豬支原體肺炎疫苗研究進(jìn)展 (1).docx

1、豬支原體肺炎疫苗研究進(jìn)展施堯（南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，江蘇南京210095）中圖分類號(hào):S858.285.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào):1002-1957（2013）03-0093-03摘要：豬支原體肺炎是嚴(yán)重影響世界養(yǎng)豬業(yè)的疾病之一，也是造成豬呼吸道病綜合征的主要疾病之一。豬支原體肺炎的商品化疫苗有滅活疫苗和弱毒活疫苗。滅活疫苗主要激發(fā)機(jī)體的體液免疫，對(duì)外周免疫細(xì)胞的影響不大。活疫苗能夠激發(fā)細(xì)胞免疫和黏膜免疫，通過(guò)占位效應(yīng)很好地減少支原體肺炎的發(fā)生，但活疫苗肺內(nèi)注射的免疫途徑限制其大面積推廣，輔以保護(hù)性佐劑可經(jīng)肌肉注射達(dá)到很好的免疫效果。新型疫苗如亞單位疫苗和口服微球疫苗已經(jīng)研制成功，但其商品化

2、仍需一個(gè)過(guò)程。關(guān)鍵詞：豬支原體肺炎；滅活疫苗；弱毒活疫苗；亞單位疫苗豬支原體肺炎（Mycoplasmalpneumoniaofswine,MPS）又稱豬喘氣病，是由豬肺炎支原體Mycoplasmahyopneunwniae»M.hyo）引起的一種慢性呼吸道傳染病。臨床上以咳嗽、氣喘和肺部典型的“蝦肉”樣病變?yōu)樘卣?，發(fā)病率高，死亡率低。豬肺炎支原體常與其他細(xì)菌和病毒混合感染，引起豬地方性肺炎（Enzooticpneumonia,EP）和豬呼吸道病綜合征（Porcinerespiratorydiseasecomplex,PRDC）川。豬肺炎支原體常通過(guò)病豬與健康豬接觸或通過(guò)飛沫經(jīng)空氣傳播

3、,其傳播距離一般可達(dá)4.7km叫最遠(yuǎn)可達(dá)9.2km囹。豬肺炎支原體對(duì)一些消毒劑及一些惡劣環(huán)境如干燥具有抵抗力叫一旦傳入很難徹底撲滅。單純的藥物防控豬支原體肺炎有效，但存在保護(hù)期短，必須長(zhǎng)期間隔或定時(shí)給藥，成本高，易產(chǎn)生耐藥性的缺點(diǎn)咯因此，采用疫苗防控豬支原體肺炎是重要選項(xiàng)。目前用于預(yù)防豬肺炎支原體感染的商品化疫苗有滅活疫苗和弱毒疫苗。1豬支原體肺炎滅活疫苗自20世紀(jì)90年代豬支原體肺炎滅活疫苗在美國(guó)注冊(cè)上市以來(lái)，己有大量試驗(yàn)證明免疫豬支原體肺炎滅活疫苗帶來(lái)了很大的經(jīng)濟(jì)效益叫Wilson等在德國(guó)南部的一個(gè)肺炎支原體陽(yáng)性豬場(chǎng)使用富道喘氣病滅活疫苗（SuvaxynMH-One）免疫45口齡的仔豬發(fā)現(xiàn)

4、，免疫組的肺部病變率、屠宰重、日增重與對(duì)照組均有顯著差異，這說(shuō)明SuvaxynMH-One疫苗免疫小于7日齡的仔豬，可有效降低豬感染肺炎支原體對(duì)肺部造成的傷害，同時(shí)減少體重?fù)p失和增加平均日增重，提高了豬的生長(zhǎng)性能四。潘延缽等對(duì)從美國(guó)菌種中心引進(jìn)的豬肺炎支原體（J株）進(jìn)行培收稿日期:2013-03-23作者簡(jiǎn)介:施堯（1992），男，甘肅山丹人，主妾從事豬病研完.E-mail;vet.shiyaogmaiLconi養(yǎng)、滴定，如顏色變化單位CCU達(dá)108/mL以上，用甲醛滅活后，加入自主研發(fā)的免疫佐劑-603制成疫苗，免疫豬在6個(gè)月內(nèi)能檢測(cè)到保護(hù)性抗體，攻毒試驗(yàn)證明滅活疫苗免疫豬能有效獲得攻毒保護(hù)

