豬瘟重組疫苗的研究進(jìn)展.docx

1、豬瘟重組疫苗的研究進(jìn)展袁遠(yuǎn)，楊文輝(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所.黑龍江哈爾濱150001；2.哈爾濱北方森林動(dòng)物園動(dòng)物醫(yī)院，黑龍江哈爾濱】50300)摘要：豬瘟是嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)一種重要傳染病.弱毒疫苗的應(yīng)用一定程度地控制了該病的流行與發(fā)生.但仍存在一些缺陷，新型、高效、標(biāo)記疫苗的研制一直以來(lái)成為豬瘟疫苗領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。本文對(duì)豬瘟重組疫苗領(lǐng)域取得的研究研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。關(guān)鍵詞：豬瘟病毒；疫苗；中和抗體；T細(xì)胞反應(yīng)中圖分類號(hào)：S852.65文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：0529-5130(2008)09-0100-05豬瘟(classicalswinefever,CSF)被OIE認(rèn)定為烈性傳染

2、性疾病之一。它能感染家豬和野豬，從經(jīng)濟(jì)學(xué)和衛(wèi)生學(xué)的角度來(lái)看，CSF已成為對(duì)全球養(yǎng)豬業(yè)造成毀滅性損失的疾病之一。正如很多其他的疾病能夠采用疫苗免疫一樣，50多年前研制的弱毒活疫苗是目前針對(duì)豬瘟病毒(CSFV)的最有效的疫苗。雖然該弱毒活疫苗具有很高的保護(hù)率，但還是存在一些缺陷。如免疫接種的致弱活病毒誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的抗體與野毒感染動(dòng)物后產(chǎn)生的抗體類型相似,使免疫動(dòng)物和野毒感染的動(dòng)物難以區(qū)分。最近，標(biāo)記疫苗以及能區(qū)分野毒感染和疫苗接種(DIVA)的疫苗的研究成功打破了這種窘境。隨著診斷手段與工具的改進(jìn)，盡管人們?cè)谛滦秃透踩臉?biāo)記疫苗研制方面做了不少努力，但是豬瘟疫苗的研制仍需進(jìn)一步加強(qiáng)。本文對(duì)當(dāng)前豬

3、瘟疫苗研究領(lǐng)域的一些相關(guān)進(jìn)展進(jìn)行了綜述。1豬感染CSFV誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)了解CSFV與豬免疫系統(tǒng)之間的相互作用及其在致病機(jī)制中的功能是設(shè)計(jì)新的抗病毒策略的關(guān)鍵點(diǎn)。幾十年前的研究成果表明CSFV具有破壞淋巴樣濾泡的能力，且感染的主要靶細(xì)胞是單核巨噬細(xì)胞系的骨髓細(xì)胞(SWC3*；SWC8-)。有趣的是，雖然CSFV不易感染成熟的粒性白細(xì)胞(SWC3；SWC8)，但卻能感染未完全分化的骨髓祖細(xì)胞(SWC3、；SWC8-),從而解釋了CSFV出現(xiàn)在外周血成熟的SWC8*細(xì)胞的原因。和其他嚴(yán)重的出血性疾病一樣，CSFV也可感染內(nèi)皮細(xì)胞，對(duì)這些細(xì)胞病理?yè)p傷在CSFV發(fā)病中似乎發(fā)揮關(guān)鍵的作用，各種CSFV發(fā)病

4、的臨床癥狀中以微血栓、彌散性血管內(nèi)凝固和纖維蛋白溶解最為典型。雖然CSFV感染內(nèi)皮細(xì)胞能抑收稿日期：2008-03-26作者簡(jiǎn)介：袁遠(yuǎn)(1972-).男，助理研究員。制干擾素和細(xì)胞凋亡的產(chǎn)生，但也能誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生。CSFV利用巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞(DCs)的遷移能力彌散全身。在感染細(xì)胞內(nèi)的抗凋亡途徑的激活能確保病毒的存活，而可溶性促炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子的表達(dá)誘導(dǎo)并促進(jìn)了感染細(xì)胞周圍的健康細(xì)胞的凋亡，因而逃避了對(duì)感染細(xì)胞的識(shí)別。最近的研究結(jié)果表明CSFV不僅能通過分泌細(xì)胞因子,還能通過其他機(jī)制來(lái)誘導(dǎo)免疫抑制，如表達(dá)CSFV結(jié)構(gòu)蛋白Ems蛋白，該蛋白在體外對(duì)T淋巴細(xì)胞已顯示毒性作用。CSFV也

