藥典培訓(xùn)課件微生物

1、中國(guó)藥典2015年版主要增修訂內(nèi)容（微生物檢驗(yàn)部分）中國(guó)藥典2015年版主要增修訂內(nèi)容（微生物檢驗(yàn)部分）第四部主要變化：制劑通則制劑通則 1、整合：中國(guó)藥典2010版一部附錄【微生物限度】“.照微生物限度檢查法（附錄XIIIC）檢查.”整合為：“以動(dòng)物、植物、礦物來(lái)源的非單體成分制成的XX劑，照非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢査：微生物計(jì)數(shù)法（通則1105)和控制菌檢查法（通則1106)及非無(wú)菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)（通則1107)檢査，應(yīng)符合規(guī)定.” 包括：0101片劑0103膠囊劑0104顆粒劑 0108丸劑 2、修訂：中國(guó)藥典2010版附錄【無(wú)菌】“.用于燒傷或嚴(yán)重創(chuàng)傷的XX劑，照無(wú)菌檢查法.”修訂為

2、：“.用于燒傷（除輕度燒傷I或II外）、嚴(yán)重創(chuàng)傷的XX劑，依照無(wú)菌檢查法（通則1101）檢查.” 。 注意：用于燒傷治療如為非無(wú)菌制劑的，應(yīng)在標(biāo)簽上標(biāo)明“非無(wú)菌制劑” ；產(chǎn)品說(shuō)明書中應(yīng)注明“本品為非無(wú)菌制劑”，同時(shí)在適應(yīng)證下應(yīng)明確“ 用于程度較輕的燒傷( I 或淺II)” ；注意事項(xiàng)下規(guī)定“應(yīng)遵醫(yī)囑使用”。 包括：0109軟膏劑 乳膏劑 0112噴霧劑0113氣霧劑0114凝膠劑0115散劑 0118涂劑0119涂膜劑 3、新增： 0111吸入制劑：吸入液體制劑【無(wú)菌】依照（通則1101）；可轉(zhuǎn)變成蒸汽的制劑【微生物限度】照非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢査：微生物計(jì)數(shù)法（通則1105)和控制菌檢查法（

3、通則1106)及非無(wú)菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)（通則1107)檢査，應(yīng)符合規(guī)定。 4、分列： 0127洗劑0128沖洗劑0129灌腸劑：分開列，沖洗劑做【無(wú)菌】【內(nèi)毒素】或【熱源】，其他制劑做【微生物限度】。 0117搽劑0118涂劑0119涂膜劑，搽劑做【微生物限度】，其余做【無(wú)菌】或【微生物限度】。 生物檢查法生物檢查法 無(wú)菌檢查：主要變化： 檢驗(yàn)環(huán)境：應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，試驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無(wú)菌檢查的要求。培養(yǎng)基：1、改良馬丁培養(yǎng)基由胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基代替 厭氧菌厭氧菌需氧菌需氧菌真菌真菌硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基沙氏葡

4、萄糖液體培養(yǎng)基 2、名稱變化：“選擇性培養(yǎng)基”改為“中和或滅活用培養(yǎng)基” 3、培養(yǎng)基靈敏度檢查： 菌液制備：金葡、銅綠、枯草的培養(yǎng)物在胰酪大豆胨培養(yǎng)基 上進(jìn)行（10版為營(yíng)養(yǎng)瓊脂和營(yíng)養(yǎng)肉湯）；白色念珠菌、黑曲霉的培養(yǎng)物在沙氏培養(yǎng)基上進(jìn)行（10版為改良馬丁） 接種量的變化：硫乙和胰酪大豆胨均改為7支，枯草接種至胰酪大豆胨培養(yǎng)。（10版枯草接種至硫乙） 方法適用性試驗(yàn)： 1、名稱：（10版方法驗(yàn)證試驗(yàn)）改為方法適用性試驗(yàn)。 2、操作：薄膜過(guò)濾法：將培養(yǎng)基加至濾筒內(nèi)培養(yǎng)，刪除“取出濾膜接種至.培養(yǎng)基的操作”。直接接種法：接種量硫乙和胰酪大豆胨均改為6支，枯草接種至胰酪大豆胨培養(yǎng)。（10版枯草接種至硫乙

