基因工程的基本操作程序

1、1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序基因工程基本操作的四個(gè)步驟基因工程基本操作的四個(gè)步驟1 1、目的基因的獲取、目的基因的獲取2 2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3 3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4 4、目的基因的檢測(cè)與鑒定、目的基因的檢測(cè)與鑒定（前提）（前提）（核心）（核心）（關(guān)鍵）（關(guān)鍵）（保證）（保證）一、目的基因的獲取一、目的基因的獲取( (一一) )、目的基因主要是、目的基因主要是_編碼蛋白質(zhì)的基因編碼蛋白質(zhì)的基因請(qǐng)舉出三個(gè)以上的例子請(qǐng)舉出三個(gè)以上的例子（二）、獲取目的基因的常用方法有哪些（二）、獲取目的基因的常用方法有哪些? ?1 1、

2、從基因文庫(kù)中獲取、從基因文庫(kù)中獲取2 2、利用、利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增3 3、人工合成、人工合成請(qǐng)閱讀請(qǐng)閱讀P9P9第一和二兩段第一和二兩段一、目的基因的獲取一、目的基因的獲?。ㄒ唬幕蛭膸?kù)中獲取目的基因（一）從基因文庫(kù)中獲取目的基因1.1.基因文庫(kù)：基因文庫(kù)：概念見(jiàn)概念見(jiàn)P9P92.2.基因文庫(kù)的分類(lèi)基因文庫(kù)的分類(lèi): :種種類(lèi)類(lèi)基因組基因組DNA文庫(kù)：文庫(kù)：含有一種生物的含有一種生物的全部全部基因基因部分基因文庫(kù)：部分基因文庫(kù)：只包含了一種生物的只包含了一種生物的部分部分基因，基因， 如：如：cDNA文庫(kù)文庫(kù)（先建立基因文庫(kù)，再?gòu)闹泻Y選；）（先建立基因文庫(kù)，再?gòu)闹泻Y選；）提取某種

3、生物的全部提取某種生物的全部DNADNA用適當(dāng)?shù)南拗泼盖杏眠m當(dāng)?shù)南拗泼盖幸欢ù笮〉囊欢ù笮〉腄NADNA片段片段將將DNADNA片段與載體連接片段與載體連接導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存基因組文庫(kù)基因組文庫(kù)3 3、構(gòu)建基因文庫(kù)、構(gòu)建基因文庫(kù)（1 1）構(gòu)建基因組文庫(kù)）構(gòu)建基因組文庫(kù)某種生物的單鏈某種生物的單鏈mRNAmRNA單鏈互補(bǔ)單鏈互補(bǔ)DNADNA雙鏈雙鏈cDNAcDNA片段片段導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存與載體連接與載體連接cDNAcDNA文庫(kù)文庫(kù)反（逆）轉(zhuǎn)錄酶反（逆）轉(zhuǎn)錄酶DNADNA聚合酶聚合酶（2 2）構(gòu)建）構(gòu)建cDNAcDNA文庫(kù)文庫(kù)3.3.構(gòu)建基因文庫(kù)構(gòu)建基因文庫(kù)基因組文庫(kù)

4、和部分基因組文庫(kù)基因組文庫(kù)和部分基因組文庫(kù)(cDNA文庫(kù)文庫(kù))比較比較u基因文庫(kù)基因文庫(kù)中不是直接保管相應(yīng)基因，中不是直接保管相應(yīng)基因，而是而是保存受體菌保存受體菌，菌中含基因。，菌中含基因。4 4、從基因文庫(kù)直接獲取目的基因、從基因文庫(kù)直接獲取目的基因怎樣從基因文庫(kù)中獲取目的基因呢？怎樣從基因文庫(kù)中獲取目的基因呢？（1 1）獲取目的基因的根據(jù)：）獲取目的基因的根據(jù)：如：根據(jù)基因的核苷酸序列；如：根據(jù)基因的核苷酸序列； 基因的功能；基因的功能； 基因在染色體上的位置；基因在染色體上的位置； 基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA； 基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性?；蚍g產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性。4 4、從基