5、能激活T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子,如IL-10,該細(xì)胞因子可能在CSF感染后的免疫抑制中起關(guān)鍵作用。鑒于CSFV逃避免疫反應(yīng)的能力，我們必須制定控制感染和阻止CSFV介導(dǎo)免疫逃避的免疫策略。如上所述，CSF是一種以高死亡率為特征的毀滅性疾病，依據(jù)毒株毒力和感染豬群的免疫狀況的差異，感染所造成的顯著免疫抑制能夠在機(jī)體的免疫系統(tǒng)被激活之前較早的導(dǎo)致一部分感染動(dòng)物的死亡；而一些動(dòng)物能借助自身的保護(hù)性免疫反應(yīng)抵抗病毒的感染，從而對(duì)后來(lái)的再感染產(chǎn)生保護(hù)作用，以保護(hù)其他動(dòng)物群體)。在某些情況下，免疫反應(yīng)不足以把CSFV從動(dòng)物體內(nèi)清除，導(dǎo)致CSFV在宿主體內(nèi)能夠持續(xù)存在，在有中和抗體存在的情況下能建立慢性感染；反之

6、，先天感染CSFV能導(dǎo)致動(dòng)物的持續(xù)感染，但其不能產(chǎn)生特異性抗體，這可能是在胎兒的淋巴細(xì)胞分化期間產(chǎn)生免疫耐受的結(jié)果。CSFV在動(dòng)物體內(nèi)的持續(xù)存在及誘導(dǎo)的慢性感染，對(duì)我們進(jìn)一步弄清病毒與免疫細(xì)胞的相互作用機(jī)理以及哪些特異性免疫反應(yīng)是具有保護(hù)功能有一定的作用。最新研究表明，CSFV感染后721d,甚至在中和抗體產(chǎn)生之前，感染豬就能誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性CD4*T細(xì)胞和毒性T淋巴細(xì)胞(CTL),這種特異性的CTLs主要識(shí)別CSFV的結(jié)構(gòu)性E2蛋白和非結(jié)構(gòu)性NS3蛋白，這些結(jié)果和先前的發(fā)現(xiàn)即在NS3和NS4病毒蛋白之間具有一個(gè)CTL表位是一致的。有研究表明豬的一些白細(xì)胞抗原（SLA）I型和II型肽，其中大部分

7、錨定NS3多肽和結(jié)構(gòu)性E2蛋白。因此，感染動(dòng)物持續(xù)散毒是新的CSF爆發(fā)的潛在源頭，而且對(duì)疾病的診斷帶來(lái)了新的挑戰(zhàn)。2抗CSFV的疫苗策略CSFV的經(jīng)典疫苗盡管早期的CSFV滅活疫苗不能有效地抵抗病毒感染,但是CSFV弱毒疫苗已被證實(shí)能有效預(yù)防豬瘟的發(fā)生1成。第一次用兔化弱毒疫苗接種試驗(yàn)是60多年前進(jìn)行的，至今這個(gè)領(lǐng)域的進(jìn)展并不十分明顯。CSFV弱毒疫苗不但安全，而且即使懷孕母豬，在免疫5d后也能產(chǎn)生高水平的中和抗體，并對(duì)豬瘟強(qiáng)毒的攻擊提供保護(hù)，在CSF仍然流行的地區(qū)，應(yīng)用弱毒疫苗仍然是控制該病的重要措施之一。CSFV弱毒株介導(dǎo)的免疫保護(hù)機(jī)制尚未完全清楚。在中和抗體產(chǎn)生之前，免疫動(dòng)物就獲得了保護(hù)

