MDR1和Ki67在胃癌中的表達及臨床意義

1、MDR1和Ki67在胃癌中的表達及臨床意義 作者：楊志慧 劉玉龍何金徐毅劉惠敏【摘要】 目的 探討MDR1和Ki67在胃癌中表達的臨床意義。方法 應用免疫組織化學方法檢測100例胃癌組織中MDR1及Ki67的表達。結果 MDR1和Ki67在胃癌組織中的表達高于癌旁組織，而與年齡、性別、組織學類型、浸潤深度以及淋巴結轉移均無相關性。MDR1與Ki67之間也無明顯相關性。結論 MDR1和Ki67都不能作為胃癌病人判斷預后和臨床化療耐藥的單一指標。 【關鍵詞】 胃腫瘤多藥耐藥MDR1基因P-糖蛋白Ki67 Expressions of MDR1 and Ki67 in Gastric Cancer

2、and their Clinical Significance Abstract: Purpose To explore the expressions of MDR1 and Ki67 in gastric cancer and their clinical significance Method One hundred cases with gastric cancer were detected for MDR1 and Ki67 by immunohistochemistry technique. Results The expressions of MDR1 and Ki67 in

3、cancer tissues were higher than those in cancer surrounding tissues and didnt correlated to the age, sex, histological type, depth of invasion and lymph node metastasis. There was no correlation between MDR1 and Ki67 either. Conclusion Neither MDR1 nor Ki67 serves as a single indicator to estimate p

4、rognosis and drug resistance in clinic. Key words: gastric neoplasms; multiple drug resistance; MDR1 gene; P-glycoprotein; Ki67 antigen 胃癌是臨床最常見的腫瘤之一，手術后輔以化療成為治療的主要手段。然而由于腫瘤細胞耐藥的產生，相當一部分病例化療效果不理想。一般來講增殖活性高的細胞群對化療相對敏感，但有關腫瘤細胞增殖指數(shù)與腫瘤細胞耐藥性之間的相關性研究，至今國內未見報道。本實驗應用免疫組化方法探討MDR1和Ki67在胃癌組織中表達的相關性，旨在為臨床正確用藥提供

5、參考依據(jù)。 1 材料與方法 1.1 材 料 收集長征醫(yī)院20032004年間手術切除胃癌標本共478例，選擇診斷明確、病歷資料完整、未經(jīng)任何治療的分化性管狀腺癌和乳頭狀腺癌40例，低分化腺癌40例，黏液腺癌和印戒細胞癌20例，共100例。其中癌浸潤至黏膜下層（早期胃癌）9例，浸潤肌層21例，浸潤漿膜層70例，有胃周淋巴結轉移的81例，無胃周淋巴結轉移的19例，男性68例，女性32例，年齡2682歲，中位年齡59歲。 1.2 方 法 所有標本經(jīng)10中性福爾馬林固定，石蠟包埋切片，免疫組織化學技術采用SP法，MDR1(P-gp)、Ki67單克隆抗體和即用型SP試劑盒均購自福州邁新公司，染色前組織抗

6、原用高壓修復，其余步驟按試劑盒說明操作，PBS代替一抗作為陰性對照，用已知陽性切片作陽性對照。 1.3 結果判斷 MDR1(P-gp)以細胞漿和細胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞，陽性細胞數(shù)5為陽性，5為陰性，Ki67以細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，陽性細胞數(shù)10為陰性，1030為（），3050為（），50為（）。 1.4 統(tǒng)計學處理 采用SAS統(tǒng)計軟件，2檢驗。 2 結 果 2.1 MDR1和Ki67在胃癌組織和癌旁組織中的表達 MDR1陽性顆粒出現(xiàn)于細胞漿/膜，表達相對較弱，Ki67的陽性顆粒出現(xiàn)于細胞核，表達較強，在癌與癌旁組織中的表達情況見表1。結果表明MDR1陽性率，癌組織和癌旁組織比較有

7、顯著性差異（2=6.61，P0.05），Ki67表達于癌組織和癌旁組織陽性率經(jīng)比較有顯著性差異（2119.499，P0.01）。 2.2 MDR-1和Ki67表達的相互關系 MDR1和Ki67在癌組織中的表達情況見表2。結果表明Ki67各級表達與MDR1之間無相關關系（23.366，P0.05）。 2.3 胃癌組織中MDR1 和Ki67蛋白表達與臨床 病理相關因素關系 MDR1和Ki67蛋白的表達與年齡、性別、組織學類型、浸潤深度、淋巴結轉移與否，均無明顯相關性（見表3）。 3 討 論 多藥耐藥性（multiple drug resistance，MDR）是腫瘤進行有效化療的主要障礙之一，MD

8、R1是細胞產生MDR表型的分子基礎，是一種具有能量依賴性藥泵功能的跨膜糖蛋白，可主動將進入細胞內的抗癌藥物泵出細胞外，降低細胞內藥物的濃度，使腫瘤細胞產生耐藥1，2。Ki67抗原是典型的與細胞周期相關的核蛋白，于G1后期出現(xiàn)，S期和G2期逐漸增高，M期達到高峰，有絲分裂后迅速降解消失，與細胞的合成代謝有關，其表達水平能較全面客觀地反映腫瘤細胞的增殖狀態(tài)3。 關于MDR1在癌組織和癌周正常胃黏膜組織的表達率，文獻報告相差懸殊，有人認為MDR1在癌組織中表達陽性率很高，而正常黏膜呈較低程度的表達4；有人卻認為MDR1在癌組織與癌旁組織中的表達并無顯著性差異5，作者分析造成這些不同結果的原因可能與應