5、因文庫(kù)直接獲取目的基因、從基因文庫(kù)直接獲取目的基因（2 2）用）用DNADNA探針探針從基因文庫(kù)中獲取目的基因從基因文庫(kù)中獲取目的基因不需要模板，但需要知道序列，來(lái)構(gòu)建探針。不需要模板，但需要知道序列，來(lái)構(gòu)建探針。4 4、從基因文庫(kù)直接獲取目的基因、從基因文庫(kù)直接獲取目的基因（2 2）用）用DNADNA探針探針從基因文庫(kù)中獲取目的基因從基因文庫(kù)中獲取目的基因不需要模板，但需要知道序列，來(lái)構(gòu)建探針。不需要模板，但需要知道序列，來(lái)構(gòu)建探針。也可以用也可以用PCR方式從基因文庫(kù)中獲取目的基因方式從基因文庫(kù)中獲取目的基因?yàn)槭裁匆獦?gòu)建基因文庫(kù)？直接從含目的基因的為什么要構(gòu)建基因文庫(kù)？直接從含目的基因的生

6、物體內(nèi)提取不行嗎？生物體內(nèi)提取不行嗎？構(gòu)建基因文庫(kù)是獲取目的基因的方法之一，并不是唯一的方構(gòu)建基因文庫(kù)是獲取目的基因的方法之一，并不是唯一的方式。式。如果所需要的目的基因序列已知如果所需要的目的基因序列已知，就可以通過(guò)，就可以通過(guò)PCR方式方式從含有該基因的生物的從含有該基因的生物的DNA中，直接獲得，也可以通過(guò)反轉(zhuǎn)錄中，直接獲得，也可以通過(guò)反轉(zhuǎn)錄，用，用PCR方式從方式從mRNA中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫(kù)。中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫(kù)。但如果但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段的一段，或想從一種生物體內(nèi)獲得許多

7、基因，或者想知道這，或想從一種生物體內(nèi)獲得許多基因，或者想知道這種生物與另一種生物之間有多少基因不同，或者想知道一種種生物與另一種生物之間有多少基因不同，或者想知道一種生物在個(gè)體發(fā)育的不同階段表達(dá)的基因有什么不同，或者想得生物在個(gè)體發(fā)育的不同階段表達(dá)的基因有什么不同，或者想得到一種生物的全基因組序列，往往就需要構(gòu)建基因文庫(kù)。到一種生物的全基因組序列，往往就需要構(gòu)建基因文庫(kù)。（二）、利用（二）、利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因（二）、利用（二）、利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因前提：有一段已知目的基因的核苷酸序列。前提：有一段已知目的基因的核苷酸序列。以便合成引物

8、。以便合成引物。原理：利用原理：利用DNA雙鏈復(fù)制原理雙鏈復(fù)制原理n 過(guò)程：過(guò)程：變性、退火、延伸三步曲變性、退火、延伸三步曲變性：變性：加熱至加熱至90909595雙鏈雙鏈DNADNA解鏈成解鏈成為單鏈為單鏈DNADNA退火：退火：冷卻至冷卻至55556060部分引物與模部分引物與模板的單鏈板的單鏈DNADNA的特定的特定互補(bǔ)部位相配對(duì)和互補(bǔ)部位相配對(duì)和結(jié)合結(jié)合延伸：延伸：加熱至加熱至70707575在在TaqTaq酶作用下，酶作用下，合成互補(bǔ)的新合成互補(bǔ)的新DNADNA鏈鏈變性變性退火退火延伸延伸注意：雙鏈注意：雙鏈DNA中，中，G和和C比例越高，比例越高，DNA變性溫度越高。變性溫度越高