5、阿。但是滅活疫苗主要激發(fā)機(jī)體的體液免疫的。Kick等發(fā)現(xiàn)，未免疫豬支原體肺炎滅活疫苗的對(duì)照組血液CD47細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)要小于免疫組，然而對(duì)照組CD8T細(xì)胞及CD4/CD8*T細(xì)胞卻多于免疫組,這可能與試驗(yàn)過(guò)程中經(jīng)歷了斷奶有關(guān)，但也間接說(shuō)明了滅活疫苗對(duì)外周免疫細(xì)胞的影響不大叫。2豬支原體肺炎弱毒活疫苗2.1免疫效果和安全性劉茂軍等使用豬支原體肺炎活疫苗（168株）在河南3個(gè)豬場(chǎng)進(jìn)行臨床免疫效力試驗(yàn)，研究結(jié)果顯示，免疫豬的肺病變與非免疫組之間都存在顯著差異，疫苗免疫顯著降低了試驗(yàn)豬的肺病變，這表明豬支原體肺炎活疫苗（168株）具有良好的免疫保護(hù)性"。此外,Elsbemd等發(fā)現(xiàn)，免疫過(guò)豬支原

6、體肺炎活疫苗的豬群比未免疫豬群日增重平均增加17.91g,最高達(dá)29.63g,這表明免疫活疫苗對(duì)仔豬生長(zhǎng)有促進(jìn)作用咧。與豬瘟疫苗同時(shí)免疫也有很好的免疫效果，沈青春等對(duì)24頭30-40日齡仔豬分別或同時(shí)免疫豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）和豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源），結(jié)果表明，兩種疫苗同時(shí)免疫對(duì)各自的近期免疫效力均無(wú)明顯影響網(wǎng)。豬支原體肺炎活疫苗（168株）免疫后，免疫豬和同群感染豬均未觀察到典型的臨床癥狀和病理變化;連續(xù)5代返強(qiáng)試驗(yàn)，試驗(yàn)豬均未觀察到典型的臨床癥狀和病理變化，說(shuō)明該疫苗株未出現(xiàn)返強(qiáng)。單劑量、單劑量重復(fù)和大劑量試驗(yàn)及5批次疫苗的臨床試驗(yàn)也未觀察到不良反應(yīng)的，這說(shuō)明受試批次豬支原體肺

7、炎活疫苗（168株）具有良好的安全性。2.2免疫機(jī)理豬玄原體肺炎疫苗的免疫機(jī)理獨(dú)特，黏膜免疫和占位效應(yīng)企免疫過(guò)程中發(fā)揮重要作用|峋。仔豬出生后57d,不會(huì)自然感染肺炎支原體，活疫苗弱毒株通過(guò)肺內(nèi)注射直接到達(dá)肺泡黏膜表面，在肺泡表面形成優(yōu)勢(shì)占位，借助黏膜蛋白等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)大晝繁殖，最終占據(jù)肺泡表面所有的可占用空間(大約需12周時(shí)間)，同時(shí)，這個(gè)過(guò)程伴隨機(jī)體發(fā)生局部黏膜免疫、細(xì)胞免疫和體液免疫。此時(shí),如果仔豬吸入感染肺炎支原體野毒株，肺泡表面已缺乏可占據(jù)的空位，野毒被抗體中和、淋巴細(xì)胞吞噬或衰竭死亡，從而減少喘氣病的發(fā)生2.3佐劑和免疫途徑對(duì)免疫效果的影響豬支原體肺炎弱毒活疫苗顯示出良好的免疫效果，但

