炙甘草湯對氣血兩虛證心律失常大鼠血清炎癥因子和心肌酶的影響

1、炙甘草湯對氣血兩虛證心律失常大鼠血清炎癥因子和心肌酶的影響         11-04-27 14:16:00     編輯：studa20       作者：陳蘭英，羅雄，羅穎穎，胡瑞剛，龔琴，陳筱，陳奇【摘要】  目的研究炙甘草湯對氣血兩虛證心律失常大鼠的保護作用。方法在放血和環(huán)磷酰胺并用致使大鼠氣血兩虛的基礎(chǔ)上舌下靜脈注射適量烏頭堿，復制大鼠氣血兩虛證心律失常模型，并用炙甘草湯進行防治，觀察炙甘草湯對

2、模型大鼠心電圖，血清心肌酶及血清炎癥因子超敏C反應蛋白(hs-CRP)、腫瘤壞死因子(TNF-)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)水平的影響。 結(jié)果炙甘草湯能明顯改善模型大鼠心電圖、延長心律失常的潛伏期及縮短心律失常的維持期;明顯升高模型大鼠的hs-CRP、TNF-、IL-2以及IL-6水平，顯著降低心肌酶CK和LDH的水平。結(jié)論炙甘草湯對氣血兩虛證心律失常大鼠的保護作用可能與改善介導心肌細胞的炎癥反應及心肌酶的活性有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  炙甘草湯; 心律失常; 氣血兩虛; 血清炎癥因子; 心肌酶Abstract：ObjectiveTo study the protect

3、ive action of Zhigancao Decoction on arrhythmia with deficiency of both "Qi" and blood in rats.MethodsOn the basis of syndrome of both "Qi" deficiency and blood deficiency in rats induced by bloodletting and cyclophosphamide, arrhythmia was induced by aconitine, and Zhigancao Dec

4、oction was used to prevent and treat arrhythmia rats with syndrome of deficiency of both "Qi" and blood.The changes of ECG were observed, and activities of hs-CRP、TNF-a、IL-2,IL-6 ,CK and LDH were determined. Results Zhigancao Decoction could improve the ECG, increase arrhythmia latency and

5、 decrease arrhythmia duration significantly. At the same time, Zhigancao Decoction could obviously improve the levels of hs-CRP, TNF-, IL-2 and IL-6 in model rats, and markedly reduce the levels of CK and LDH in model rats. ConclusionThe protective action of Zhigancao Decoction on arrhythmia with de

6、ficiency of both "Qi" and Blood in rats may be related to the improvement of the medicator released by inflammatory response and the enzyme of myocardium.Key words：Zhigancao Decoction; Arrhythmia; Deficiency of both "Qi" and blood; Inflammatory factor; Myocardial enzyme炙甘草湯出自東漢張仲

7、景的傷寒論·辨太陽病脈證并治篇第177條，“傷寒，脈結(jié)代，心動悸，炙甘草湯主之”，是中醫(yī)治療心悸胸痛的經(jīng)典名方。在中醫(yī)臨床上，很多心律失?；颊咭餐橛袣庋澨摰陌Y狀，即氣血兩虛心律失常，炙甘草湯治療氣血兩虛心律失常是在補益氣血的基礎(chǔ)上發(fā)揮復脈效果。為進一步探討炙甘草湯的作用機理，采用貼近中醫(yī)癥候的病證結(jié)合模型復制大鼠氣血兩虛證心律失常模型，觀察炙甘草湯對氣血兩虛證心律失常大鼠血清hs-CRP、TNF-、IL-2、IL-6水平以及心肌酶的影響，從而分析該方對氣血兩虛心律失常的保護作用。1 材料與儀器1.1 藥物炙甘草湯原藥材購于江西中醫(yī)學院附屬醫(yī)院中藥房，經(jīng)江西中醫(yī)學院中藥鑒定教研室