8、，這一點(diǎn)已經(jīng)被證實(shí)。在免疫接種C株CSFV后的第12天就能檢測(cè)到抗體，在2884d內(nèi)到達(dá)高峰。豬群在一次免疫后產(chǎn)生的抗體有可能使其獲得終身保護(hù)3）。中和抗體在對(duì)CSFV免疫保護(hù)中和具有重要作用，而一些研究表明抗體滴度和免疫保護(hù)之間沒有必然聯(lián)系，因此除抗體以外的一些免疫反應(yīng)可能對(duì)動(dòng)物的免疫保護(hù)也起著重要作用。一般情況下，中和抗體能保護(hù)動(dòng)物免受病毒攻擊，但免疫接種后，在缺少中和抗體的情況下也能產(chǎn)生保護(hù)作用。盡管CSFV弱毒疫苗經(jīng)過證實(shí)能產(chǎn)生有效保護(hù)，但仍然存在一些缺陷。疫苗接種產(chǎn)生的抗體和自然感染誘導(dǎo)的抗體很難區(qū)分，這不利于鑒別診斷刃。而且疫苗保存和使用不當(dāng)以及疫苗免疫不能覆蓋所有易感豬群，均會(huì)導(dǎo)

9、致免疫失敗。此外，弱毒活毒苗在接種后至少15d內(nèi)能夠在淋巴器官（主要是扁桃體）內(nèi)一定程度的復(fù)制，這期間利用標(biāo)準(zhǔn)的診斷方法難以將其與野毒區(qū)分開來(lái)CSFV的新型疫苗像許多其它病毒一樣，感染性克隆平臺(tái)的建立與應(yīng)用為深入了解病毒的復(fù)制機(jī)制及致病性提供了新的機(jī)遇豬瘟病毒弱毒C株、Alfort/Tubigen.Eystrup和Brescia株感染性克隆的建立使我們明確了Ems.Npro及E2蛋白為CSFV的潛在毒力決定因子I8-,9ioCSFV反向遺傳學(xué)的信息進(jìn)一步確認(rèn)了促進(jìn)該病毒的蛋白或決定病毒毒力和宿主范圍的蛋白域。且為CSF新型疫苗設(shè)計(jì)與研制帶來(lái)了更多的思路與策略。毒力強(qiáng)的CSFV在特定的流行病學(xué)條

10、件下能演化成毒力較弱的毒株，這為研究決定病毒毒力的基因組變異，尤其是E2基因的變異提供了新的途徑【狽。這一技術(shù)使我們制造缺失E2或Ems基因的突變病毒株成為可能。這種缺失突變株只能在能反式提供缺失蛋白的感受態(tài)細(xì)胞系上生長(zhǎng)，因此將其作為疫苗是安全的。一旦接種到體內(nèi)，這些突變病毒能誘導(dǎo)較強(qiáng)的免疫反應(yīng)而不產(chǎn)生新的子代病毒，相似的策略已經(jīng)應(yīng)用到幾種通過交換來(lái)自CSFV弱毒C株和抗原性相關(guān)痕病毒的E2或Ems基因而構(gòu)建的嵌合體中、最后，因病毒復(fù)制子顆粒不具有傳播能力而逐漸成為安全性疫苗的一種選擇N】。為了更加有效,這類疫苗的構(gòu)建應(yīng)包含大部分已知能夠誘導(dǎo)CSFV細(xì)胞和體液免疫保護(hù)性決定簇的E2糖蛋白。對(duì)于

11、這類疫苗，一個(gè)值得關(guān)注的焦點(diǎn)是突變疫苗株和CSFV野毒株之間發(fā)生重組的可能性一些用來(lái)研制CSFV的DIVA疫苗的策略如通過減少病毒在動(dòng)物體內(nèi)的復(fù)制或避免病毒的胎盤傳播，已被證實(shí)其效果良好。這類疫苗在構(gòu)建過程中大部分包括全長(zhǎng)CSFVE2糖蛋白或這個(gè)蛋白的片段。E2蛋白已經(jīng)在不同的病毒載體中獲得表達(dá)，如痘苗病毒和腺病毒表達(dá)載體，或種屬特異性載體，如豬痘病毒或偽狂犬病病毒。上述研究結(jié)果表明，應(yīng)用這些載體病毒構(gòu)建的重組病毒在臨床上都能夠誘導(dǎo)有效的免疫保護(hù)？-習(xí)。牛病毒性腹瀉病毒是CSFV的抗原相關(guān)病毒，曾被用作載體表達(dá)CSFVE2蛋白，能夠誘導(dǎo)免疫保護(hù)來(lái)抵御病毒的攻擊。盡管這些疫苗具有保護(hù)性潛力，但是

