甲胎蛋白操作規(guī)程sop

1、杭州余杭邦爾醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室項(xiàng)目SOP文件文件編號(hào)：YHBE5-JYK-MYS-002標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 甲胎蛋白測(cè)定編制人：劉鳳婷生效日期：2018年1月1日審核人：鐘劍版本號(hào)/修訂號(hào)：1/4批準(zhǔn)人：張延亮發(fā)布部門：檢驗(yàn)科頁(yè)碼數(shù)：5-8頁(yè)甲胎蛋白測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1 檢驗(yàn)申請(qǐng)單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目中請(qǐng)：甲胎蛋白測(cè)定（縮寫 AFP;組合項(xiàng)目中請(qǐng)：月中瘤標(biāo)志物 檢查。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請(qǐng)。2標(biāo)本采集與處理2.1 標(biāo)本采集2.1.1 常規(guī)靜脈采血約2ml,不抗凝，置普通試管中。或采用含分離膠的真空采血管。也可采集血漿標(biāo)本，用肝或 EDTAK凝。2.1.2 檢驗(yàn)申請(qǐng)單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識(shí)符。2.1

2、.3 急診標(biāo)本采集后，在檢驗(yàn)申請(qǐng)單上填寫標(biāo)本采集時(shí)間。2.1.4 標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請(qǐng)單一起及時(shí)運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收 并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對(duì)不合格標(biāo)本予以拒收。2.1.5 下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.1.5.1 標(biāo)本量不足：少于 0.3ml的全血標(biāo)本，或少于 0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2 對(duì)反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的標(biāo)本。2.1.5.3 無(wú)法確認(rèn)標(biāo)本與申請(qǐng)單對(duì)應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.4 其他如標(biāo)識(shí)涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.2 標(biāo)本保存2.2.1 接收標(biāo)本后在60min內(nèi)將標(biāo)本離心分離出血清（漿），避免溶血。離心必 須達(dá)到4000rpmx 15min,離心后的

3、血清中不能含有顆粒物或微量纖維蛋白。2.2.2 標(biāo)本保存時(shí)間：室溫（1525C）下可穩(wěn)定 8h,普通冰箱中（28C） 穩(wěn)定2d,在-20 C最多可保存4周。避免反復(fù)凍融。2.2.3 已完成測(cè)試的標(biāo)本保持完整的識(shí)別號(hào)，置 48c冰箱內(nèi)保存7d。2.3 標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)2.3.1 采血前使受檢者保持平靜、松弛、避免劇烈活動(dòng)。3方法原理甲胎蛋白測(cè)定采用雙位點(diǎn)加心化學(xué)發(fā)光免疫分析法，其檢測(cè)原理來(lái)如下：第一步：將標(biāo)本與包被著AFP單克隆抗體的超順磁性磁珠和另外一種小鼠 AFP 單克隆抗體-堿性磷酸酶標(biāo)記物添加到反應(yīng)管中，經(jīng)過(guò)孵化，標(biāo)本中的AFP和包被在磁珠上的AFP抗體結(jié)合，同時(shí)AFP抗體-堿性磷酸酶

4、標(biāo)記物與樣本中同一 AFP 上不同的抗原結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合。在反應(yīng)管內(nèi)孵化完成后，結(jié)合在固相上的物質(zhì)將之 與一個(gè)磁場(chǎng)內(nèi)被吸住，洗去未結(jié)合的物質(zhì)。第二步：將化學(xué)發(fā)光物添加到反應(yīng)管內(nèi)，發(fā)光底物（AMPPD被堿性磷酸酶所分解，脫去一個(gè)磷酸基，生成一個(gè)不穩(wěn)定的中間產(chǎn)物，該中間產(chǎn)物通過(guò)分子內(nèi)電 子轉(zhuǎn)移產(chǎn)生間氧苯甲酸甲酯陰離子，處于激發(fā)態(tài)的問氧苯甲酸甲酯陰離子從激發(fā) 態(tài)返回基態(tài)時(shí)，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，再通過(guò)光電倍增管對(duì)反應(yīng)中所產(chǎn)生的光子數(shù)進(jìn)行 測(cè)量。所產(chǎn)生光子數(shù)與樣本內(nèi)甲胎蛋白的濃度成正比。樣本內(nèi)分析物的量油校準(zhǔn)曲線來(lái)確定。文件編號(hào)：YHBE6-JYK-MYS-002標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 甲胎蛋白測(cè)定編制人：劉鳳婷生效日期：