8、鑒定均符合2005版中國藥典標準，將購得的炙甘草湯原藥材加入適量的冷蒸餾水浸泡30 min，然后用武火加熱，待沸騰后再用文火煎煮1 h，重復3次，合并3次水煎液，加入阿膠烊化，過濾，濃縮至含生藥 2.4g/ml，4儲藏備用，實驗時再配成所需濃度給藥。1.2 動物SPF級SD大鼠110只，雄性，體質(zhì)量(200±20)g，由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供，動物質(zhì)量合格證號為SCXK(滬)2008-0016。1.3 試劑hs-CRP酶聯(lián)免疫分析試劑盒(UCL公司，產(chǎn)品編號：E0821r)、TNF-酶聯(lián)免疫分析試劑盒(UCL公司，產(chǎn)品編號：E0133r)、IL-2酶聯(lián)免疫分析試劑盒(U

9、CL公司，產(chǎn)品編號：E0073r)、IL-6酶聯(lián)免疫分析試劑盒(UCL公司，產(chǎn)品編號：E0079r)、環(huán)磷酰胺(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)、烏頭堿(中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心中藥對照品研究室提供)、烏拉坦、戊巴比妥鈉、乙醚 。1.4 儀器 Swelab血球儀、Powerlab電生理記錄儀、Sysmex全自動生化分析儀、Thermo酶標儀。2 方法2.1 分組所有SD大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，戊巴比妥鈉(40 mg/kg)麻醉1, 用Powerlab電生理記錄儀采集心電圖，篩選出心電圖正常的大鼠。將心電圖正常的75只大鼠隨機分為正常組，烏頭堿組，氣血兩虛+烏頭堿組，炙甘草湯高劑量組以及炙甘

10、草湯低劑量組，每組15只大鼠。2.2 造模及給藥氣血兩虛+烏頭堿組的大鼠，在實驗的第1天至第9天每隔1天眼眶后靜脈放血5.6 ml/kg24，在實驗的第2天至第8天每隔1天腹腔注射0.4%環(huán)磷酰胺(20 mg/kg)4生理鹽水溶液，首劑加倍，為40 mg/kg;于實驗第9天用20%的烏拉坦(1.2 g/kg)麻醉后大鼠舌下靜脈注射0.002%烏頭堿(10 g/kg)5的生理鹽水溶液誘導心律失常，觀察心律失常的潛伏時間和維持時間。正常組和烏頭堿組的大鼠灌胃相同體積的生理鹽水，烏頭堿組在實驗的第9天舌下靜脈注射烏頭堿誘導心律失常。炙甘草湯高劑量組和低劑量組大鼠的造模方法和觀察指標同氣血兩虛+烏頭堿

11、組，并從實驗第1天開始每天灌胃炙甘草湯藥材的水煎液，連續(xù)9 d,高劑量為24 g(生藥)/kg(體質(zhì)量)，低劑量為12 g(生藥)/kg(體質(zhì)量)。實驗結(jié)束后，所有組的大鼠股動脈取血，3 600 r/min離心15 min后得到血清，檢測炎癥因子和生化指標。2.3 觀察指標及檢測方法肉眼觀察大鼠外在體征變化;用powerlab電生理儀的心電通道檢測大鼠心律失常的潛伏時間、維持時間;全自動生化分析儀測定血清心肌酶CK和LDH的水平;雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測定血清中炎癥因子hs-CRP、TNF-、IL-2以及IL-6水平，具體操作嚴格按照試劑盒說明書的要求進行。2.4 統(tǒng)計學方法應