8、由于現(xiàn)有活疫苗采用肺內(nèi)注射的免疫途徑，一定程度上影響了其廣泛應(yīng)用?；钜呙巛o以佐劑肌肉注射顯示出良好的免疫效果。熊祺琰等發(fā)現(xiàn)，免疫刺激復(fù)合物(ISCOM)基質(zhì)佐劑和左旋咪哇+殼聚糖混合佐劑肌肉注射能有效激發(fā)細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答；同時(shí)左旋咪哩+黃芷多糖混合佐劑能增強(qiáng)疫苗的細(xì)胞免疫刺激能力，而對(duì)體液免疫無(wú)作用;但是皂角素佐劑未顯示明顯的免疫增強(qiáng)效果網(wǎng)。對(duì)ISCOM-基質(zhì)的研究發(fā)現(xiàn)JSCOM-基質(zhì)不影響活疫苗的活力，并且在體外可直接或協(xié)同刀豆蛋白刺激淋巴細(xì)胞產(chǎn)生明顯的增殖反應(yīng)，最低起效濃度為0.01ng/mL;當(dāng)作為佐劑與活疫苗配合肌肉注射免疫時(shí)，可顯著誘導(dǎo)動(dòng)物對(duì)疫苗抗原的細(xì)胞免疫應(yīng)答，體液免疫

9、應(yīng)答亦有一定程度增強(qiáng)。用肺炎支原體強(qiáng)毒攻毒后25d剖檢，免疫組病變明顯較對(duì)照組減輕，顯示出較好的攻毒保護(hù)效果叫。趙卓等發(fā)現(xiàn)，用6035納米佐劑稀釋豬支原體肺炎凍干活疫苗，肌肉注射，采用“55分計(jì)分法”記錄肺臟病變情況，結(jié)果表明，疫苗經(jīng)納米佐劑稀釋后，與用生理鹽水稀釋的疫苗相比，肺炎減少率均達(dá)到80%以上，且胸腔免疫與肌肉注射效果相當(dāng)團(tuán)。黏膜免疫在豬支原體肺炎免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，因此，探究能引起良好免疫應(yīng)答的口服或噴霧佐劑成為支原體肺炎疫苗研究的熱點(diǎn)。Lin等發(fā)現(xiàn)，通過(guò)共同噴霧干燥法制作的口服微球疫苗能為豬提供有效的保護(hù)力。而經(jīng)噴霧免疫時(shí)，噴霧器在霧化過(guò)程中的切割力能顯著降低疫苗的活力。噴霧

10、器噴射壓力越大，對(duì)疫苗活力下降的影響越大回。3新型亞單位疫苗的研制Fagan等以肺炎支原體核糖核酸氧化酶Nrdf和半乳糖昔酶R2亞單位的融合蛋白為基礎(chǔ)構(gòu)建新型亞單位疫苗，免疫此疫苗后用強(qiáng)毒株攻毒,免疫組比未免疫蛆豬肺的損傷率顯著降低。馬豐英等以MAyol68株的基因組為模板，經(jīng)擴(kuò)增、轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達(dá)、突變、菌株破碎、蛋白純化，純化后加入佐劑制成疫苗，經(jīng)動(dòng)物免疫后發(fā)現(xiàn)，以P36、P46、P65蛋白為組分和以P36、P46、P65、重組質(zhì)粒P97R1-Nrdf蛋白為組分的豬支原體肺炎亞單位疫苗均能產(chǎn)生較高水平的抗體，且產(chǎn)生了比常規(guī)豬支原體肺炎疫苗免疫組更高水平的IFN-7(7干擾素)，而IFN-y

11、是由T細(xì)胞分泌的，是介導(dǎo)細(xì)胞免疫的關(guān)鍵，在活化巨噬細(xì)胞抵抗豬肺炎支原體的過(guò)程中發(fā)揮著一定的作用。此外，注射2種亞單位疫苗小鼠的脾臟T淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)的IL-4(白細(xì)胞介素4)極顯著高于對(duì)照組(P<0.01>,說(shuō)明這2種亞單位疫苗在激活體液免疫的同時(shí)也激活了細(xì)胞免疫網(wǎng)。4小結(jié)與展望豬支原體肺炎是影響世界生豬養(yǎng)殖業(yè)的重要傳染病之一，目前防控豬支原體肺炎的商品化疫苗有滅活疫苗和弱毒活疫苗。滅活疫苗只激發(fā)機(jī)體的體液免疫，而抗原的制備工藝是滅活疫苗生產(chǎn)的瓶頸，其高滴度和高純度抗原生產(chǎn)工藝仍是國(guó)際支原體組織(InternationalResearchProgrammeonComparativeMy

