卡馬西平與TRH抗癲癇作用相互關(guān)系的研究

1、    卡馬西平與TRH抗癲癇作用相互關(guān)系的研究        【摘要】目的探討卡馬西平與促甲狀腺素釋放激素（TRH）抗癲癇作用的相互關(guān)系。方法采用放射免疫分析法測(cè)定戊四氮（PTZ）急性致癇大鼠海馬內(nèi)TRH的含量。結(jié)果急性致癇后，海馬內(nèi)TRH表達(dá)水平在2小時(shí)未見(jiàn)明顯變化，48小時(shí)顯著升高?？R西平預(yù)處理組在癇性發(fā)作后48小時(shí)海馬內(nèi)TRH表達(dá)水平明顯升高，與對(duì)照組及假模型組相比均有顯著性差異。結(jié)論卡馬西平能顯著升高癇性發(fā)作對(duì)TRH的誘導(dǎo)表達(dá)，TRH與卡馬西平的作用可能有重迭效應(yīng)

2、和添加效應(yīng)?！娟P(guān)鍵詞】癲癇卡馬西平促甲狀腺素釋放激素放射免疫分析 A study on the relationship of antiepileptic effect between carbamazepine and thyrotropin releasing hormoneTang Jiyou，Li Xiangping，Chi Zhaofu（Department of Neurology, the Affiliated Hospital of Shandong Medical University,Jinan 250012）【Abstract】ObjectiveTo investigat

3、e the relationship of antiepileptic effect between carbamazepine (CBZ) and thyrotropin releasing hormore(TRH).MethodsThe content of TRH in hippocampus in rats were examined by radioimmunoassay (RIA) after PTZ-induced seizure.ResultsAfter PTZ-induced seizures,there was no obvious change on the expres

4、sion of TRH in hippocampus in 2 h,but it was significantly elevated in 48 h.The expression of TRH in hippocampus was increased obviously 48 h after seizure in CBZ pretreatment group, there was remarkable difference as compared with the controls and the pseudomodel group.ConclusionCBZ could elevate o

5、bviously the expression of TRH after seizure, which suggested the potential overlapping or additive influences of TRH and CBZ.【Key words】EpilepsyCarbamazepineThyrotropin releasing hormoneRadioimmunoassay目前，盡管應(yīng)用各種抗癲癇藥物治療，但仍有20%25%的癲癇病人不能被控制1。因此，探討腦本身的抗癲癇機(jī)理以及與抗癲癇藥物的關(guān)系，對(duì)于開(kāi)發(fā)新藥物來(lái)控制難治性癲癇具有重要意義。我們利用急性戊四氮癲癇

6、模型來(lái)研究海馬促甲狀腺素釋放激素(TRH)的變化以及與卡馬西平的關(guān)系，俾為癲癇治療開(kāi)辟一條新途徑。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 將42只成年健康Wistar鼠（體重為150250 g，由山東醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)中心提供）隨機(jī)分為兩組。組，即戊四氮組（24只），再隨機(jī)分為4小組（每組6只)，即按從給藥到處死的時(shí)間間隔分為0小時(shí)組、2小時(shí)組、48小時(shí)組和對(duì)照組；組，即卡馬西平組（18只），再隨機(jī)分為3小組（每組6只），即卡馬西平預(yù)處理組、對(duì)照組和假模型組。1.2方法1.2.1模型制作根據(jù)Morgan2的方法稍加改進(jìn)，誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生全身強(qiáng)直-陣攣性癲癇發(fā)作，即腹腔內(nèi)注射戊四氮（50 mg/kg),半小

7、時(shí)后再半量注射1次。組，前3小組動(dòng)物分別于注射戊四氮后0小時(shí)、2小時(shí)、48小時(shí)處死。對(duì)照組用生理鹽水代替戊四氮。組，卡馬西平預(yù)處理組：胃管內(nèi)注入卡馬西平混懸液（15 mg/kg,bid),1周后再注射戊四氮；對(duì)照組動(dòng)物用等量生理鹽水代替卡馬西平；假模型組則以等量生理鹽水代替卡馬西平和戊四氮。各組動(dòng)物均在給予戊四氮后48小時(shí)處死。Racine4 五階段分級(jí)法為判斷癲癇發(fā)作的標(biāo)準(zhǔn)。動(dòng)物在注射戊四氮后2分鐘內(nèi)便開(kāi)始發(fā)作：首先出現(xiàn)凝視、點(diǎn)頭、瞼肌陣攣、尾巴翹起，繼之雙前肢抬起陣攣或后肢伸展，頭向左或右扭動(dòng)，最后出現(xiàn)四肢抽搐、蹦起、跌倒、翻滾，大小便失禁及流涎，常反復(fù)發(fā)作。每次發(fā)作持續(xù)110分鐘不等，1