12、根據(jù)病毒傳播和CSFV的胎盤傳播情況，弄清楚它們誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)和保護(hù)效率，仍有很多研究工作有待開展2.3亞單位疫苗為了滿足更新更安全的控制CSF標(biāo)記疫苗的需要，已經(jīng)采用了一些用來(lái)研制DIVA疫苗和開展輔助型診斷試驗(yàn)的方法。至今，最有效的CSF的亞單位疫苗也是基于CSFV主要E2慵蛋白而研制的。利用桿狀病毒系統(tǒng)表達(dá)E2糖蛋白的不同節(jié)段獲得一系列的重組E2蛋白，并經(jīng)證實(shí)存在不同程度的保護(hù)作用。其中免疫原性最強(qiáng)的一個(gè)為表達(dá)缺少跨膜域重組E2糖蛋白，該重組蛋白易于從桿狀病毒感染細(xì)胞上清中分泌和純化出來(lái)迄今為止，大部分的CSFVE2亞單位標(biāo)記疫苗還處于試驗(yàn)階段，只有兩個(gè)疫苗被歐洲醫(yī)療產(chǎn)品評(píng)估機(jī)構(gòu)（EME

13、A）批準(zhǔn)并商品化。這類疫苗免疫后動(dòng)物僅僅產(chǎn)生抗E2糖蛋白的特異性抗體，而野毒感染的豬卻同時(shí)能夠產(chǎn)生抗Ems蛋白的抗體，這兩種抗體利用現(xiàn)有的ELISA抗體檢測(cè)方法能夠加以區(qū)分，但是其保護(hù)效率還有待于進(jìn)一步的評(píng)估:割。與經(jīng)典的弱毒疫苗相比，盡管亞單位疫苗具有很多優(yōu)勢(shì)，但其保護(hù)效率還非常有限，尤其對(duì)懷孕母豬更是如此，且造成持續(xù)感染動(dòng)物個(gè)體存在的風(fēng)險(xiǎn)很大最后兩個(gè)原因都與缺少有效的鑒別診斷方法相關(guān)，導(dǎo)致了在自然感染情況下，這些疫苗策略作為緊急措施不能推廣應(yīng)用。首先，抗Ems蛋白的特異性抗體直到感染CSFV野毒株后2142d才產(chǎn)生（需要依據(jù)毒株毒力），這使得在疾病早期的鑒別診斷變得困難；其次，現(xiàn)有的基于E

14、蛋白的遠(yuǎn)不如基于E2蛋白的EUSA檢測(cè)方法敏感和特異）。利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，已使得開展E2慵蛋白的保護(hù)域進(jìn)一步得到定義，探索E2蛋白保護(hù)性表位的某些特征成為可能列。所有這些研究，將允許在新的疫苗構(gòu)建中添加中和性B細(xì)胞表位，以利于對(duì)免疫動(dòng)物和CSFV感染動(dòng)物的鑒別診斷。在研制新型和改進(jìn)CSF疫苗的同時(shí)，應(yīng)致力于研發(fā)能區(qū)分免疫個(gè)體和感染個(gè)體的診斷新方法。不幸的是，相比于其他的疾病，商業(yè)利益的驅(qū)使可能是新型、有效CSFV診斷方法和疫苗研發(fā)滯后的主要原因。基于E2蛋白的疫苗顯示出類似存在基于其他策略的CSF疫苗中的一些限制。有些疫苗免疫動(dòng)物不產(chǎn)生針對(duì)CSFV特異性抗體，而且保護(hù)效果和誘導(dǎo)的中和抗體之