5、2018年1月1日審核人：鐘劍版本號(hào)/修訂號(hào)：1/4批準(zhǔn)人：張延亮發(fā)布部門：檢驗(yàn)科頁(yè)碼數(shù)：5-8頁(yè)4試劑及其他用品4.1 試劑：AFP測(cè)定試劑包，由邁瑞公司出品。未打開的試劑包保存于28c 避光保存，可穩(wěn)定保存18個(gè)月，不可凍存。開啟的試劑包載入系統(tǒng)中可使用28d。4.2 試劑盒組分4.2.1 試劑 1 （Ra）:組分包被著甲胎蛋白抗體（小鼠單抗，IgG）的超順磁性微粒，懸浮于緩 沖液，含防腐劑。原料及含量：包被著甲胎蛋白抗體（小鼠單抗， IgG）的超順磁性微粒，0.3g/L;Tris 緩沖液，50mmol/L,Proclin300,0.5g/L;疊氮鈉，0.9g/L。4.2.2 試劑 2 （

6、Rbb組分：抗甲胎蛋白抗體（小鼠單抗，IgG）-堿性磷酸酶標(biāo)記物稀釋于緩 沖液，含防腐劑。原料及含量：抗甲胎蛋白抗體（小鼠單抗，IgG）-堿性磷酸酶標(biāo)記物，3mg/L;磷酸鹽緩沖液，10mmol/L;Proclin300,0.5g/L;疊氮鈉，0.9g/L。4.2.3 試齊1J 3 （R0組分：樣本處理緩沖液，好防腐劑。原料及含量：Tris 緩沖液，50mmol/L,Proclin300,0.5g/L;疊氮鈉，0.9g/L 。4.3 其他試劑與用品試劑包即開即用，臨用時(shí)輕柔顛倒混勻數(shù)次，無(wú)須特殊準(zhǔn) 備。4.3.1 底物液4.3.2 清洗緩沖液等。5校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式5.1 校準(zhǔn)品：采用專用配套A

7、FP5準(zhǔn)液。校準(zhǔn)品需在28c貯存。5.2 校準(zhǔn)類型和校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)目：非線性模式，6個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)。儀器根據(jù)校準(zhǔn)曲線卡片 數(shù)據(jù)（6參數(shù)對(duì)數(shù)擬合曲線）自動(dòng)建立校準(zhǔn)曲線。5.3 校準(zhǔn)周期：在同一批號(hào)試劑使用期間校準(zhǔn)曲線有效，但在間隔28d后需要重新校準(zhǔn)。每當(dāng)：更換試劑批號(hào)或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時(shí)；儀器進(jìn)行全面保養(yǎng)后； 儀器的重要零件更換后，進(jìn)行一次校準(zhǔn)。5.4 校準(zhǔn)液重建方法：凍干校準(zhǔn)液，用1mLK儲(chǔ)水復(fù)溶，復(fù)溶后的校準(zhǔn)液于28c 保存最長(zhǎng)不超過(guò)5周，或于-20 C最長(zhǎng)保存10周。避免反復(fù)凍融。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1 質(zhì)控品采用AFP配套質(zhì)控品。6.2 質(zhì)控液重建方法：液態(tài)質(zhì)控液，即開即用，充分顛倒混勻，無(wú)需特

8、殊準(zhǔn)備。6.3 質(zhì)控品測(cè)定：在每一批標(biāo)本中測(cè)定質(zhì)控血清一次。6.4 質(zhì)控規(guī)則：采用L-J質(zhì)控圖，以土 3s為失控限。標(biāo)準(zhǔn)差由本室實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得 出。6.5 如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序采取各種有效的糾正措施及時(shí) 糾正，并在確認(rèn)重新回復(fù)到控制狀態(tài)后開始標(biāo)本檢測(cè)。7適用儀器文件編號(hào)：YHBE7-JYK-MYS-002標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 甲胎蛋白測(cè)定編制人：劉鳳婷生效日期：2018年1月1日審核人：鐘劍版本號(hào)/修訂號(hào)：1/4批準(zhǔn)人：張延亮發(fā)布部門：檢驗(yàn)科頁(yè)碼數(shù)：5-8頁(yè)深圳邁瑞自動(dòng)發(fā)光免疫分析儀8標(biāo)本檢測(cè)步驟裝載試劑一進(jìn)行校準(zhǔn)一進(jìn)行質(zhì)控一輸入標(biāo)本檢測(cè)項(xiàng)目一加載標(biāo)本 一標(biāo)本測(cè)定一結(jié)果復(fù)核一報(bào)告。9主要

