多囊卵巢綜合征動物模型構(gòu)建的研究進展與評價

1、多囊卵巢綜合征動物模型構(gòu)建的研究進展與評價<    1 雄激素造模法 1.1 丙酸睪丸酮模型 在研究多囊卵巢綜合征發(fā)病機制過程中，多毛、痤瘡等高雄激素表現(xiàn)是PCOS的主要表現(xiàn)，提示高雄激素血癥是該疾病的基本內(nèi)分泌改變，高雄激素水平是PCOS病因的可能性，故該方法造模的基本原理在于過高的雄激素干擾了卵泡的生長成熟,而出現(xiàn)不排卵。Beloosesky等1給予日齡21天的Wistar雌性大鼠丙酸睪丸酮1mg/100g體重，皮下注射，持續(xù)35天，使未成年大鼠長期處于高雄激素的刺激下，至性成熟期。實驗發(fā)現(xiàn)，卵巢 組織 學改變，即各種大小不等的囊性卵泡形成，以

2、及間質(zhì)細胞增生，無新鮮黃體生成也提示無排卵出現(xiàn);在內(nèi)分泌方面，發(fā)現(xiàn)血糖/胰島素比值顯著降低，相似于人PCOS的胰島素抵抗。國內(nèi)學者周麗蓉等2，3采用補腎陰藥治療高雄激素、高胰島素型的多囊卵巢綜合征(PCOS)，有6O%的促排卵效果;并采用9日齡SD雌性大鼠頸背部皮下注射丙酸睪丸酮1.25mg/只(0.05ml)，70日齡起連續(xù)陰道涂片11天,觀察到陰道上皮持續(xù)角化，成功誘發(fā)出不完全排卵障礙，即雄激素致不孕大鼠(ASR)模型，該大鼠成年后表現(xiàn)為高雄激素、高胰島素、低促性腺激素、無排卵和多囊卵巢等。本模型的特點為卵巢重量明顯減輕，光鏡下見卵巢被膜無增厚，皮質(zhì)占主要部分，卵巢中充滿大小不等的濾泡，有

3、的囊腔較大。部分濾泡內(nèi)未見卵丘、卵母細胞，偶有黃體，極少妊娠。此模型無排卵，卵巢多囊性改變與人PCOS相似外，血清激素水平也符合人PCOS。1.2 脫氫表雄酮(DHEA)模型 根據(jù)大部分PCOS患者在青春期出現(xiàn)癥狀，而且在青春期前就出現(xiàn)血脫氫表雄(DHEA)和硫酸脫氫表雄酮(DHEAS)升高的現(xiàn)象，推測DHEA升高可能是導致PCOS的一個主要原因。本實驗機制，DHEA在卵泡膜細胞內(nèi)促進睪酮的合成，使血睪酮水平升高 ，而高雄激素水平正是PCOS重要的診斷標準之一。Anderson等4，5以DHEA皮下注射誘導SD雌性大鼠PCOS造模， 采用23日齡SD清潔雌性大鼠， 在21日齡斷奶。 實驗組皮下

4、注射DHEA 6mg/100g體重/天+0.2mL注射用油劑， 連續(xù)注射20天， 建立DHEA誘導的大鼠PCOS模型。 實驗表明， DHEA誘發(fā)卵巢卵泡發(fā)生閉鎖及囊狀擴張， 與PCOS患者卵巢病理改變相似， 但該模型與胰島素抵抗的關系尚未清楚。 張曉薇等6在此基礎上進行了葡萄糖耐量試驗(OGTT)和胰島素測定，即在注藥第20天的晚上8時開始禁食， 次日上午8時按3g/kg的劑量灌服50%葡萄糖液， 灌糖后分別在0、30、60、120min鼠尾尖取血，測定血清胰島素及血糖， 證明其存在著明顯的高胰島素血癥。Henmi等7使用同樣方法進行建模研究， 發(fā)現(xiàn)激素水平的變化接近多囊卵巢綜合征患者， 包括