15、間不是完全相關(guān)。對(duì)于能介導(dǎo)針對(duì)CSFV的高水平保護(hù)的新的DIVA疫苗的研究，應(yīng)該探索出新的診斷手段作為補(bǔ)充叫2.4DNA疫苗DNA免疫是近十年發(fā)展起來(lái)的最為有前途的一種疫苗策略，這類疫苗能同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫，易于生產(chǎn)，并且被證明是安全的，即使是接種含有母源抗體的新生個(gè)體也是相當(dāng)安全的J。由于它的單一性，DNA疫苗易于設(shè)計(jì)，且有可能將所表達(dá)的靶蛋白通過指定途徑導(dǎo)入機(jī)體內(nèi)，因此，DNA免疫將對(duì)理解針對(duì)某特定病原內(nèi)在的保護(hù)性免疫機(jī)制和免疫保護(hù)決定簇精確定位將是一個(gè)有價(jià)值的技術(shù)手段。大部分CSFV的DNA疫苗是基于病毒的主要免疫原性決定簇，即來(lái)自不同病毒株系的E2糖蛋白的表達(dá)。一些人報(bào)道用DN

16、A疫苗編碼全長(zhǎng)E2搪蛋白，而也有人用缺少其跨膜域的突變形式）。由于所表達(dá)E2蛋白的形式、攻毒用CSFV毒株的毒力及劑所不同，不同研究小組開展的CSFVDNA疫苗的免疫效力試驗(yàn)結(jié)果也難以進(jìn)行比較。盡管用編碼整個(gè)E2糖蛋白的DNA疫苗大劑量進(jìn)行免疫，臨床上能保護(hù)免疫豬不發(fā)生CSF,且證實(shí)其保護(hù)效果與抗CSFV的中和抗體之間不存在直接聯(lián)系。通過采用啟動(dòng)-加強(qiáng)免疫的免疫程序，即先接種DNA疫苗后免疫表達(dá)CSFVE2全長(zhǎng)蛋白的重組腺病毒，也同樣能獲得同等水平的免疫保護(hù)效果用編碼CSFV全長(zhǎng)E2糖蛋白的DNA疫苗接種動(dòng)物，在沒有中和抗體產(chǎn)生的情況下也能提供保護(hù)效果，盡管免疫動(dòng)物在CSFV攻毒之前檢測(cè)不到抗

17、體,但在攻毒后第6d可檢測(cè)到中和抗體，甚至一些免疫動(dòng)物出現(xiàn)免疫反應(yīng)增強(qiáng)現(xiàn)象。然而免疫動(dòng)物卻沒有出現(xiàn)病毒血癥，疫苗免疫提供了臨床發(fā)病和免疫抑制的保護(hù)，與針對(duì)中和抗體的誘導(dǎo)和MHCII限制型細(xì)胞免疫相關(guān)。這一研究證明了免疫反應(yīng)的其他分支，如MHCII限制型CD4*T細(xì)胞的誘導(dǎo)在抗CSFV保護(hù)方面可能起到一定的作用*坨。3小結(jié)與展望CSFV的疫苗設(shè)計(jì)是多樣的，使得我們難以確認(rèn)哪一種是最好的選擇。在不同的研究中，疫苗劑鼠、免疫次數(shù)、免疫途徑、免疫攻毒之間的時(shí)間間隔均不相同，攻毒用病毒的毒株、毒力、攻毒劑信與途徑以及用來(lái)評(píng)估疫苗效果的標(biāo)準(zhǔn)也不相同。建立常規(guī)免疫和攻毒程序和追蹤觀察標(biāo)準(zhǔn)，這些對(duì)于不同疫苗類

18、型的客觀對(duì)比和CSFV合理疫苗策略的選擇都是非常必要的。CSFV主要感染抗原遞呈細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞，巨噬細(xì)胞和DCs,且與此同時(shí)誘導(dǎo)周圍的B細(xì)胞和T細(xì)胞的旁觀者凋亡。致病力強(qiáng)的CSFV在體內(nèi)能夠演變成弱毒株，因此在病毒傳播到周圍動(dòng)物之前大大避免了感染動(dòng)物的死亡。通過用能編碼CSFV全長(zhǎng)E2糖蛋白的DNA疫苗免疫來(lái)模擬病毒感染，能有效誘導(dǎo)T細(xì)胞反應(yīng)和中和抗體產(chǎn)生，提供對(duì)CSFV攻毒的完全保護(hù)。當(dāng)評(píng)估豬瘟疫苗免疫效果的時(shí)候，除了檢測(cè)體液免疫反應(yīng)指標(biāo)外，再引入一些其他的相關(guān)指標(biāo)是可行的。在大部分已發(fā)表的CSFV疫苗研究中，尤其是那些經(jīng)典弱毒活疫苗使用過程中，中和抗體的檢測(cè)僅僅是所考慮的唯一指標(biāo)?，F(xiàn)有研