12、用SPSS11.5 for windows統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料組間比較采用One-Way ANOVA。3 結(jié)果3.1 外部體征變化情況氣血兩虛+烏頭堿組大鼠造模后出現(xiàn)攝食明顯減少、倦怠、懶動、毛發(fā)疏散不潔或豎毛，這與臨床上氣血兩虛心律失常的癥狀較相似，而用炙甘草湯防治后，上述癥狀表現(xiàn)有顯著的改善。3.2 心律失常的變化情況從表1可知，用烏頭堿誘導心律失常后，與正常組比較，氣血兩虛+烏頭堿組大鼠的心律失常潛伏時間顯著縮短、維持時間明顯延長。炙甘草湯高劑量組和炙甘草湯低劑量組在造模的同時給予炙甘草湯后，心律失常的潛伏時間較模型組明顯延長、維持時間較模型組顯著縮短。圖15是大鼠不同組別的心

13、電圖，顯示心律失常的發(fā)生時間不同(見箭頭所示)表1 炙甘草湯對氣血兩虛心律失常的影響3.3 炎癥因子檢測結(jié)果 結(jié)果見表2表2 炙甘草湯對氣血兩虛心律失常大鼠炎癥因子的影響3.4 CK和LDH的檢測結(jié)果結(jié)果見表3。炙甘草湯能明顯降低氣血兩虛心律失常大鼠心肌酶CK和LDH的水平。4 討論本實驗在中醫(yī)基礎(chǔ)理論指導下，采用復合的造模方法復制氣血兩虛證心律失常模型6，其大鼠表現(xiàn)的一系列癥狀與中醫(yī)氣血兩虛證如精神萎靡、全身疲乏氣短、四肢無力等有很多相似之處。而應用炙甘草湯的大鼠，其氣血兩虛的癥狀和心律失常指標較造模組有明顯改善，可使大鼠體重增加，飲食增多，活動如常，心律失常潛伏時間明顯延長、維持時間顯著縮

14、短，表明炙甘草湯對氣血兩虛心律失常有明顯的保護作用。炙甘草湯在臨床治療“脈結(jié)代，心動悸”時補益氣血是治療的首要步驟7，中醫(yī)的氣血虧虛與免疫力低下有很多相似之處，故炙甘草湯抗心律失常作用可能與機體的免疫功能密切相關(guān)。 C反應蛋白(CRP) 是一種急性時相反應蛋白，主要由肝細胞合成和分泌，是炎癥過程敏感的指標，C反應蛋白水平的高低與免疫功能強弱有關(guān)。本實驗中模型組大鼠造模后的hs-CRP顯著降低，給予炙甘草湯后，hs-CRP水平升高很明顯，這表明炙甘草湯抗氣血兩虛心律失常的發(fā)生與其免疫功能調(diào)節(jié)作用密切相關(guān)。表3 炙甘草湯對氣血兩虛心律失常大鼠心肌酶的影響另外，氣血兩虛心律失常大鼠用炙甘草湯防治后，

15、血清中心肌酶CK和LDH的含量明顯下降，而心肌酶CK和LDH的含量的異常升高預示著心肌細胞的損傷和壞死，故炙甘草湯抗氣血兩虛心律失常作用與修復受損心肌細胞存在關(guān)聯(lián)，具有保護心肌細胞的作用。炙甘草湯可能通過增強機體免疫功能和介導心肌細胞的炎癥反應，達到保護心臟作用，從而發(fā)揮抗大鼠氣血兩虛證心律失常作用，其機制有待進一步探討?！緟⒖嘉墨I】  1 徐叔云,卞如濂,陳 修,等.藥理實驗方法學，第3版M.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001: 1847.2 郭 平.血虛證動物模型研究概況J.山東中醫(yī)藥大學學報,2006,30(1):83.3 楊 嵐,祝彼得,彭 成.血虛證動物模型的標準化研究初探J.四川動物,2006,25(1): 160.4 苗明三,顧麗亞,方曉艷,等.大鼠氣血雙虛動物模型的復制J.中藥藥理與臨床,2005，21(1):60.5 陳 奇.中藥藥理實驗方法學，第2版M.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006.6 陳蘭英,羅 雄,胡瑞剛,等. 炙甘草湯對大鼠氣血兩虛型心律失常及免疫系統(tǒng)的影響J.