9、分析參數(shù)無(wú)須輸入操作參數(shù)，儀器根據(jù)預(yù)設(shè)的分析項(xiàng)目參數(shù)和試劑條碼的信息自動(dòng)進(jìn) 行分析。標(biāo)本10卜l。10結(jié)果計(jì)算儀器根據(jù)校準(zhǔn)曲線自動(dòng)給出每個(gè)標(biāo)本測(cè)定結(jié)果。測(cè)定結(jié)果單位以ng/mL表示。11檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍11.1 結(jié)果的報(bào)告11.1.1 結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無(wú)誤后發(fā)出報(bào)告。11.1.2 報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的計(jì)量單位、參考區(qū)間、報(bào)告日期、時(shí)間、操作者和 審核者簽名，并有與申請(qǐng)單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3 如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。11.2 報(bào)告范圍：0.5 1210 ng/ml，超過(guò)此范圍的結(jié)果報(bào)告時(shí)必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說(shuō)明，例如：系根據(jù)標(biāo)本重新稀釋

10、后重復(fù)測(cè)定的結(jié)果。12操作性能12.1 精密度：批內(nèi)CWC3%;批問CVk5%12.2 分析范圍：0.5 1210 ng/ml. 。12.3 分析靈敏度：0.5 ng/ml.。12.4 方法的有限性及干擾因素：輕度溶血、黃疸、脂血、 Rh因子對(duì)本試驗(yàn)無(wú) 明顯干擾。甘油三脂(0 1500mg/dL)、血紅蛋白(0 500mg/dL)或膽紅素(< 20mg/dL) 時(shí)對(duì)試驗(yàn)的干擾偏差在+-10%范圍內(nèi)。ng/ml以內(nèi)沒有hook效應(yīng)。13參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平參考范圍：0 7.0 ng/ml14臨床意義14.1 在懷孕時(shí)，AFP由胎兒產(chǎn)生并轉(zhuǎn)運(yùn)至羊水，然后又滲透入母親的外周血中。 開放性神經(jīng)

11、管缺陷(NTD可使AFP直接通過(guò)胎兒的毛細(xì)血管進(jìn)入羊水；因此， 羊水和母親血清中的AFP濃度升高，可提示有可能存在包括無(wú)腦兒和脊柱裂在內(nèi) 的一系列胎兒畸形。AFP的測(cè)定為篩查NTD勺高風(fēng)險(xiǎn)妊娠提供了一個(gè)有效的方法， 可利用這一指標(biāo)對(duì)她們進(jìn)行篩查；另外，多胎妊娠也可伴有AFP濃度的升高。14.2 AFP濃度升高也可發(fā)生在患有原發(fā)性肝細(xì)胞癌或非精原細(xì)胞瘤的睪丸癌 患者，對(duì)此類患者的治療中動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)其 AFP水平，可用于對(duì)患者病情的治療監(jiān)控； 另外，AFP濃度升高也可見于非惡性肝臟疾病的患者。15結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系15.1 由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。15.2 審核者認(rèn)真審核每一個(gè)

12、測(cè)定結(jié)果，對(duì)發(fā)出報(bào)告結(jié)果的可靠性負(fù)責(zé)，并在報(bào) 告單的審核者處簽名。文件編號(hào)：YHBE8-JYK-MYS-002標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 甲胎蛋白測(cè)定編制人：劉鳳婷生效日期：2018年1月1日審核人：鐘劍版本號(hào)/修訂號(hào)：1/4批準(zhǔn)人：張延亮發(fā)布部門：檢驗(yàn)科頁(yè)碼數(shù)：5-8頁(yè)15.3 相關(guān)項(xiàng)目：審核與其他月中瘤標(biāo)志物的關(guān)系，如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的 情況，應(yīng)分析與查找原因。16有關(guān)引用程序與文件16.1 CL-1200i自動(dòng)發(fā)光免疫分析儀儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。16.2 免疫檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序。16.3 檢驗(yàn)結(jié)果審核程序。16.4 標(biāo)本送檢和接收程序。17參考文獻(xiàn)17.1 陸永綏，張偉民主編.臨床檢驗(yàn)管理與技術(shù)規(guī)程.杭州：浙江大學(xué)出版社， 2004.17.2 Access甲胎蛋白測(cè)定試劑說(shuō)明書。17.3