19、究結(jié)果表明T細(xì)胞反應(yīng)在一定程度上能夠抑制CSFV復(fù)制，在CSF的免疫保護(hù)中也是很重要的9Mo盡管分析T細(xì)胞免疫反應(yīng)的技術(shù)，在大部分的診斷實(shí)驗(yàn)室都沒有得到應(yīng)用，因此我們應(yīng)該努力研究開發(fā)基于細(xì)胞免疫衡量的新的診斷手段。通過ELISA、ELISPOT、淋巴增殖試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)免疫后或感染各種CSFV毒株后所誘導(dǎo)的細(xì)胞因子外形特征，在將來(lái)會(huì)成為有用的診斷技術(shù)手段。這些診斷技術(shù)的一個(gè)優(yōu)勢(shì)是它們能夠在免疫后一個(gè)很短的時(shí)間內(nèi)，甚至在抗體反應(yīng)出現(xiàn)之前即可對(duì)動(dòng)物的使免疫狀態(tài)獲得分析功。雖然在CSFV的有效重組疫苗研制過程中仍存在很多困難，但是最近在這一領(lǐng)域的研究進(jìn)展，充分顯示了此種疫苗廣闊的應(yīng)用前景。同時(shí)，抗CSFV

20、的保護(hù)性免疫原及保護(hù)機(jī)制漸漸被人們所確認(rèn)，這也將有利于設(shè)計(jì)更加新穎、更加有效的豬瘟標(biāo)記疫苗。參考文獻(xiàn)：1MoennigV,Floegel-NiesmannG,Greixr-WilkeI.ClinicalsignaandepidemiologyofclAssicalswinefever：areviewofnewknowledgeJ.TheVeterinaryJournal,2003,165:11-20.2deSmitAJ.1laboratorydiagnosis,epizootiology,andefficacyomarkervaccine#inclassicalswinefever：arevi

21、ewJ.VeterinaryQuarterly,2000,22：182-188.3vanOirschotJT.DIVAvaccinesthatreducevimstransmissionJ.JournalofBiotechnology.1999,73：195-205.4 PaulyT,KonigM.ThielHJ,etal.Infectionwithclassicalswinefevervirus：effectsonphenotypeandimmuneresponsivenessofporcineTlymphocyte#J.JournalofGeneralVirology,1998,79：31

22、-40.5 SummerfieldA,ZingleK,InumaruS,etal.Inductionofapoptosisinbonemarrowneutrophil-lineagecellsbychwicalswinefevervirusJ.Journalo(GeneralVirology,2001,82：1309-1318.6 SummerfieldA.KnoetigSM,TschudinR.elal.Pathogenesisofgranulocytopeniaandbonemarrowatrophyduringcla&sicalswinefeverinvolvesapoptosisand

23、necrosisofuninfectedcell*J.Virology.2000,272：50-60.7CamposE.RevillaC,ChamorroS,eta.InvitroeffectofclassicalswinefevervirusonaporcineaorticendothelialcelllineJ.VeterinaryResearch,2004,35:625-633.8 BensaudeE,TurnerJL,WakeleyPR,etal.Classicalswinefevervirusinducesproinflanunatorycytokinesandtissuefacto

24、rexpressionandinhibitsapoptosisandinterferonsynthesisduringtheestabUsh-mentoflong-terminfectionofporcinevascularendothelialcellsJ.JournalofGeneralVirology,2004,85：1029-1037.9 SuradhatS,SadaW,BuranapraditkunS,etal.ThekineticsofcytokineproductionandCD25expressionbyporcinelymphocytesubpopulationsfollow