5、） 3、培養(yǎng)時(shí)間：不得超過(guò)5天，（10版為35天） 其他 ： 供試品的無(wú)菌檢查： 1、檢驗(yàn)數(shù)量：整合原二，三部抽樣要求。要求基本不變 2、陽(yáng)性對(duì)照：陽(yáng)性對(duì)照管培養(yǎng)要求為72小時(shí)內(nèi)應(yīng)生長(zhǎng)良好（10版為4872小時(shí)應(yīng)生長(zhǎng)良好） 3、薄膜過(guò)濾法：一般應(yīng)采用封閉式薄膜過(guò)濾器，刪除了“也可使用一般薄膜過(guò)濾器”。明確了設(shè)備使用要求。水溶液供試品：混合至含不少于100ml適宜稀釋液的無(wú)菌容器中.（10版為“混合至含適量稀釋液的無(wú)菌容器中.”），規(guī)定了稀釋液最低量。 4、直接接種法： 固體供試品：接種時(shí)，取規(guī)定量，直接等量接種至各管培 養(yǎng)基中.（增加“等量”二字）。 生物檢查法生物檢查法 非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度

6、檢查：修訂思路： 將中國(guó)藥典2010年版一、二、三部的相關(guān)內(nèi)容合并 參考EP7.0 USP35 JP XV標(biāo)準(zhǔn)，修訂限度標(biāo)準(zhǔn)生物檢查法生物檢查法 非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查： 1105微生物計(jì)數(shù)法： 主要變化： 細(xì)分：將10版一二部附錄 微生物限度檢查法 分為三部分：1105非無(wú)菌產(chǎn)品檢查：微生物計(jì)數(shù)法、1106非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法、1107非無(wú)菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)。 試驗(yàn)環(huán)境：應(yīng)符合微生物限度檢查的要求。 計(jì)數(shù)方法： 1、增加MPN法。對(duì)于測(cè)量某些微生物污染量很小的供試品，最可能數(shù)法MPN法可能是更適合的方法。2、計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查和方法適用性試驗(yàn)： 試驗(yàn)菌株：金葡、銅綠、

7、枯草、白念、黑曲霉。去掉大腸埃希，增加銅綠。菌液制備同【無(wú)菌】 適用性檢查結(jié)果判定：主要是標(biāo)準(zhǔn)變化，被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.52 范圍內(nèi).（10版為不小于70%） 方法適用性：主要是判斷標(biāo)準(zhǔn)變化，樣品回收率在0.52；方法適用性試驗(yàn)更為詳細(xì)，（供試品制備方法的增加變化）；增加MPN法方法適用性：采用M P N法時(shí)，試驗(yàn)組菌數(shù)應(yīng)在菌液對(duì)照組菌數(shù)的95%置信限內(nèi)。 3、供試品檢查： 檢驗(yàn)量：檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)從2 個(gè)以上最小包裝單位中抽取供試品，大蜜丸還不得少于4 丸，膜劑還不得少于4 片。 培養(yǎng)基：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于測(cè)定需氧菌總數(shù)；

8、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于測(cè)定霉菌和酵母菌總數(shù)。非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查： 1106控制菌檢查法：培養(yǎng)基適用性 培養(yǎng)基變化：如營(yíng)養(yǎng)瓊脂變?yōu)橐壤掖蠖闺?，改良馬丁變?yōu)樯呈系取?控制菌檢查：耐膽鹽革蘭陰性菌替代大腸菌群大腸埃希氏菌檢查方法變化，TSB增菌，不用MUG了非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查： 1107非無(wú)菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)一、限度標(biāo)準(zhǔn)：更為清楚明了（共8項(xiàng)4個(gè)表） 1、制劑通則、品種項(xiàng)下要求無(wú)菌的制劑及標(biāo)示無(wú)菌的制劑和原輔制劑通則、品種項(xiàng)下要求無(wú)菌的制劑及標(biāo)示無(wú)菌的制劑和原輔料料 應(yīng)符合無(wú)菌檢查法2、用于手術(shù)、燒傷或嚴(yán)重創(chuàng)傷的局部給藥制劑用于手術(shù)、燒傷或嚴(yán)重創(chuàng)傷的局部給藥制劑 應(yīng)符合無(wú)菌檢查法3、

