心脈靈注射液對內(nèi)毒素休克大鼠海馬組織NOS活性的影響

1、    心脈靈注射液對內(nèi)毒素休克大鼠海馬組織NOS活性的影響        摘要：采用尾靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素復制大鼠內(nèi)毒素休克模型，檢測動物血壓、腦系數(shù)、海馬組織一氧化氮合酶(NOS)活性及海馬CA1區(qū)形態(tài)學改變，探討心脈靈注射液對內(nèi)毒素休克大鼠的作用機理。結(jié)果顯示：與病理組相比，注入心脈靈注射液后1h、6h，動物血壓上升，腦系數(shù)下降，海馬組織NOS活性顯著增高，海馬CA1區(qū)神經(jīng)元損傷明顯減輕，動物無死亡。提示心脈靈注射液能夠改善內(nèi)毒素休克所致的低血壓及腦水腫，保護海馬CA

2、1區(qū)神經(jīng)元，增強海馬組織NOS活性，起到抗內(nèi)毒素休克的作用。關(guān)鍵詞：心脈靈注射液；內(nèi)毒素休克；一氧化氮合酶；海馬；大鼠 Effects of Xinmailing Injection on NOS Activity of HippocampalTissue of the Endotoxin Shocked RatTao Hong(陶虹),Li Xiaoyue(李小粵),Liu Zhaohui(劉朝暉),et al.(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)ABSTRACT: Injecting col

3、itoxin to caudal vein was used to duplica te rat mod el of endotoxin shock. Examine blood pressure, cerebral coefficient, nitrous oxi de synthetase (NOS) activity of hippocampal tissue and morphological modificatio n in the CA1 section of the hippocampal tissue, to discuss the mechanism of action of

4、 Xinmailing Injection on the endotoxin shocked rat. Results: Compared with the pathologic group, after injecting Xinmailing 1h and 6h respectively, the blood pressure was increased, cerebral coefficient decreased, NOS activity of hippocampal tissue markedly acce ntuated, the injured neurons of the C

5、A1 section of hippocampal tissue markedl y rel ieved. It suggests that Xinmailing Injection can improve the hypotension and ven ous edema caused by endotoxin shock, protect neurons of the CA1 section of hippo campal tissue, enhance the NOS activity of hippocampal tissue, so to take an eff ection of

6、anti-endotoxin shock.KEY WORDS: Xinmailing Injection; Endotoxin shock; NOS; hippocamp al tissue; Rat心脈靈注射液是在四逆湯基礎(chǔ)上研制成的注射液，具有回陽救逆，益氣固脫的功效。研究表明1,2，它對狗、兔、大鼠等內(nèi)毒素休克有顯著療效。本實驗著重檢測內(nèi)毒素休克大鼠海馬組織一氧化氮合酶(NOS)活性，觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)變化，以及心脈靈注射液對其的影響，為闡明心脈靈注射液抗休克的作用機制提供實驗依據(jù)。1材料與方法1.1材料雄性Wistar大鼠(北京醫(yī)科大學實驗動物中心提供)，體重140200g；大

7、腸桿菌內(nèi)毒素(北京生物制品所提供，批號：810011)；心脈靈注射液(北京中醫(yī)藥大學制劑教研室提供)；RBP-1型大鼠尾壓心率測定儀(中日友好醫(yī)院臨床醫(yī)學研究所提供)；NOS活性試劑盒(軍事醫(yī)學科學院放射醫(yī)學研究所提供，批號：970825)；紫外分光光度計(HITACHI，U-2000)。1.2方法1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)檢測：取大鼠腦組織冠狀切面，20%福爾馬林固定，石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察。±s表示檢測結(jié)果，用t檢驗法比較組間差異的顯著性。2實驗結(jié)果2.1心脈靈注射液對內(nèi)毒素休克大鼠血壓的影響實驗前大鼠平均血壓為(18.30±0.56)kPa(n=25)，注入內(nèi)毒素后血壓呈

8、不可逆性下降，1h降至(4.40±2.72)kPa，6h降為(3.36±3.36)kPa，與實驗前相比有顯著差異(P0.001)；治療組血壓回升，1h升至(10.42±2.61)kPa，6h繼續(xù)上升到(12.22±3.10)kPa(各組均為n=5)，病理組6h死亡率為57.14%，其余組無死亡。2.2心脈靈注射液對內(nèi)毒素休克大鼠海馬組織NOS活性的影響病理組1h、6h海馬組織NOS活性迅速降低，與正常組比較有顯著差異(P0.001)，隨著休克的發(fā)展，NOS活性呈下降趨勢；治療組1h、6hNOS活性較病理組明顯升高(分別為P0.01、P0.001)。見表1