8、小時(shí)后絕大部分動(dòng)物停止發(fā)作?？R西平預(yù)處理組與對(duì)照組動(dòng)物相比，其發(fā)作程度減弱，發(fā)作持續(xù)時(shí)間縮短。1.2.2生化測(cè)定腹腔內(nèi)注射戊巴比妥鈉（40 mg/kg），麻醉成功后，于1分鐘內(nèi)開(kāi)顱取腦，根據(jù)大鼠立體定位譜將腦組織在冰臺(tái)上解剖，按自然分部標(biāo)記取出海馬和下丘腦，液氮保存。腦組織樣品的預(yù)處理：稱重后用冷甲醇（1 ml/20 mg腦組織）于玻璃勻漿器中進(jìn)行勻漿提取，倒出勻漿液，勻漿管再用甲醇洗1次，合并兩次甲醇提取液，于4離心（12 000 g）10分鐘，吸出上清液至測(cè)定管中，在水浴37中吹干，加250 l緩沖液重新溶解后再進(jìn)行放射免疫測(cè)定。TRH放免試劑盒由北京中國(guó)同位素公司北方免疫試劑研究所提供

9、?？R西平：100 mg/片，濟(jì)南制藥廠生產(chǎn)。1.2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理放射免疫分析所得的計(jì)量資料均經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，即組資料比較行LSD法t檢驗(yàn)，組資料比較行q檢驗(yàn)。2結(jié)果放射免疫分析結(jié)果見(jiàn)表12。表1戊四氮3小組海馬和下丘腦TRH含量比較(±s)組別海馬濕重（mg）海馬TRH（pg/mg）下丘腦濕重（mg）下丘腦TRH（pg/mg）戊四氮0h組140.8±5.90.13±0.0742.5±4.71.99±0.37戊四氮2h組141.7±4.20.12±0.0441.0±4.02.37±1.65戊四氮48h組14

10、5.5±6.10.21±0.07*44.5±7.11.96±0.77對(duì)照組142.7±5.90.13±0.0942.2±4.32.00±0.43 與對(duì)照組相比* P<0.05 表2卡馬西平預(yù)處理組、對(duì)照組及假模型組海馬TRH含量比較(±s)組別海馬濕重（mg）海馬TRH（pg/mg）卡馬西平預(yù)處理組140.7±9.80.37±0.04*對(duì)照組143.7±7.90.18±0.09*假模型組138.5±6.00.11±0.02與假模型組相比*P

11、<0.05;與對(duì)照組和假模型組相比*P<0.05 3討論TRH廣泛存在于人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，除內(nèi)分泌作用外，尚是與神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能有關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)質(zhì)。近年來(lái)，國(guó)外學(xué)者在對(duì)諸多的癲癇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的研究中發(fā)現(xiàn)，癇性發(fā)作可誘導(dǎo)TRH基因表達(dá)和蛋白質(zhì)合成在特異性腦組織內(nèi)一過(guò)性升高，其升高程度與癲癇點(diǎn)燃的階段有關(guān)，代表了癲癇發(fā)作時(shí)體內(nèi)平衡調(diào)節(jié)的一個(gè)方面，并提出了內(nèi)源性TRH在與癲癇有關(guān)的特異性腦組織中具有抗癲癇功能的假說(shuō)59。本研究發(fā)現(xiàn)癇性發(fā)作后2小時(shí)，海馬與下丘腦TRH與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異，但48小時(shí)后海馬的TRH顯著高于對(duì)照組（P<0.05）,為后者的1.6倍,而下丘腦TRH

12、與對(duì)照組相比仍無(wú)顯著性差異,這表明癲癇發(fā)作可引起海馬內(nèi)TRH的變化,而不影響下丘腦TRH的濃度。癇性發(fā)作引起TRH在相應(yīng)腦區(qū)升高的機(jī)理可能包括TRH合成率的增加和/或代謝與釋放率的減少。已有研究證實(shí)點(diǎn)燃引起區(qū)域選擇性TRH mRNA水平的增高和TRH受體的減少，后者可能是對(duì)TRH活性增高的代償反應(yīng)10。它的意義被認(rèn)為是內(nèi)源性TRH參與癇性發(fā)作體內(nèi)平衡的調(diào)節(jié),使興奮性和抑制性處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，防止癲癇的進(jìn)一步發(fā)作。其可能的機(jī)理是：（1）TRH選擇性抑制了大腦皮層神經(jīng)元的谷氨酸興奮作用，抗癇作用可能與谷氨酸能興奮性降低有關(guān)。（2）TRH可能是通過(guò)增加多巴胺在黑質(zhì)-紋狀體系統(tǒng)的釋放來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)失神樣發(fā)作

