chǎn)毒水平。2結(jié)果2.1破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基中肝浸粉替代豬肝水透析外液的試驗(yàn)結(jié)果從表1中可以看出，組1和組3中相同菌種分別接種相同培養(yǎng)基的大罐和立瓶培養(yǎng)，由于兩種生長(zhǎng)環(huán)境不同,大罐培養(yǎng)產(chǎn)毒水平高于立瓶;組2、組3用肝浸粉代替豬肝水透析外液進(jìn)行立瓶培養(yǎng),產(chǎn)毒水平與組】用豬肝水透析外液作原料的培養(yǎng)后產(chǎn)毒差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；組3用肝浸粉代替豬肝水透析外液進(jìn)行逐步放大量的大罐培養(yǎng),產(chǎn)毒水平與組1和組2用豬肝水透析外液作原料的培養(yǎng)后產(chǎn)毒差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。從以上數(shù)據(jù)中可以得出，在培養(yǎng)基的原材

16、料中，用肝浸粉可以替代自制的豬肝水透析外液。表1肝浸粉替代豬肝水透析外液的試驗(yàn)結(jié)果Tab.!Replacementofliverextractpowdertopigliverextra-dialysisfluid組別制備域生產(chǎn)批次肝浸粉豬肝水透析外液產(chǎn)毒(x±s)(U/mL)1大瓶(60L)9無(wú)有45.00±15.81大罐(60L)18無(wú)有64.66±17.88大瓶(60L)12有無(wú)67.08±10.332大罐（60L）20無(wú)有91.32±14.51大瓶(60L)8有無(wú)52.50±10.61大罐（60L）8有無(wú)75.00±)

17、7.323大罐（120L）6有無(wú)68.23±18.37大碾(300L)6有無(wú)71.89±19.32大罐(700L)6有無(wú)81.67±17.592.2破傷風(fēng)產(chǎn)毒培養(yǎng)基中豚腺的選擇試驗(yàn)從表2中可以看出，不使用族類氮源的培養(yǎng)基，破傷風(fēng)桿菌不產(chǎn)毒，在待選用的豚類中，美國(guó)肉豚較NZP肉腺和脈豚X,雖然生化檢測(cè)結(jié)果基本上無(wú)差異，但是單獨(dú)使用美國(guó)肉豚的培養(yǎng)基破傷風(fēng)桿菌不產(chǎn)毒,NZP肉豚和脈豚X可用于進(jìn)一步的試驗(yàn)中。表2破傷風(fēng)產(chǎn)毒培養(yǎng)基中脆豚的選擇試驗(yàn)結(jié)果Tab.2Theresultsofpeptoneselectiontestsfortetanustoxinproduction

18、medium組別批次濃凍水豚類培養(yǎng)基生化檢測(cè)G）產(chǎn)毒G)(Lf/mL)TN(mg/mL)AN(mg/mL)PHFe”(|xg/mL)12無(wú)無(wú)0.120.086.930.06不產(chǎn)毒22有無(wú)1.890.837.030.4642.2134無(wú)美國(guó)肉豚2.210.897.010.48不產(chǎn)毒43無(wú)NZP肉豚2.340.876.930.6640.4653無(wú)脈豚X2.140.827.030.3641.672.3破傷風(fēng)產(chǎn)毒培養(yǎng)基中胰酪蹤代替胰酪消化液的試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果表明，未使用胰酪豚作氮源的培養(yǎng)基，破傷風(fēng)桿菌不產(chǎn)毒，在待選用的胰酪豚中，二者的產(chǎn)毒水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（尸>0.05）。以待選用的兩種胰酪腺與胰

