苯酚硫酸法測(cè)多糖含量

1、、硫酸苯酚法測(cè)多糖含量1、試劑配制1. 濃硫酸：分析純， 95.5%2. 5%苯酚：取苯酚 5 g，置 100 ml 容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻后，置棕 色試劑瓶 中，冰箱中冷藏儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?. 標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖（ Dextran, 瑞典 Pharmacia ）或分析純葡萄糖。準(zhǔn)確稱取 20m g 經(jīng) 105C 干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品于500ml 容量瓶中，蒸餾水溶解定容。2、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖（或葡萄糖） 10mg 于 250ml 容量瓶中，加水至刻度，分 別吸取 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 及 0.9ml ，各以蒸餾水補(bǔ)至 1.0ml ， 然后加入 5

2、%苯 酚 1ml 及濃硫酸 5.0ml, 搖勻冷卻，室溫放置 20min 以后于 490nm 測(cè) 光密度，以 1.0ml 水 按同樣顯色操作為空白，橫坐標(biāo)為多糖微克數(shù)，縱坐標(biāo)為光 密度值，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。123456780標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液0.20.30.40.50.60.70.80.90(mL蒸餾水（ mL0.80.70.60.50.40.30.20.11.05%苯酚（ mL0.50.50.50.50.50.50.50.50.5濃硫酸（ mL2.52.52.52.52.52.52.52.52.53 注意事項(xiàng)(1) 此法簡(jiǎn)單、快速、靈敏、重復(fù)性好，對(duì)每種糖僅制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，顏色持久。(2)制作標(biāo)準(zhǔn)線

3、宜用相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)多糖，如用葡萄糖，應(yīng)以校正系數(shù)0.9 校正 yg數(shù)。(3) 對(duì)雜多糖，分析結(jié)果可根據(jù)各單糖的組成比及主要組分單糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線的校正系數(shù)加以校正計(jì)算(4) 測(cè)定時(shí)根據(jù)光密度值 確定取樣的量。光密度值最好在 0.1 0.3 之間。 比如：小于 0.1 之下可以考慮取樣品時(shí)取 2 克，仍取 0.2ml 樣品液，如大于 0.3 可以減半 取 0.1ml 的樣品液測(cè)定。(5) 正常的反應(yīng)溶液是深棕色。糖越多顏色越深。注意硫酸的純度?？瞻椎念?色很深，說(shuō)明你的空白中的苯酚被氧化了深紅是醌 ( 苯酚氧化生成 )的顏色顏色過(guò)深的話 說(shuō)明你的酚的難度過(guò)大，一般是 5%但是沒(méi)遇到你說(shuō)的那么嚴(yán)重，不是深 紅色的做的好的 時(shí)候顏色很淺，顏色深點(diǎn)也有肯能。操作的時(shí)候有幾條你需要注意的，這些對(duì)你的檢測(cè)結(jié)果影響極大1、苯酚需要重蒸，配制的苯酚溶液需要妥善保存。加入硫酸基本操作： 硫酸2、樣品檢測(cè)的時(shí)候，向樣品中加了苯酚溶液需要迅速搖勻，沿壁加，最好