9、。（二）、利用（二）、利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因 概念：概念：PCRPCR全稱(chēng)為全稱(chēng)為_(kāi)，是一項(xiàng)，是一項(xiàng) 在生物在生物_復(fù)制復(fù)制_的核酸合成技術(shù)的核酸合成技術(shù) 條件：條件：_、 _、_ _ 、 _._.原理：原理：_方式：以方式：以_方式擴(kuò)增，即方式擴(kuò)增，即_（n n為擴(kuò)增為擴(kuò)增循循 環(huán)的次數(shù)）環(huán)的次數(shù)）結(jié)果：結(jié)果：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體外體外特定特定DNADNA片段片段DNADNA復(fù)制復(fù)制有一段已知基因的核苷酸序列有一段已知基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸一對(duì)引物一對(duì)引物耐熱的耐熱的DNADNA聚合酶（聚合酶（TaqTaq酶）酶）指數(shù)指數(shù)2 2n n

10、使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)增使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬(wàn)倍地?cái)U(kuò)增二、利用二、利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因過(guò)程：過(guò)程：a a、DNADNA變性（變性（90-9590-95）：雙鏈）：雙鏈DNADNA模板模板 在熱作用下，在熱作用下，_斷裂，形成斷裂，形成_b b、退火（復(fù)性、退火（復(fù)性55-6055-60）：系統(tǒng)溫度降低，引）：系統(tǒng)溫度降低，引 物與物與DNADNA模板結(jié)合，形成局部模板結(jié)合，形成局部_。 c c、延伸（、延伸（70-7570-75）：在）：在TaqTaq酶的作用下，從酶的作用下，從 引物處延伸，合成與模板互補(bǔ)引物處延伸，合成與模板互補(bǔ) 的的_

11、。 氫鍵氫鍵單鏈單鏈DNADNA雙鏈雙鏈DNADNA鏈鏈PCRPCR技術(shù)技術(shù)DNADNA復(fù)制復(fù)制過(guò)程過(guò)程DNADNA變性（變性（90909595）退火退火（復(fù)性（復(fù)性55556060）子鏈延伸子鏈延伸（70707575）重復(fù)循環(huán)重復(fù)循環(huán)DNADNA復(fù)制起始，復(fù)制起始，RNARNA引物形成引物形成DNADNA片段生成片段生成RNARNA引物水解引物水解完整的完整的DNADNA分子形成分子形成相同相同點(diǎn)點(diǎn)原則原則堿基互補(bǔ)配對(duì)堿基互補(bǔ)配對(duì)條件條件模板、原料、能量、酶、引物等模板、原料、能量、酶、引物等不同不同點(diǎn)點(diǎn)解旋方解旋方式式氫鍵在高溫下斷氫鍵在高溫下斷裂，雙鏈全部解裂，雙鏈全部解開(kāi)開(kāi)解旋酶催化氫

12、鍵逐步斷裂解旋酶催化氫鍵逐步斷裂場(chǎng)所場(chǎng)所體外體外主要在細(xì)胞核中主要在細(xì)胞核中引物引物DNADNARNARNA酶酶熱穩(wěn)定熱穩(wěn)定DNADNA聚合酶聚合酶（TaqTaq酶）酶）解旋酶、解旋酶、DNADNA聚合酶等聚合酶等結(jié)果結(jié)果在短時(shí)間內(nèi)形成在短時(shí)間內(nèi)形成大量的大量的DNADNA片段片段形成完整的形成完整的DNADNA分子分子 33.(8 33.(8分分) )請(qǐng)回答基因工程方面的有關(guān)問(wèn)題：請(qǐng)回答基因工程方面的有關(guān)問(wèn)題： （1 1）利用）利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基本因，其原理與細(xì)胞內(nèi)技術(shù)擴(kuò)增目的基本因，其原理與細(xì)胞內(nèi)DNADNA復(fù)制復(fù)制類(lèi)似（如下圖所示）。圖中引物中為單鏈類(lèi)似（如下圖所示）。圖中引