25、ingexposuretocl&s&icalswinefevervirus(CSFV)J.VeterinaryImmunol啊andimmunopathology,2005,106：197-208.10 vanOirechotJT.Vaccinologyofclassicalswinefever：fromlabtofieldJ.VeterinaryMicrobiology,2003,96；367-384.11RauH,RevetsH,BalmelliC,etal.ImmunologicalpropertiesofrecombinantclassicalswinefevervirusNS3pro

26、teininvitroandinvivoJ.VeterinaryResearch,2006,37:155-168.12 PaulyT,ElhereK,KonigM,elal.Classicalswinefevervirus-specificcytotoxicTlymphocytesandidentificationofaTcellepitopeJ.JournalofGeneralVirology.1995,76：3039-3049.13 KoenenF,VanopdenboachE.WellemansG.etal.Bovineviraldiarrhoeavaccinationfailstopr

27、otectpigsagainstclassicalwinefeverchallenge,VIJ.TijdschriftvoorDiergeneeskunde,1998,57:398-404.14 TerpstraCA,TielenMJ.AntibodyresponseagainstswinefeverfollowingvaccinationwithC-strainvimsJ.ZentralbLattfu*rVete-hnaMnnedizin,ReiheB,1976,23：809-821.15 MoennigV.Introductiontoclassicalswinefever：virus,di

28、seaseandcontrolpolicyJ.VelennaryMicrobiology,2000,73：93-102.16 KadenV,LangeE,RiebeR,eta).ClassicalswinefevervirusStrain*C*.HowlongisitdetectableafteroralvaccinationJ.JournalofVeterinaryMedicineB.InfectiousDiseasesandVeterinaryPublicHealth,2004,51：260-262.17 RisattiGR.BorcaMV,KutishCF,etal.HieE2glyco

29、proteinofclassicalswinefevervirusisavindencedetenninantinewineJ.JournalofVirology.2005,79：3787-3796.18 MayerD,HofmannMA,TratachinJD.AttenuationofclassicalswinefevervirusbydeletionoftheviralNprogeneJ.Vaccine,2004, 22：317-328.19MeyenG,SaaJmullerA,ButtnerM.MuUlionsabrogatingtheRNaseactivityinglycoprote

30、inEmsofthepestivimeclassicalswinefevervirusleadtovirusattenuationJ.JournalofVirology,1999,73：10224-10235.20deArceHD,GangesL,BarreraM.elal.OriginandevolutionofvirusescausingclaMicalswinefeverinCubaJ.VirusReearch,2005. 112：123-131.21vanGennipHG,BoumaA,vanRijnPA,etal.Experimentalnon-transmissiblemarker

31、vaccinesforclaMicalswinefever(CSF)bytrans-complementationofEmsorE2ofCSFVJJ.Vaccine,2002,20：1544-1556.22 MaurerR,StettlerP.RuggliN,etal.Oronasalvaccinationwithclassicalswinefevervirus(CSFV)repliconparticleswitheitherpartialorcompletedeletionoftheE2geneinducespartialprotectiona-gainstlethalchallengewi

32、thhighlyvirulentCSFVJ.Vaccine,2005,23：3318-3328.23 CurtisKM,YountB.BaricRS.HeterologousgeneexpressionfromtransmissiblegastroenteritisvirusrepliconparticlesJ.JournalofVirology,2002,76：1422-1434.24 HammondJM,JansenES,MorrissyCJ.eal.Aprime-boostvaccinationstrategyusingnakedDNAfollowedbyrecombinantporci

33、neadenovirusprotectspigsfromclaMicalswinefeverJ.VeterinaryMicrobiology.2001,80：101-119.25 HahnJ,ParkSH.SongJY,etal.ConstructionofrecombinantswinepoxvirusesandexpressionoftheclassicalswinefevervirusE2proteinJ.JournalofVirologicaJMethods,2001,93:49-56.26JReimannI,DepnerK,TrappS,etal.Anavirulentchimeri

