天麻復方降壓膠囊中天麻有效成分提取工藝研究

1、天麻復方降壓膠囊中天麻有效成分提取工藝研究陳陸，馬超英，李芬，鄧月婷，蔣合眾（西南交通大學藥學院，四川 峨眉 614202）摘要： 目的 考察影響天麻降血壓有效成分的提取因素。 方法 采用單因素比較法和正交設計法對天麻降壓有效成分的提取工藝進行優(yōu)選。 結果 確定天麻的提取工藝為：用12，10，6倍量70%乙醇為提取溶劑，提取3次，前2次提取時間為1h，后1次為30min。 結論 該實驗確定的天麻提取工藝方法合理，穩(wěn)定可行。關鍵詞： 天麻素；多糖；正交試驗 Study on Extraction Process of Anti-hypertensive Activities of Gastrod

2、ia elata Bl.CHEN Lu, MA Chao-ying, LI Fen, DENG Yue-ting, Jiang He-zhong (Pharmacy School of Southwest Jiaotong University, Emeishan City, Sichuan 614202, China)Abstract: Objective To study the extraction conditions of anti-hypertensive activities in Gastrodia elata Bl. Methods The optimum extractio

3、n process of anti-hypertensive activities from Gastrodia elata Bl. was carried out through single comparative and orthogonal law. Results The extraction technology is to decoct Gastrodia elata Bl. with 70 percent alcohol for 3 times, with 12,10,6 times solvent each time and for 1h for the first 2 ti

4、mes and 0.5h for the last time. Conclusion The extraction process of Gastrodia elata Bl. is reasonable, stable and easy to operate.Key words: Gastrodin; Polysaccharides ; Orthogonal test 天麻為蘭科植物天麻Gastrodia elata Bl.的干燥塊莖，傳統(tǒng)上作為止痛、鎮(zhèn)靜劑用于治療癲癇、眩暈、風濕、高血壓等疾病基金項目：四川省峨眉山市2007年重點科技項目“天麻復方降壓膠囊的研制”(No.2007-1-30

5、)。作者簡介：陳陸（1983-），男（漢族），山東棗莊人，現(xiàn)為西南交通大學生物工程學院生物化學與分子生物學專業(yè)在讀碩士研究生,主要從事中藥制劑研究工作。通訊作者簡介：馬超英（1958-），男（漢族），山西黎城人，碩士，教授，主要從事中藥新藥開發(fā)方面的研究?，F(xiàn)代研究表明，天麻含有天麻素、香草醛、香草醇、琥珀酸、維生素、生物堿、多糖等物質，其中天麻素為主要活性成分，有明顯降血壓作用；另外，天麻多糖能增加心肌營養(yǎng)和腦血流量，提高細胞的免疫功能，有助于高血壓疾病的治療2?，F(xiàn)以浸膏收率、天麻多糖含量和天麻素含量為主要指標，考察提取條件，篩選出適合制備天麻復方降壓膠囊的天麻提取條件。1材料與儀器天麻藥材購

6、于四川峨眉仙山中藥科技發(fā)展有限公司；無水葡萄糖對照品由中國藥品生物制品檢驗所提供，批號：11；天麻素對照品由中國藥品生物制品檢驗所提供，批號：11；島津UV300紫外分光光度計；島津LC-20AT高效液相色譜儀；乙腈為色譜純，濃硫酸、苯酚、乙醇為分析純。2方法與結果 2.1天麻提取方式的考察稱取天麻粗顆粒25g三份，分別加入70%乙醇200ml采用超聲、冷凝回流和70浸漬的方式提取1h，提取液紗布過濾后定容至1000ml，按照2.3項下方法測定浸膏收得率、天麻素含量和天麻多糖含量，結果見表1。結果表明，冷凝回流對天麻的提取效率最高，實驗采用此方式。表1 提取方式考察表提取方式干浸膏收率多糖含量

7、天麻素含量超聲提取5.00%2.45%0.230%冷凝回流提取5.30%2.36%0.247%70浸漬提取3.23%1.43%0.202%2.2提取工藝的正交實驗研究2.2.1因素水平的選擇以對提取效果影響最顯著的因素：醇濃度（A）、溶劑量（B）、提取次數(shù)（C）、提取時間（D）4個因素進行考察，各取3個水平，進行L9（34）正交實驗，以浸膏收率、多糖含量、天麻素含量為指標進行綜合評分，并結合生產(chǎn)成本、生產(chǎn)周期等因素綜合評價，優(yōu)化天麻提取工藝。實驗以25g為研究量，因素水平設計見表2。表2 因素水平表水平 A 醇濃度 B 溶劑量（ml/g） C 提取次數(shù)（n） D 提取時間（h）170%12,1

8、0,1032250%10,8,821.5330%8,6,6112.2.2正交實驗方法與結果取天麻粗顆粒按表2設定的正交實驗方案冷凝回流提取。各組提取液紗布過濾后，均濃縮至100ml，再加水定容至1000ml，作為供試品。按照2.3項下方法測定浸膏收得率、天麻多糖含量和天麻素含量，結果見表3。表3 正交實驗結果試驗號考 察 因 素浸膏收率天麻素含量多糖含量綜合評分ABCDY1（%）Y2（%）Y3（%）Y1111112.400.4573.7498.51212228.030.3562.7376.36313335.190.2382.3653.354212312.430.3883.3287.385223

9、16.200.2141.9450.126231211.970.2933.2174.36731327.920.0961.3435.128321314.330.2144.0468.109332111.260.1793.5861.2276.07373.67080.32369.95070.62064.86074.98761.94754.81362.97746.19769.610R21.26010.69334.1268.003注：綜合加權評分由公式:Y=Y1+ Y2+ Y3=20×Y1/9.97+ 60×Y2/0.457+ 20×Y3/4.04計算而得。浸膏收率以平均值9.