13、和強(qiáng)直發(fā)作的抑制。（3）TRH增加去甲腎上腺素（NE）的釋放，通過(guò)NE抑制癲癇發(fā)作。（4）TRH與乙酰膽堿、兒茶酚胺、5-羥色胺、-氨基丁酸以及阿片肽有關(guān)，參與調(diào)節(jié)與癲癇有關(guān)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性的某些方面?？R西平作為傳統(tǒng)的抗癲癇藥物，其抗癇作用機(jī)理很復(fù)雜,也尚不清楚。本研究通過(guò)卡馬西平預(yù)處理組、對(duì)照組及假模型組海馬TRH含量的比較發(fā)現(xiàn)，在全面發(fā)作后48小時(shí)卡馬西平預(yù)處理組海馬TRH顯著性升高，高于對(duì)照組及假模型組（P<0.05）；對(duì)照組海馬TRH則顯著高于假模型組（P<0.05）。這一研究結(jié)果說(shuō)明卡馬西平在治療劑量可進(jìn)一步升高癲癇大鼠特異性腦組織內(nèi)的TRH水平，而TRH被認(rèn)為具有

14、內(nèi)源性抗癲癇作用，由此推斷卡馬西平的抗癲癇作用可能與TRH在癇性發(fā)作后特異腦區(qū)的升高有關(guān)。以上表明卡馬西平與TRH的作用可能有重迭效應(yīng)或添加效應(yīng)。另外，卡馬西平被發(fā)現(xiàn)在脊髓神經(jīng)元培養(yǎng)中可減弱N-甲基-D-天門(mén)冬氨酸(NMDA)引起的去極化11，并在小腦顆粒細(xì)胞培養(yǎng)中可降低NMDA引起的細(xì)胞內(nèi)Ca2+增加12。這些作用都說(shuō)明TRH在卡馬西平預(yù)處理組的進(jìn)一步升高，可能導(dǎo)致了腦內(nèi)對(duì)癇性發(fā)作起促進(jìn)作用的谷氨酸能系統(tǒng)興奮性的進(jìn)一步抑制，從而發(fā)揮抗癲癇作用。作者單位：唐吉友（250012山東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科）李湘萍（250012山東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科）遲兆富（250012山東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院

15、神經(jīng)內(nèi)科）馮亞波（250012山東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科）參考文獻(xiàn)1，史玉泉主編.實(shí)用神經(jīng)病學(xué).第2版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1994.8032，Morgan JI,Cohem DR, Hempstead JL, et al.Mapping Pattern of c-fos expression in the central nervous system after seizure.Science，1987,237:1923，陳明道，朱忠義，蔡厚明，等. 甲狀腺切除和高甲狀腺激素狀態(tài)大鼠下丘腦和血清TRH及下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)的變化. 中華內(nèi)分泌代謝雜志，1988，4：334，Racine R

16、J. Modification of seizure activity by electrical stimulation II.Motor seizure.Electroencephalogr Clin Neurophysiol,1972,32:2815，Kubek MJ,Albert S.Effect of electroconvulsive shock on the content of TRH in rat brain. Life Sci, 1984, 34: 11496，Kubet MJ,Meyerhoff JL,HiLL TG,et al.Effects of subconvuls

17、ive and repeated electroconvulsive shock on the content of TRH in rat brain.Life Sci,1985,36:3157，Walczak D, Meyerhoff J, Bates VE,et al.Effect of partial and funky generalized kindled seizures on TRH levels in specific cortical and subcortical regions of rat brain. Soc Neurosci Abstr, 1983,9:4858，K

18、ubek MJ,Low WC,Sattin A,et al.Role of TRH in seizure modulation.Ann N Y Acad Sci,1989,553:2869，Ogawa N, Hirose Y, Mori A, et al.Involvement of TRH neural system of the brain in PTZ-induced seizures. Regul Peptides,1985, 12: 24910，Kubek MJ, Sharif NA. TRHgene expression and receptors are differentially modified in limbic foci by seizures. Ann Neurol,1993,33:7011，Lmape H, Bigalke H.Carbamazepine blocks NMDA-activated currents in cultured spinal cord neurons.Reu