13、物中為單鏈DNADNA片段，它是子片段，它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。鏈合成延伸的基礎(chǔ)?！皾h水丑生的生物同行漢水丑生的生物同行”超級(jí)群大型超級(jí)群大型公益活動(dòng)：歷年高考題公益活動(dòng)：歷年高考題PPT版制作。版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。以任何形式用于商業(yè)目的。2012年年1月月15日，漢水丑生標(biāo)記。日，漢水丑生標(biāo)記。 從理論上推測(cè)，第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物從理論上推測(cè)，第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A A的的DNADNA片段片段所占比例為所占比例為 。 在第在第 輪循環(huán)產(chǎn)物中開(kāi)始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等輪循環(huán)產(chǎn)物中開(kāi)始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的長(zhǎng)

14、的DNADNA片段。片段。15/16 三三 “漢水丑生的生物同行漢水丑生的生物同行”超級(jí)群大型超級(jí)群大型公益活動(dòng)：歷年高考題公益活動(dòng)：歷年高考題PPT版制作。版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。以任何形式用于商業(yè)目的。2012年年1月月15日，漢水丑生標(biāo)記。日，漢水丑生標(biāo)記。模板DNA95PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過(guò)程PCR的特點(diǎn)50引物1引物2DNA引物PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過(guò)程PCR的特點(diǎn)引物1引物2DNA引物72Taq酶Taq酶PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過(guò)程PCR的特點(diǎn)72第1輪結(jié)束第2輪開(kāi)始P

15、CR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過(guò)程PCR的特點(diǎn)955072TaqTaqTaqTaqPCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過(guò)程PCR的特點(diǎn)72第2輪結(jié)束 （2 2）設(shè)計(jì)引物是）設(shè)計(jì)引物是PCRPCR技術(shù)關(guān)鍵步驟之一。某同學(xué)設(shè)計(jì)的兩組技術(shù)關(guān)鍵步驟之一。某同學(xué)設(shè)計(jì)的兩組引物（只標(biāo)注了部分堿基序列）都不合理（如下圖），請(qǐng)分引物（只標(biāo)注了部分堿基序列）都不合理（如下圖），請(qǐng)分別說(shuō)明理由。別說(shuō)明理由。第一組：第一組：_引物引物I和引物和引物II局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效 引物引物II自身折疊后會(huì)出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效自身折疊后會(huì)出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對(duì)而失效“漢水丑生的生物同行

16、漢水丑生的生物同行”超級(jí)群大型超級(jí)群大型公益活動(dòng)：歷年高考題公益活動(dòng)：歷年高考題PPT版制作。版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。以任何形式用于商業(yè)目的。2012年年1月月15日，漢水丑生標(biāo)記。日，漢水丑生標(biāo)記?！皾h水丑生的生物同行漢水丑生的生物同行”超級(jí)群大型超級(jí)群大型公益活動(dòng)：歷年高考題公益活動(dòng)：歷年高考題PPT版制作。版制作。本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得本課件為公益作品，版權(quán)所有，不得以任何形式用于商業(yè)目的。以任何形式用于商業(yè)目的。2012年年1月月15日，漢水丑生標(biāo)記。日，漢水丑生標(biāo)記。（三）、人工合成目的基因（三）、人工

17、合成目的基因（在在DNA合成儀中合成）合成儀中合成）基因比較小，核苷酸序列已知基因比較小，核苷酸序列已知二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因工程的核心基因工程的核心目的：目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用?；蚰軌虮磉_(dá)和發(fā)揮作用。原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 與與RNARNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動(dòng)子啟動(dòng)子終止子終止子編碼區(qū)編碼區(qū)： 能轉(zhuǎn)錄，編碼蛋白質(zhì)能轉(zhuǎn)錄，編