5、睪酮、雄烯二酮、硫酸脫氫表雄酮、 雌二醇均顯著高于對照組; 孕酮則低于對照組且有明顯差異。本模型特點表現(xiàn)為卵巢重量明顯增加，且呈多囊性改變，閉鎖卵泡直徑顯微測量明顯增高，卵泡內(nèi)卵母細胞或放射冠消失，顆粒細胞層數(shù)減少，大部分未見黃體形成。激素水平的變化接近多囊卵巢綜合征患者，包括睪酮、雌二醇均顯著高于對照組;孕酮與對照組無顯著差異。但血卵泡刺激素、黃體生成素、泌乳素與對照組比較無顯著性差異。綜上所述，在囊性卵泡形成機制上，使用雄激素建模的學者認為，升高的睪酮、雄烯二酮及雌激素等性激素有可能是囊性卵泡形成的主要作用因素，而促性腺激素的作用則可能是次要的。朱輝等8認為，注射外源性雄激素雖可誘發(fā)卵巢多

6、囊改變,但在形態(tài)、激素改變及對治療的反應等許多方面都與人PCOS有很大差別。 2 雌激素造模法 常用的是戊酸雌二醇(EV)造模法。戊酸雌二醇是天然雌二醇的戊酸鹽，具有雌激素的藥理作用。該方法造模的基本原理，是根據(jù)高雌激素使垂體對下丘腦的GnRH的敏感性增加，LH水平上升，同時持續(xù)的雌激素刺激對垂體FSH有抑制作用，從而出現(xiàn)PCOS典型的垂體內(nèi)分泌 環(huán)境 的病理。Brawer等9，10采用成年未交配大鼠，體重200220g，出現(xiàn)兩次 規(guī)律 的4天1次的動情周期者進行造模，一次性注射戊酸雌二醇2mg/只，并分別在7、15、30、60天處死，分階段觀察。結(jié)果提示60天大鼠卵巢呈現(xiàn)多囊樣改變，組織學方

7、面卵巢體積減小，各級卵泡在數(shù)量上均有不同程度的減少，部分次級卵泡表現(xiàn)為囊性擴張，顆粒細胞層次減少，稀疏排列，卵論膜細胞和間質(zhì)細胞增生明顯，即囊性卵泡形成。FSH和LH水平呈現(xiàn)一個先降后升的趨勢，但均較對照組降低，無顯著性差異。Brawer指出促性腺激素水平是一個誘導PCOS的重要因素，F(xiàn)SH對多囊卵巢形成的直接作用不明顯，但其在初級卵泡發(fā)育成次級卵泡的過程中仍是刺激因素，而高頻率低幅度的LH 水平則有可能與多囊卵巢形成直接相關。這與雄激素建模者的觀點存在差異。Lara等11在研究神經(jīng)調(diào)節(jié)對多囊卵巢綜合征形成的作用時同樣采用了戊酸雌二醇誘導的大鼠模型，使用SpragueDawley(SD)大鼠取代了Wistar大鼠，取模型在給藥后第30天和第60天的標本，發(fā)現(xiàn)有關指標與Brawer模型相同。不同的學者又對不同給藥劑量進行了摸索。StenerVictorin等12對SD大鼠模型的誘導劑戊酸雌二醇進行了劑量上的調(diào)整，即不同時間不同劑量的誘導劑的影響。分別一次性注射戊酸雌二醇1mg/只、2mg/只、4mg/只于不同劑量組，并分別在15、30、60天處死動物，觀察卵巢形態(tài)及其他改變，結(jié)果提示4mg/只劑量組60天時卵巢呈現(xiàn)多囊樣改變，其余各項指標與人PCOS接近。但卵巢體積隨劑量和時間的遞增呈減小趨勢，研究者認為這可能與陳舊性黃體不斷減少而無