9、。表1心脈靈注射液對內(nèi)毒素休克大鼠海馬組織NOS活性的影響(nmol/(ming)；±s；n=5)組別NOS活性1h6h正常組0.6218±0.0719病理組-0.3109±0.0777*-0.4275±0.0719*治療組0.1166±0.0991*0.3109±0.0777*注：與正常組比較*P0.05*P0.01*P0.001； 與病理組比較P0.01P0.0012.3心脈靈注射液對內(nèi)毒素休克大鼠腦系數(shù)的影響正常組1h腦系數(shù)為0.93±0.01，病理組1h、6h腦系數(shù)分別為1.05±0.05，1.09

10、7;0.04，均顯著高于正常組(P0.05)；用心脈靈注射液治療后，腦系數(shù)呈持續(xù)降低趨勢；1h、6h分別為1.03±0.06，1.00±0.06，與病理組比較差異不明顯(各組均為n=5)。2.4心脈靈注射液對內(nèi)毒素休克大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響光鏡下，正常組CA1區(qū)神經(jīng)元呈復層排列，細胞形態(tài)正常；病理組1h變化不明顯，6h可見神經(jīng)元排列紊亂，有的出現(xiàn)核固縮、核碎裂、空泡變性，部分神經(jīng)元腫脹、溶解、脫失成為鬼影細胞，并有神經(jīng)細胞被噬現(xiàn)象，血管與周圍組織間隙加寬；治療組CA1區(qū)神經(jīng)元排列整齊，細胞結(jié)構(gòu)基本正常，神經(jīng)元周圍組織未見明顯異常，6h比1h有更明顯的改善。3討

11、論用靜脈注射內(nèi)毒素的方法復制大鼠休克模型，結(jié)果顯示動脈血壓呈不可逆下降。動物表情淡漠，四肢厥冷，呼吸微弱，相當于中醫(yī)厥證的陽氣衰微型，進一步發(fā)展可導致死亡。用心脈靈注射液治療后，大鼠血壓持續(xù)回升，動物肢體轉(zhuǎn)溫、表情自然、呼吸平穩(wěn)，并且無死亡。說明心脈靈注射液具有回陽救逆、益氣固脫的作用，能夠升高血壓、降低死亡率，對內(nèi)毒素休克有顯著療效。一氧化氮(NO)是一種具有多種生理功能的介質(zhì)，能夠調(diào)節(jié)微血管血流、抑制血小板聚集、防止白細胞激活和附壁4。NO合成釋放異常與內(nèi)毒素休克有密切關(guān)系，由于NO必須在NOS催化下以L-Arg為底物合成，故本實驗通過檢測海馬組織NOS活性來反映NO的變化情況，以探討心脈

12、靈注射液抗內(nèi)毒素休克的機理。實驗結(jié)果顯示，內(nèi)毒素休克大鼠的海馬組織NOS活性較正常組明顯降低，并隨休克的發(fā)展呈持續(xù)下降趨勢。海馬神經(jīng)元對缺血缺氧尤為敏感5，當內(nèi)毒素入血激活機體某些潛在的反應系統(tǒng)引起微循環(huán)障礙時，腦組織灌流不足，可導致海馬神經(jīng)元的損傷；此外內(nèi)毒素刺激機體產(chǎn)生細胞因子、氧自由基等，也可在一定程度上造成海馬神經(jīng)元的損傷。這與我們在光鏡下觀察到的病理組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元明顯損傷、脫失、神經(jīng)細胞及細胞間質(zhì)水腫的結(jié)果是一致的。由于海馬神經(jīng)元中有濃集的NOS，結(jié)合NOS活性及海馬神經(jīng)元形態(tài)觀察結(jié)果，我們推測：NOS活性降低是由海馬組織被破壞、大量NOS神經(jīng)元損傷、丟失引起的。NOS活性下降

13、使NO的產(chǎn)生減少，因而血管收縮，血液灌流更加不足，海馬組織的損傷和腦細胞的破壞愈加嚴重。對海馬CA1區(qū)形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果顯示：病理組6h的損傷明顯重于1h。同時血液灌流障礙引起腦組織缺血缺氧，腦細胞能量代謝障礙，鈉泵功能減低，毛細血管通透性增高，導致腦水腫。病理組腦系數(shù)較正常組明顯升高，正反映了腦水腫的存在。提示：NOS活性下降促進了海馬損傷及腦水腫，進一步導致腦功能障礙，使休克惡化。由此推測：NOS活性降低在內(nèi)毒素休克的發(fā)展過程中有重要意義。實驗還觀察到，治療組海馬組織NOS活性較病理組顯著增高，這反映出海馬組織結(jié)構(gòu)得到保護、NOS神經(jīng)元功能逐漸恢復，與光鏡下對海馬CA1區(qū)的形態(tài)學觀察結(jié)果相吻合?？梢娦拿}靈注射液有良好的保護腦組織、增強海馬組織NOS活性的作用。作者簡介：陶虹，女，22歲，在校本科生作者單位：北京中醫(yī)藥大學