9、用的檢測方法及操作技術不同有關。本組實驗研究顯示MDR1在癌周正常組織表達率為32，而在癌組織表達率為59，MDR1在癌組織中的表達率高于癌旁正常黏膜組織，兩者具有差異性（P0.05），表明MDR1的表達仍然具有明顯的腫瘤特異性，而且有一半以上的胃癌患者具有天然耐藥性，使得進入細胞內的化療藥物在發(fā)揮作用之前就被泵出細胞外，從而降低了細胞內的藥物濃度，提示這可能是胃癌患者臨床化療效果不佳的原因之一。MDR1表達主要對生物堿類、蒽環(huán)類和鬼臼類較為耐藥，對烷化劑類藥物較敏感，因此，為取得最佳療效，可以根據(jù)腫瘤MDR1表達結果來選擇化療方案，避免使用與多藥耐藥有關的藥物，同時還可作為選用MDR逆轉劑治

10、療的指標。 本實驗研究顯示Ki67在癌旁正常組織表達只有11，陽性表達主要見于正常上皮的基底層細胞，而在胃癌組織中表達率高達91，兩者比較有顯著性差異（P0.01）。這一方面證明了癌組織的生長是異常、無序的失控性的生長，另一方面也提示Ki67陽性表達，尤其是高強度陽性表達對胃良惡性病變的鑒別診斷有一定參考價值。 Gottesman6認為腫瘤細胞MDR1的過度表達與腫瘤的浸潤、轉移及臨床分期呈正相關，陳嘉毅等7、Czyzewska等8也提出Ki67陽性表達可以作為預測病人預后的一個客觀指標。而本實驗結果表明MDR1和/或Ki67與病人年齡、性別、組織學類型、浸潤深度和淋巴結轉移均無明顯相關性（P

11、0.05），因此認為MDR1 和Ki67均不能作為胃癌病人的預后判斷指標。這與蔡穎等9、Oshima等 10等報道結果一致。 眾所周知，細胞群體的增殖活性越高，化療效果就越好，那么是不是意味著Ki67表達越高，MDR1的陽性率就越低呢？本實驗結果顯示，雖然在MDR1陰性表達組Ki67強陽性表達（39.0）高于MDR1陽性組（22.0），但統(tǒng)計學處理結果顯示Ki67各級表達與MDR1的表達均無明顯的相關性（P0.05），推測腫瘤細胞動力學的調控機制復雜多樣，受到多種因素的綜合作用，Ki67只是其中一項指標，并不能完全反映腫瘤細胞的增殖組分。因此，對Ki67陽性率高的腫瘤是否一定會對化療藥物敏感尚

12、不能明確，需要進一步研究證實。 總之，由于腫瘤耐藥機制涉及到多種因素參與，無論是Ki67還是MDR1都不能作為臨床制定化療方案的惟一指標，應綜合多種因素以及胃癌本身的生物學特征來制定合理的治療方案?！緟⒖嘉墨I】 1 Li DQ, Wang ZB, Bai J, et al. Reversal of multidrug resistance in drug-resistant human gastric cancer cell line SGC7901/VCR by antiprogestin drug mifepristoneJ. World J Gastroenterol, 2004, 10

13、(12):1722-1725.2 Woodahl EL,Ho RJ.The role of MDR1 genetic polymorphisms in interindividual variability in P-glycoprotein expression and functionJ. Curr Drug Metab,2004,5(1):9-11.3 Sawhney N,Hall PAKi-67-structure, function, and new antibodiesJ J Pathol, 1992, 168(2)：423-4284 黃愛民, 劉景豐. 胃癌多藥耐藥基因的表達及其

14、意義J. 第四軍醫(yī)大學學報（J Porth Mil Med Univ）,2002,23(21):1952-1954.5 Lacueva J,Perez-Ramos M, Soto JL, et al. Multidrug resistance-associated protein (MRP1) gene is strongly expressed in gastric carcinomas. Analysis by immunohistochemistry and real-time quantitative RT-PCRJ. Histopathology, 2005, 46(4):389-3

15、95.6 Gottesman MM.How cancer cells evade chemotherapy:sixteenth Richard and Hinda Rosenthal Foundation Award LectureJ. Cancer Res, 1993, 53(4):747-754.7 陳嘉毅, 李瑩杰, 田麗峰. 腫瘤增殖和凋亡相關因素在胃癌演進過程中的作用J. 臨床與實驗病理學雜志, 2003, 19（6）：604-607.8 Czyzewska J, Guzinska-Ustymowicz K, Lebelt A, et al. Evaluation of proliferating markers Ki-67, PCNA in gastric cancersJ. Rocz Akad Med Bialymst, 2004, 49 (Suppl 1)