9、非無(wú)菌化學(xué)藥品制劑、生物制品制劑、不含藥材原藥粉的中藥制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)注意需氧菌總數(shù)概念，10版為“菌落總數(shù)”4、非無(wú)菌含藥材原粉的中藥制劑微生物限度標(biāo)準(zhǔn)注意 檢查控制菌種類 A以原材料種類來(lái)決定：如口服給藥制劑（是否含豆豉、神曲等原料）大腸埃希、沙門、耐鹽G- B以給藥部位來(lái)決定：如表皮粘膜 金葡 銅綠5、非無(wú)菌的藥用原料及輔料微生物限度標(biāo)準(zhǔn)6、中藥提取物及中藥飲片的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)10版為：中藥提取物及輔料參照相應(yīng)制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。 7. 有兼用途徑的制劑 應(yīng)符合各給藥途徑的標(biāo)準(zhǔn)。二、可接受最大菌數(shù) 最大可接受限度值遵守2倍規(guī)則，及101 CFU最大可接受為20藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)

10、量管理指導(dǎo)原則 前言：藥品微生物實(shí)驗(yàn)室“規(guī)范”指導(dǎo)原則，改為.“質(zhì)量管理”指導(dǎo)原則； 包括內(nèi)容為：人員、培養(yǎng)基、試劑、菌種、環(huán)境、設(shè)備、樣品、檢驗(yàn)方法、污染廢棄物處理、檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量保證檢測(cè)過(guò)程質(zhì)量控制、試驗(yàn)記錄、結(jié)果的判斷和檢測(cè)報(bào)告、文件等。（內(nèi)容更豐富）。 人員：實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室生物安全方面的培訓(xùn)，保證自身安全，防止微生物在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部污染； 培養(yǎng)基： 1、制備：容器的要求，不得影響培養(yǎng)基質(zhì)量，一般為玻璃容器.2、貯藏：培養(yǎng)基再融化一般采用水浴或流通蒸汽加熱，若采用其他溶解方法，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行評(píng)估，確認(rèn)該溶解方法不影響質(zhì)量。（強(qiáng)調(diào)評(píng)估） 試劑：微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有試劑接收、檢查和貯藏程序，以確保所

11、用試劑質(zhì)量符合相關(guān)要求。實(shí)驗(yàn)室用關(guān)鍵試劑，在開啟和貯藏過(guò)程中，應(yīng)對(duì)每批試劑的適用性進(jìn)行驗(yàn)證。. 菌種：強(qiáng)調(diào)“可追溯性”：藥品微生物檢驗(yàn)用的試驗(yàn)菌應(yīng)來(lái)自認(rèn)可的國(guó)內(nèi)外保藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的可以溯源的商業(yè)派生菌株. 環(huán)境： 1、實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行 生物安全：活菌操作區(qū)應(yīng)該配備生物安全柜，以避免危害性的生物因子對(duì)試驗(yàn)人員和實(shí)驗(yàn)環(huán)境造成的危害；病原菌微生物的分離鑒定應(yīng)在二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。 布局：明確規(guī)定無(wú)菌檢查應(yīng)在B級(jí)背景下的A級(jí)單向流潔凈區(qū)域或隔離器系統(tǒng)中進(jìn)行，微生物限度檢查應(yīng)在不低于D級(jí)背景下的B級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。AB區(qū)域的空氣供給應(yīng)通過(guò)終端高效空氣過(guò)濾器