18、碼蛋白質(zhì)非編碼區(qū)：非編碼區(qū)： 不編碼蛋白質(zhì)不編碼蛋白質(zhì), ,能調(diào)控遺傳信息表達(dá)能調(diào)控遺傳信息表達(dá)真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)啟動(dòng)子啟動(dòng)子終止子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游編碼區(qū)下游 內(nèi)含子內(nèi)含子 外顯子外顯子 與與RNARNA聚合酶聚合酶結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合位點(diǎn)編碼區(qū)編碼區(qū)：非編碼區(qū)：非編碼區(qū)：外顯子：外顯子： 內(nèi)含子：內(nèi)含子： 能編碼蛋白質(zhì)的序列能編碼蛋白質(zhì)的序列不能編碼蛋白質(zhì)的序列不能編碼蛋白質(zhì)的序列非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)RNA聚合酶聚合酶結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合位點(diǎn)外顯子外顯子內(nèi)含子內(nèi)含子終止子終止子啟動(dòng)子啟動(dòng)子原原核核真真

19、核核基因的結(jié)構(gòu)基因的結(jié)構(gòu)原核細(xì)胞原核細(xì)胞真核細(xì)胞真核細(xì)胞不同點(diǎn)不同點(diǎn)編碼區(qū)是編碼區(qū)是_的的編碼區(qū)是間隔的、編碼區(qū)是間隔的、_的的相同點(diǎn)相同點(diǎn)都由能夠編碼蛋白質(zhì)的都由能夠編碼蛋白質(zhì)的_和具和具有調(diào)控作用的有調(diào)控作用的_區(qū)組成的區(qū)組成的2、表達(dá)載體的組成、表達(dá)載體的組成1.1. 啟動(dòng)子啟動(dòng)子2.2. 終止子終止子3.3. 目的基因目的基因4.4. 標(biāo)記基因等標(biāo)記基因等質(zhì)粒質(zhì)粒DNADNA分子分子限制酶處理限制酶處理一個(gè)切口一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端兩個(gè)黏性末端兩個(gè)切口兩個(gè)切口獲得目的基因獲得目的基因DNADNA連接酶連接酶重組重組DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）同一種同一種3.3.過(guò)程過(guò)程:

20、 :載體載體與與表達(dá)載體表達(dá)載體的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因的區(qū)別：二者都有標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)兩部分和復(fù)制原點(diǎn)兩部分DNADNA片段。表達(dá)載體在載體片段。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子目的基因、啟動(dòng)子、終止子三部三部分結(jié)構(gòu)分結(jié)構(gòu)用到的工具酶：用到的工具酶：既用到限制酶切割載體，又既用到限制酶切割載體，又用到用到DNADNA連接酶將目的基因和載體拼接，兩種連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵啟動(dòng)子、終止子啟動(dòng)子、終止子對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞，目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受

21、體細(xì)胞，必需以表必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。注意注意1、構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，需用、構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，需用 切割切割含目的基因的含目的基因的DNA和載體。目的是和載體。目的是 。切割含目的基因的切割含目的基因的DNA和載體并非只能用同一種限制酶。和載體并非只能用同一種限制酶。2、為防止載體與目的基因自身環(huán)化，應(yīng)該怎么做？、為防止載體與目的基因自身環(huán)化，應(yīng)該怎么做？3、目的基因與載體成功連接的基礎(chǔ)是什么？、目的基因與載體成功連接的基礎(chǔ)是什么？4、目的基因的插入位點(diǎn)不是隨機(jī)的。、目的基因的插入位點(diǎn)不是隨機(jī)的。目的基因的插入不能破壞載體上自身需要的基因片段，目的基因的插入不能破壞載體