19、酪消化液分別制備培養(yǎng)基培養(yǎng)破傷風(fēng)桿菌，產(chǎn)毒水平前者明顯高于后者。表明兩種待選用的胰酪豚都可替代胰酪消化液作為制備培養(yǎng)基的原材料，見(jiàn)表3。2.4主要原材料替代后小量破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基的生化檢測(cè)和其培養(yǎng)后的產(chǎn)毒水平試驗(yàn)結(jié)果顯示,用選定的肝浸粉、胰酪豚和脈腌制備的小量培養(yǎng)基,及用傳統(tǒng)的豬肝水透析外液、胰酪消化液和濃豚水制備的培養(yǎng)基，經(jīng)生化檢測(cè)和其培養(yǎng)破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒水平的結(jié)果相比，二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）,見(jiàn)表4。2.5主要原材料替代后擴(kuò)大破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基制備量的生化檢測(cè)和其培養(yǎng)的產(chǎn)毒水平從表5可以看出，在制備量擴(kuò)大的情況下，用選定的肝浸粉、胰酪腺和廊豚的培養(yǎng)基及用傳統(tǒng)的豬肝水

20、透析培養(yǎng)破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒水平的結(jié)果相比，.二者差異無(wú)統(tǒng)外液、胰酪消化液和濃腺水培養(yǎng)基，經(jīng)生化檢測(cè)和其計(jì)學(xué)意義(P>0.05),可以用于破傷風(fēng)桿萌的培養(yǎng)。衰3破傷風(fēng)產(chǎn)毒培養(yǎng)基中胰骼豚的選擇試驗(yàn)Tab.3TlieresultsofselectionIryplicasctestsfortetanustoxinproductionmedium組別批次胰潞消化液胰慌陳12X無(wú)28有無(wú)35無(wú)0X01D46無(wú)SolabiaTN(mg/mL)AN(mg/mL)pHFe"(成mL)0.120.086.930.06不產(chǎn)密2.480.847.010.7150.64*18.563.070.976.970

21、.1470.54±12.333.231.027.090.3668.85±16.15培養(yǎng)基生化檢測(cè)G)產(chǎn)毒G)表4小量破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基生化檢測(cè)和其培養(yǎng)后的產(chǎn)毒水平Tab.4Biochemicalindexesandlevelsofloxinpreparedinmediumcontainednewmaterialsinasmallscaleproduction原材料培養(yǎng)基生化檢測(cè)(*)產(chǎn)毒(*)制備批次,TN(mgZmL)AN(mg/mL)pHFe(g,g/mL)(II/tnL)傳統(tǒng)法制務(wù)的培養(yǎng)基下粉制備的培養(yǎng)基484.311.077.09I.1464.43±14

22、.86302.550.886.781.0560.00±11.35Tab.5Biochemicaldetectionandlevelsoftoxinpreparedinmediumcontainednewmaterialsinalargescaleproduction表5擴(kuò)大的破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基生化檢測(cè)和其培養(yǎng)的產(chǎn)毒水平原材料.Q培養(yǎng)基生化檢測(cè)G)產(chǎn)毒(X)制備批次TN(mg/mL)AN(mg/mL)pHFe,*(p/mL)(U/mL)傳統(tǒng)法制備的培養(yǎng)基干粉制備的培養(yǎng)基484.381.117.050.8963.19±16.62483.420.946.940.9585.34&

23、#177;I3.733討論培養(yǎng)基是微生物生長(zhǎng)所需要的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)人工配制而成的一種混合基質(zhì)，用于培養(yǎng)和分離各種微生物,根據(jù)微生物種類和培養(yǎng)目的不同，培養(yǎng)基有不同的種類和制法。破傷風(fēng)類毒素的生產(chǎn)培養(yǎng)基一般采用酪蛋白、牛肉等蛋白質(zhì)在較溫和的條件下加深水解后制成基礎(chǔ)液'6)。水解程度的深淺直接影響產(chǎn)毒的高低，蛋白水解液中的肽類是促進(jìn)細(xì)榮產(chǎn)毒的主要物質(zhì)。有時(shí)補(bǔ)充牛心浸液。發(fā)酵舞培養(yǎng)的使用更進(jìn)一步提高了破傷風(fēng)類毒素的產(chǎn)最和質(zhì)最。傳統(tǒng)的破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基，一般含肉類(乳牛心浸液BHI)或乳類(酪蛋白消化液中的N-Z-CaseR或N-Z-CaseTTR)制品，其他還有葡萄糖、氨基酸、維生素、尿唆嚏