12、 人員進(jìn)場(chǎng)：對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室使用權(quán)限要求限于經(jīng)授權(quán)的工作人員，實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)了解潔凈區(qū)進(jìn)出程序、更衣流程，該區(qū)域的限制要求等 2、環(huán)境監(jiān)測(cè)： 明確了監(jiān)測(cè)方法和參考限度指標(biāo)，要求制定完善的潔凈室和隔離系統(tǒng)的驗(yàn)證和環(huán)境監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，環(huán)境監(jiān)測(cè)項(xiàng)目和監(jiān)測(cè)頻率及對(duì)超標(biāo)結(jié)果的處理應(yīng)有書面程序。 消毒劑的使用 應(yīng)有消毒劑使用操作規(guī)程；定期監(jiān)測(cè)消毒效果 3、設(shè)備 微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)備除遵循實(shí)驗(yàn)室設(shè)備管理的要求外，還有特殊要求：特種設(shè)備，高壓鍋和生物安全柜的人員資質(zhì)要求；專用設(shè)備防止交叉污染的使用要求，如培養(yǎng)箱、高壓滅菌器； 定期檢定和校準(zhǔn) 溫度測(cè)量設(shè)備：培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、冰箱、低溫冰箱等 稱量設(shè)備 容量測(cè)定設(shè)備

13、：移液器、移液管 潔凈設(shè)備的性能監(jiān)控 生物安全柜、超凈工作臺(tái)、高效過(guò)濾器安裝調(diào)試后的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和定期再驗(yàn)證，保存相關(guān)記錄和測(cè)試結(jié)果（結(jié)合環(huán)境監(jiān)測(cè)記錄） 其他設(shè)備 懸浮粒子計(jì)數(shù)器、浮游菌采樣器定期校準(zhǔn) PH計(jì)、濕度計(jì)、定時(shí)器等對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響的關(guān)鍵參數(shù)檢測(cè)的儀器進(jìn)行校準(zhǔn)總結(jié) 一：全面與國(guó)際接軌： 新藥典參考EP7.0、USP35、JPXV標(biāo)準(zhǔn)，修訂中國(guó)藥典的微生物標(biāo)準(zhǔn)；參考?xì)W美日藥典標(biāo)準(zhǔn)修訂菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)表達(dá)方式；以需氧菌總數(shù)替代細(xì)菌數(shù)、耐膽鹽的格蘭陰性菌替代大腸菌群等等，并增加新的概念：如含菌量較低的供試品細(xì)菌總數(shù)測(cè)定使用最大可能數(shù)法、分散均勻并非一定要溶解等等，同時(shí)新藥典引入的偏差調(diào)查概念和內(nèi)容更具

14、體等等方面說(shuō)明，微生物檢驗(yàn)技術(shù)與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)要求接軌已成定勢(shì)。 二：實(shí)驗(yàn)環(huán)境的修訂： 2015年版藥典中對(duì)無(wú)菌檢查環(huán)境潔凈度規(guī)定：無(wú)菌檢查應(yīng)在B 級(jí)背景下的A 級(jí)單向流潔凈區(qū)域或D級(jí)背景下的隔離器中進(jìn)行。限度檢查要求在受控潔凈環(huán)境下的局部不低于B級(jí)單向流空氣區(qū)域進(jìn)行。 環(huán)境的提升，除了設(shè)備硬件的要求提高，還有驗(yàn)證和維持環(huán)境要求的提高。潔凈或無(wú)菌室應(yīng)配備獨(dú)立的空氣機(jī)組或空氣凈化系統(tǒng)，以滿足相應(yīng)的檢驗(yàn)要求，包括溫度和濕度的控制，壓力、照度和噪聲等都應(yīng)符合工作要求?？諝膺^(guò)濾系統(tǒng)應(yīng)定期維護(hù)和更換, 并保存相關(guān)記錄。 微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)劃分成相應(yīng)的潔凈區(qū)域和活菌操作區(qū)域，同時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模跁r(shí)間或空間上有效分隔不相容的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，將交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)降低到最低?；罹僮鲄^(qū)應(yīng)該配備生物安全柜，以避免危害性的生物因子對(duì)實(shí)驗(yàn)人員和實(shí)驗(yàn)環(huán)境造成的危害。 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境監(jiān)測(cè)要求提高，增加人員進(jìn)出表面微生物的監(jiān)測(cè)，以降低人員操作時(shí)帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)微生物室使用的消毒劑和清潔劑進(jìn)行驗(yàn)證，從而有效控制微生物，保證無(wú)菌環(huán)境達(dá)到要求。 微生物實(shí)驗(yàn)室需要加強(qiáng)人員在環(huán)境監(jiān)測(cè)時(shí)的操作規(guī)范，保證環(huán)境監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。而且實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室生物安全