10、97%計為20分，高于9.97%仍計20分，天麻素含量以最高0.457%計為60分，多糖含量以最高4.04%計為20分。由正交實驗結果可知，影響提取效果的因素順序為：C（提取次數(shù)）A（醇濃度）B（溶劑量）D（提取時間）。極差結果為A1A2A3,B1B2B3,C1C2C3,D1D3D2,直觀分析確定最佳提取工藝為：A1B1C1D1。鑒于D1和D3對實驗影響程度相近，考慮實際生產(chǎn)成本，可將提取時間（D）由2h調整為1h；同時藥物第3次提取時藥物有效成分已大量滲出，可縮短提取時間，減少溶劑用量。綜合考慮，將工藝優(yōu)化為：用12，10，6倍量70%乙醇為提取溶劑，提取3次，前2次提取時間為1h，后1次為

11、30min。2.2.3驗證實驗按照2.2.2確定的最佳工藝和優(yōu)化工藝進行驗證實驗。結果見表4。表4 驗證實驗結果工藝實驗號綜合評分綜合評分均值RSD（%）最佳工藝198.5698.0120.96297.52398.81498.58596.59優(yōu)化工藝197.8597.2440.58296.98397.04496.55597.80 驗證實驗結果表明，優(yōu)化工藝與最佳工藝結果相近，且優(yōu)化工藝的實驗結果重現(xiàn)性良好。2.3 相關指標的測定2.3.1浸膏收率的測定從已定容至1000ml的提取液中量取200ml（相當于生藥5g），移入已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，70水浴濃縮至干，放入105烘箱干燥6h，取出，置

12、干燥器中冷卻30min后，取出，精密稱重，計算浸膏收率。2.3.2苯酚-硫酸法測定天麻多糖含量32.3.2.1對照品溶液的制備精密稱取105干燥至恒重的無水葡萄糖對照品1.070g，置1000ml容量瓶中加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（1.07mg/ml）。2.3.2.2標準曲線的繪制精密量取對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分別置50ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各1ml，置錐形瓶中，分別加入蒸餾水2ml、6.25%苯酚溶液1ml，混勻，迅速加入硫酸5ml，搖勻，倒入具塞試管中，置沸水浴加熱15min，取出，冷卻至室溫，以第1份為空白，

13、在492nm的波長處測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標，葡萄糖對照品濃度（C）為橫坐標，繪制標準曲線，得標準曲線方程為A=0.0062C+0.0039，相關系數(shù)為r=0.9993,線性范圍為21.4ug/ml128.4ug/ml。2.3.2.3樣品的測定 精密量取天麻提取液樣品10ml，置100ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻，取1ml，置錐形瓶中，分別加入蒸餾水2ml、6.25%苯酚溶液1ml，混勻，迅速加入硫酸5ml，搖勻，倒入具塞試管中，置沸水浴加熱15min，取出，冷卻至室溫，在492nm處測定吸光度，計算天麻多糖含量。2.3.3 HPLC法測定天麻素的含量2.3.3.1色譜條件色譜柱為

14、Hypersil BDS C18柱（200×4.0mm，5um）；流動相為乙腈-0.05%磷酸溶液（3：97）；流速0.8ml/min；檢測波長220nm；柱溫30；進樣量6ul。2.3.3.2對照品溶液的制備精密稱取天麻素對照品1.8mg，置25ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得天麻素對照品溶液（72ug/ml）。2.3.3.3 標準曲線的繪制精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10ul，按上述色譜條件測定峰面積，以天麻素進樣量（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，繪制標準曲線，得標準曲線方程為Y=2347977.4X-7867.2，r=0.9999, 進樣量在0.144u

15、g0.720ug范圍內與峰面積呈良好線性關系。2.3.3.4樣品的測定取提取液樣品用0.45um的微孔濾膜過濾，棄初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液，注入高效液相色譜儀，計算天麻素含量。3討論天麻復方降壓膠囊制劑處方由天麻、枸杞、菊花組成，本研究主要為“天麻復方降壓膠囊的開發(fā)”進一步制劑研究提供實驗依據(jù)。課題前期通過動物實驗和臨床觀察對天麻復方降壓膠囊粗提取物進行了藥效學研究，結果表明，天麻作為主藥，有較好的降壓作用和保健效果。實驗主要從保留天麻中降血壓有效成分的出發(fā)點進行研究。工藝條件的確定可以從定量分析、TLC檢查、藥效實驗等方面考慮，其中藥效實驗尚存在藥效指標的選擇問題，同時成本較高，所以有必要針對中藥復方制劑的特點尋求一些新的制劑學工藝評價方法。另外，考慮到膠囊劑的服用量不宜過大，而天麻的出膏率較高，因而后期實驗對提取液進行了精制。采用水沉后高速離心的方法，可以把出膏率控制在6%左右，而天麻素和多糖的轉移率均能達到70%以上。參考文獻1 Eun-Kyoung Ahn, HYe-Jin Je