22、上自身需要的基因片段，以及其上的標(biāo)記基因，且插入在啟動(dòng)子和終止子之間。以及其上的標(biāo)記基因，且插入在啟動(dòng)子和終止子之間。5、受體細(xì)胞不同，基因表達(dá)載體的構(gòu)建也會(huì)有、受體細(xì)胞不同，基因表達(dá)載體的構(gòu)建也會(huì)有差異。差異?；蚬こ梯d體的構(gòu)建需要考慮的因素：基因工程載體的構(gòu)建需要考慮的因素：（1）基因的特點(diǎn)：基因的特點(diǎn)：若來(lái)自動(dòng)物的目的基因含有內(nèi)含子，若來(lái)自動(dòng)物的目的基因含有內(nèi)含子，不能用于轉(zhuǎn)基因植物；不能用于轉(zhuǎn)基因植物； 若基因產(chǎn)物是糖蛋白，該基因在原核生物中若基因產(chǎn)物是糖蛋白，該基因在原核生物中的表達(dá)蛋白不具備天然的活性；的表達(dá)蛋白不具備天然的活性；（2）要選擇強(qiáng)啟動(dòng)子或組織特異性啟動(dòng)子；要選擇強(qiáng)啟動(dòng)

23、子或組織特異性啟動(dòng)子；（3）要有選擇標(biāo)記基因；要有選擇標(biāo)記基因；三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞（一）轉(zhuǎn)化（一）轉(zhuǎn)化 （二）方法（二）方法將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胫参锛?xì)胞植物細(xì)胞將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)雱?dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)雽⒛康幕驅(qū)胛⑸锛?xì)胞微生物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法顯微注射法顯微注射法Ca2+Ca2+處理法處理法目的基因進(jìn)入目的基因進(jìn)入_內(nèi)，并且在內(nèi)，并且在 受體細(xì)胞內(nèi)維持受體細(xì)胞內(nèi)維持_和和_的過(guò)程的過(guò)程受體細(xì)胞受體細(xì)胞穩(wěn)定穩(wěn)定表達(dá)表達(dá)1 1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法：、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方

24、法：（1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 農(nóng)桿菌特點(diǎn)：農(nóng)桿菌特點(diǎn)：易感染雙子葉植物和裸子植物，對(duì)大多易感染雙子葉植物和裸子植物，對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒(méi)有感染能力數(shù)單子葉植物沒(méi)有感染能力原理：原理：Ti質(zhì)粒上的質(zhì)粒上的T-DNA可以轉(zhuǎn)可以轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染移到受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞染色體的色體的DNA上。上。過(guò)程：過(guò)程：優(yōu)點(diǎn)：經(jīng)濟(jì)、有效優(yōu)點(diǎn)：經(jīng)濟(jì)、有效（2）基因槍法基因槍法（3）花粉管通道法花粉管通道法2 2、將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞、將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞方法：顯微注方法：顯微注 射射 法法程序：程序：3 3、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞原核生物特點(diǎn)：繁殖快、單

25、細(xì)胞、遺傳物質(zhì)少原核生物特點(diǎn)：繁殖快、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)少方法：方法： 大腸桿菌大腸桿菌四、目的基因的檢測(cè)與鑒定四、目的基因的檢測(cè)與鑒定檢查是否成功檢查是否成功（一）、檢測(cè)（一）、檢測(cè)1 1、檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的、檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNADNA上是否插入上是否插入了目的基因了目的基因 .首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組首先取出轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA.用含目的基因的用含目的基因的DNA片段用放射性同位素片段用放射性同位素等作標(biāo)記等作標(biāo)記,以此做探針以此做探針.使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交使探針和轉(zhuǎn)基因生物的基因組雜交,若顯若顯示出雜交帶示出雜交帶,表明染色體已插入染色體表明染色體已插入染色體DNA中中（1）方法方法: :DNADNA分子雜交分子雜交（2）過(guò)程）過(guò)程:DNADNA分子雜交示意圖分子雜交示意圖 采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的DNADNA分分子的單鏈放在一起，如果這兩個(gè)單鏈具有互補(bǔ)子的單鏈放在一起，如果這兩個(gè)