24、和無(wú)機(jī)鹽等。已經(jīng)證明，N-Z-CaseR或N-Z-CaseTTH對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)是必需的。目前使用的下酪索胰酶消化液(胰酪消化液)和杓酶牛肉消化液(濃豚水)是作為破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基氮源的主要原材料，但是隨若生產(chǎn)規(guī)模的擴(kuò)大，制作一批基礎(chǔ)液已經(jīng)不能保證生產(chǎn)的連續(xù)多批次使用。為解決上述問(wèn)題，從2008年開(kāi)始將破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基的主要原材料胰酪消化液、濃豚水、豬肝水透析外液用商品化的類似原材料代替。先保持胰酪消化液、濃豚水和其他組分不變，嘗試應(yīng)用肝浸粉替代豬肝水透析外液，并從培養(yǎng)基制備量小(60L)逐步擴(kuò)大到制備量為12()L、3()0L、700L各6批，通過(guò)生化檢測(cè)和破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒水平試撿，同時(shí)用豬肝

25、水透析外液的培養(yǎng)基接種破傷風(fēng)桿菌的產(chǎn)毒水平進(jìn)行對(duì)比，其結(jié)果顯示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，用肝浸粉可以替代豬肝水透析外液。接智嘗試應(yīng)用胰酪蹤替代胰酪消化液制備破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基11批,試驗(yàn)生產(chǎn)量為18L,同時(shí)以胰酪消化液和濃豚水為基礎(chǔ)液的培養(yǎng)基540L,對(duì)其生化指標(biāo)質(zhì)量控制和接種破傷風(fēng)桿菌的產(chǎn)毒情況進(jìn)行了比較;2009年，用胰酪腺和不同的脈豚作試驗(yàn)培養(yǎng)基，同時(shí)用胰酪消化液和濃豚水為基礎(chǔ)液的培養(yǎng)基540-670L,對(duì)質(zhì)量控制牛.化指標(biāo)和細(xì)菌產(chǎn)毒情況進(jìn)行了對(duì)比，選擇出一種口J用的腕豚以替代原來(lái)的濃豚水;2010年匕半年街種用培養(yǎng)基沿用傳統(tǒng)的原材料配制，試驗(yàn)選用胰酪肱和所腺制備破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基制備

26、量54L30批次，同時(shí)使用胰酪消化液和濃豚水為基礎(chǔ)液進(jìn)行質(zhì)M控制和破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒水平對(duì)比;2010年下半年菌種用培養(yǎng)基選用胰酪豚和豚腺，試驗(yàn)選用胰酪豚和月示腺制備破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基,制備量依次為36、72.500和520L各3批次逐漸擴(kuò)大，檢測(cè)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制生化指標(biāo)和產(chǎn)毒情況進(jìn)行試驗(yàn)，完成從小技到大量的原材料替代試驗(yàn)。而2012年，選用的胰酪豚和脈豚替代傳統(tǒng)自制的胰酪消化液和濃豚水制備破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒培養(yǎng)基，大罐制備量為500L共48批次,其培養(yǎng)基檢測(cè)的各項(xiàng)生化指標(biāo)穩(wěn)定，產(chǎn)毒能力良好，表明肝浸粉、胰酪腺和脈腺替代傳統(tǒng)原材料制備的培養(yǎng)基易于生化指標(biāo)的質(zhì)量控制，可適用于破傷風(fēng)桿菌產(chǎn)毒規(guī)模化的生產(chǎn)

27、。參考文獻(xiàn)國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)坊典（三部）（s.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社.2010：MA氮測(cè)定法：附錄33.1 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（三部）S?.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010：VIB蛋門質(zhì)測(cè)定法：附錄34-35.2 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（三部）S.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010；VApH值測(cè)定法:附錄25-26.國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)街典（二部）SJ.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社.2010：llG鐵鹽檢查法:附錄57-58.5 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（三部）S.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版tt.2010：XID類毒素絮狀單位測(cè)定法:附錄82.6 趙鎧,章以浩，李河民.醫(yī)學(xué)生物制品學(xué)S.2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2007:697-7（）2.*7DemainAL.GersonDF,FangA.Effectivelevelsoftet