12、coplasmologyJRPCM)在2012年大會(huì)上的5項(xiàng)主要議題之一。對(duì)肺炎支原體而言，疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體水平和阻止病原移行及疾病的發(fā)生聯(lián)系不大，疫苗抗體水平不一定與保護(hù)正相關(guān)，只為參考性指標(biāo)。弱毒疫苗能夠激發(fā)機(jī)體的細(xì)胞免疫，通過(guò)占位效應(yīng)而減少喘氣病的發(fā)生，免疫效果良好。但弱毒疫苗肺內(nèi)注射的免疫方法阻礙著其推廣?；钜呙巛o以多種佐劑經(jīng)肌肉注射能達(dá)到良好的免疫效果，因此,探究新型佐劑、改良活疫苗的免疫方法,使活疫苗能夠通過(guò)肌肉注射、口服或者噴霧免疫是今后豬支原體肺炎疫苗研究的關(guān)鍵。新型疫苗能夠很好地激發(fā)機(jī)體細(xì)胞免疫，然而以天然菌體成分或其分泌物作為亞單位疫苗的組分，其免疫原性雖好，但提取成本高

13、、產(chǎn)量較低，因此,利用基因工程方法制備亞單位疫苗是首選途徑。新型疫苗的商品化也是今后支原體防控的關(guān)鍵。參考文獻(xiàn)：1 WoesteK,GrosseBE.Transmissionofagentsoftheporcinerespiratorydiseasecomplex(PRDC)betweenswineherds:areviewPartI-diagnostics,pathogentransmissionviapigmovement(J.DtschTieraratlWochenschr,2007,l14(9):324-326,328-337.2 CardonaAC.PijoanC,DeeSA.Ass

14、essingMycoplasmahyop-neumoruaeaerosolmovementatseveraldistances(J).VetRec,2005,156(3):91-92.3 DeeS,OtakeS,OliveiraS,eta/.Evidenceoflongdistanceairbornetransportofporcinereproductiveandrespiratorysyn-dromevirusandMycoplasmahyopneumoniaeJ.VelRes,2009,40(4):39.4 OtakeS,DeeS.CorzoC,eta/.Ix)ng-distanceai

15、rbornetransportof急性副豬嗜血桿菌病的診治與分析朱秀高(武漢回盛生物科技有限公司，湖北武漢430042)中圖分類號(hào):S858.285.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B文章編號(hào)：1002-1957(20】3)03-0095-021發(fā)病情況2013年3月，江蘇某地區(qū)一存欄570頭母豬豬場(chǎng)的保育豬群發(fā)病，臨床表現(xiàn)為突然不食、高熱至40T、有輕微呼吸急促癥狀、呈腹式呼吸：兩天后病豬癱瘓?jiān)诒Ｓ采希⒃?8小時(shí)內(nèi)死亡：截至筆者現(xiàn)場(chǎng)處理時(shí)，全群發(fā)病率為48%、死亡率65%,無(wú)其他明顯可見(jiàn)臨床表現(xiàn)。發(fā)病后先后用阿莫西林(含克拉維酸鉀)及頭泡嚏吠鈉預(yù)混劑經(jīng)飼料給藥治療無(wú)明顯效果。將4頭發(fā)病癱瘓豬宰殺后解剖,觀