34、cpefiti*viruswithalteredcelltropismprotectspipagainstlethalinfectionwithclassicalswinefevervirusJ.Virology,2004.322:143-157.27 BoumaA,deSmitAJ,deKluijverEP,etal.EfficacyandstabilityofasubunitvaccinebasedonglycoproteinE2ofclaMicaJswinefevervirusJ.VeterinaryMicrobiology,1999,66：101-114.28 Greiser-Wilk

35、eIA,MoennigV.Vaccinationagainstclassicalswinefevervirus：limitationsandnewstrategiesJ.AnimalHealthResearchRenew,2004,5：223-226.29jDepnerKR,BoumaA.KoenenF,etal.Classicalswinefever(CSF)markervaccine.TrialII.Challengestudyinpregnantm)wsJ.VeterinaryMicrobiology,2001,83：107-120.30vanRijnPA,Bo&sersA,Wensvo

36、ortG,etal.Classicalswinefevervims(CSFV)envelopeglycoproteinE2containingonestructuralantigenicunitprotectspigsfromlethalCSFVchallengeJ.Jouma)ofGenera)Virology,1996,77：2737-2745.31ManickanE.KaremKL,RouseBT.DNAvaccines-amodemgimmickoraboonlovaccinologyJ.CriticalReviewsinImmunology,有ckhO0n協(xié)vaccinol。舒J|.

37、critiealRe.*仃唧III岫，牛肉嫩度營(yíng)養(yǎng)調(diào)控技術(shù)研究郭萬(wàn)華I,谷子林2L魏昆鸚(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院.河北保定071001；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)山區(qū)研究所.河北保定071001)摘要：牛肉餓度是影響牛肉消使的最重要的因素之一，到目前為止通過非營(yíng)養(yǎng)調(diào)控的方式來(lái)改善牛肉嫩度的方法已經(jīng)比較成熟；隨著營(yíng)養(yǎng)調(diào)控技術(shù)研究的進(jìn)一步發(fā)展，發(fā)現(xiàn)屠宰前適時(shí)改變?nèi)占Z的組成可以提高牛肉嫩度。關(guān)鍵詞：動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)；牛肉嫩度；綜述；調(diào)控中圖分類號(hào)：S816.4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)四：A文章編號(hào)：0529-5130(2008)09-0104-03牛肉嫩度是影響牛肉消費(fèi)的最重要的因素之一，并且嫩度是決定牛肉質(zhì)陸的最重要的適口性

38、性狀，因?yàn)樗苯雨P(guān)系到消費(fèi)者對(duì)牛肉口味的滿意程度。美國(guó)每年因嫩度不合適造成的損失高達(dá)數(shù)億美元，到目前為止通過非營(yíng)養(yǎng)調(diào)控的方式來(lái)改善牛肉嫩度的方法已經(jīng)比較成熟，例如：科學(xué)成熟處理、電剌激嫩化處理、外源蛋白酶嫩化處理，冷凍嫩化處理，嫩斬和吊掛處理，NaHC03或N*C()3嫩化處理、水震波嫩化處理，選種選育、適時(shí)屠宰等。不同的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)牛肉嫩度也有影響，但這種影響作用很小。隨著營(yíng)養(yǎng)調(diào)控技術(shù)研究的進(jìn)一步發(fā)展，發(fā)現(xiàn)屠宰前適時(shí)補(bǔ)充維生素可以在一定程度上提高牛肉的嫩度。影響牛肉嫩度的因素很多，目前己得到證實(shí)的因素有品種、個(gè)體差異、性別、年齡、飼料，維生素D、E和維生素A等。本文從營(yíng)養(yǎng)的角度對(duì)影響牛肉嫩度的因素進(jìn)行綜述。1維生素A對(duì)牛肉嫩度的影響維生素A是目前世界上最易缺乏的一種營(yíng)養(yǎng)素，它的缺乏可損害機(jī)體免疫功能，影響機(jī)體的正常生長(zhǎng)發(fā)育，并造成先天不同器官的畸變。然而對(duì)于維生素A與肉品質(zhì)關(guān)系的研究報(bào)道目前非常少。萬(wàn)發(fā)春在研究維生素A對(duì)利魯雜交陶牛牛肉品質(zhì)的