16、察其內(nèi)臟器官的病理變化，其中肝臟、腎臟、脾臟及淋巴結(jié)等部位無(wú)任何異常，胃腸等消化器官也無(wú)病變。病變局收稀日期:2013-04-18作者簡(jiǎn)介：朱秀高(】984-),男，山東圳坊人，執(zhí)業(yè)善醫(yī)師，碩士，主要從享動(dòng)物疾病防治工作.E-mail:zhuxiugaaoinfectiousPRRSVandMycoplasmahyopneumoniaefromaswinepopulationinfectedwithmultipleviralvariantsJ.VeterinaryMicrobiology,2010,145(3-4)：198-208.5 EterpiM,McDonnellG.ThomasV.De

17、contaminationefficacya-gainstMycoplasrTuJ.LettApplMicrobiol,2011,52(2):150-155.6 華利忠，馮志新，劉茂軍，等.豬支原體肺炎疫苗的免疫原理及應(yīng)用效果概述J.中國(guó)獸藥雜志,2012,46(8):58-61.7 MaesD,VerbekeW.Viccaa/.BenefittocostofvaccinationagainstMycoplasmahyopneumoniaeinpigherdsunderBelgianmarketconditionsfrom1996to2000JJ.LivestockProductionScie

18、nce,2005,83:85-93.8JWilsonS.BrussclLV,SaundersG,etaZ.Vaccinationofpigletsat1weekofagewithaninactivatedMycoplasmahyopneumoniaevaccinereduceslunglesionsandimprovesaveragedailygaininbodyweightJ.Vaccine.2012,30:7625-7629.9 潘延德，趙卓，張海玲，等.豬支原體肺炎滅活疫苗的免疫效果研究J.中國(guó)獸藥雜志,2009.43(8):22-24.10 SibilaM,BemaiR,Torrent

19、sD,e：a/.Effectofsowvaccinationa-gainstMycoplasmahyopneumoniaeonsowandpigletcolonizationandseroconversion,andpiglunglesionsatslaughterJ.VeterinaryMicrobiology,2008,127(1-2):165-170.11 KickAR.TompkinsMB,HammerJM,etaZ.EvaluationofperipherallymphocytesafterweaningandvaccinationforMycoplasmahyopneumoniae

20、J.Researchinveterinaryscience,2011,91(3):e68-72.12 劉茂軍，苗連葉,趙永前，等.豬支原體肺炎活疫苗168株臨床試牧與獸醫(yī),2009.41(8)：93-95.13 ElsbemdAJohnsonA虬StalderKJ,e/al.AReviewontheImpactofMycoplasmahyopneumoniaeVaccinationonAverageDailyGaininSwineJ.AnimalIndustryReport,2012,658(1):4.限在肺臟、心臟及跑關(guān)節(jié),表現(xiàn)為心包嚴(yán)重積水(圖1)、呈淺黃色(4/4),肺臟腫脹(圖2)、表

21、面有點(diǎn)狀壞死灶(3/4),關(guān)節(jié)腔內(nèi)有大量淡黃色積液(4/4)o圖1心包積水圖2肺臟腫脹2診療情況根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀和剖檢病變，筆者懷疑病豬為急性副豬嗜血桿菌感染，在采取治療措施的同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。病豬宰殺后無(wú)菌條件下采集心包液和關(guān)節(jié)液劃線于自制的含NAD(煙酰胺腺嗔沈育春，范學(xué)政，王芳，等.豬瘟和豬肺炎支原體活疫苗同時(shí)免疫的相互干擾研究幾中國(guó)獸藥雜志,2011,45(12):9-12.14 劉茂軍，蘇國(guó)東，周勇岐，等.豬支原體肺炎活疫苗168株的安全性研究JJ.中國(guó)獸藥雜志,2012,46：I-4.15 王榮祥，楊倩，張小飛，等.氣喘病疫苗免疫效果探討J.畜牧獸醫(yī)雜志,2011,30(2):91-95.16 周勇岐，趙永前.豬支原體肺炎168株活疫苗的作用機(jī)理與應(yīng)用J.中國(guó)牧業(yè)通訊，2008(10):49-52.17 熊祺琰，范志鵬，甘源，等.幾種佐劑對(duì)肌肉注射豬支原體肺炎活疫苗免疫刺激能力的增強(qiáng)作用研究