排石膠囊對(duì)腎結(jié)石模型大鼠的防治作用

1、排石膠囊對(duì)腎結(jié)石模型大鼠的防治作用                 作者：石磊 葉其正 羅宇慧 沈明勤 王志剛 丁永芳 彭蘊(yùn)茹  【摘要】  目的觀察排石膠囊對(duì)腎結(jié)石模型大鼠的防治作用，初步探討其作用機(jī)制。方法采用乙二醇加氯化銨法制作大鼠腎結(jié)石模型，觀察排石膠囊同步給藥后對(duì)大鼠24 h排尿量、腎臟器系數(shù)、腎組織病理學(xué)、血清尿素氮、肌酐、鈣含量及腎組織鈣含量、24 h尿鈣分泌量影響。結(jié)果排石膠囊可顯著增加24 h排尿量

2、、降低大鼠的腎組織腫脹（P0.050.01），明顯減少腎組織內(nèi)草酸鈣結(jié)晶、腎小管擴(kuò)張程度、壞死及炎性滲出等（P0.010.001），顯著降低血清尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)水平（P0.050.001），顯著降低腎組織鈣含量和24 h尿鈣分泌量（P0.05）。結(jié)論 排石膠囊可增加排尿量、促進(jìn)腎和血液中Ca2+排泄和代謝，減輕大鼠腎組織因結(jié)石引起的損傷和病變，減少腎內(nèi)草酸鈣結(jié)晶，從而防治腎結(jié)石。 【關(guān)鍵詞】  排石膠囊 腎結(jié)石 動(dòng)物疾病模型Abstract：ObjectiveTo observe the preventive effects of  Paishi Caps

3、ule on experimental renal calculus in rats, and explore its mechanism. MethodsThe rat model of renal calcium oxalate stones was induced by administrating ethylene glycol and ammonia chloride.The 24 h urinary output, coefficient and histopathological status of kidneys, the serum creatinnine and blood

4、 urea nitrogen levels, renal tissue calcium content and 24 h urinary calcium were detected.ResultsPaishi Capsule could markedly increase the 24 h urinary output and decrease the degrees of the kidneys swelled in rats（P0.050.01）, decrease the calcium oxalate deposits in the kidneys and the pathologic

5、al change degrees of the kidneys（P0.010.001）.The serum creatinnine and blood urea nitrogen levels were decreased significantly（P0.050.001）, and the renal tissue calcium content and 24 h urinary calcium were decreased significantly（P0.05）. ConclusionPaishi Capsule can increase the urinary output, imp

6、rove the elimination and metabolism of  Ca2+ in the blood and kidneys, decrease the damage caused by the renal stone, obviously inhibit the formation of the kidney calcium oxalate stone in rats.Key words：Paishi Capsule；  Renal Stone；  Animal disease model排石膠囊（金錢草、石韋、徐長(zhǎng)卿、車前子、木通、甘草）為清熱利

7、濕、通淋排石的臨床經(jīng)驗(yàn)方，主治結(jié)石。本實(shí)驗(yàn)主要觀察排石膠囊對(duì)腎結(jié)石模型大鼠的防治作用，并初步探討其作用機(jī)制。1  器材1  動(dòng)物 SD大鼠，清潔級(jí)，體重180220 g ，雄性，健康，購(gòu)于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，合格證號(hào)：SCXK(滬)2002-0010。2  藥物 排石膠囊(深棕色清膏)，含35 g生藥/ml，批號(hào)20050509, 江蘇省中醫(yī)藥研究院藥物分析室提供； 排石顆粒（無(wú)糖型），含11 g生藥/g，批號(hào)050401，南京同仁堂藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。3  試劑 肌酐試劑盒、尿素氮試劑盒、鈣測(cè)定試劑盒、蛋白測(cè)

8、定試劑盒，批號(hào)20050811，南京建成生物工程研究所提供。4  儀器 752s型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海棱光技術(shù)有限公司生產(chǎn)；脫水機(jī)，Hypercentre XP型，包埋機(jī)Histocentre 2型，英國(guó)Shandon公司生產(chǎn)；切片機(jī)，HM340E型，德國(guó)Zeiss公司生產(chǎn)；顯微鏡，BX41型，日本Olympus公司生產(chǎn)；病理圖文分析系統(tǒng)，HPIAS-1000型，華海公司。         2  方法132.1 造模、給藥及指標(biāo)檢測(cè)大鼠60只，于清潔級(jí)環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)均分

9、為6組，每組10只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥（排石顆粒，原劑型）對(duì)照組、排石膠囊大、中、小劑量組。除正常對(duì)照組每天灌胃給予蒸餾水10 ml/kg外，其余5組大鼠造模（每天均用含1%乙二醇的冷開(kāi)水作為飲用水，另用2%氯化銨按2 ml/只灌胃），同時(shí)陽(yáng)性藥對(duì)照組、排石膠囊大、中、小劑量組分別按56，56，28，14 g生藥/kg的劑量灌胃給藥，模型對(duì)照組灌胃給予蒸餾水，各組動(dòng)物給藥容量均為10 ml/kg。連續(xù)造模且灌胃給藥4周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前1 d用代謝籠分別收集各大鼠24h空腹尿液，測(cè)定24 h排尿量及24 h尿鈣（Ca2+）分泌量(甲基百里香酚藍(lán)比色法測(cè)定)。末次給藥1h后，大鼠采血

10、，離心取上層血清用于生化測(cè)定：二乙酰-肟比色法測(cè)血清尿素氮(BUN) 水平、除蛋白法測(cè)肌酐(Crea)水平。大鼠處死后取兩側(cè)腎稱重，計(jì)算腎臟的臟器系數(shù)。每只大鼠取右腎10%甲醛溶液固定，用于腎組織病理學(xué)檢查；左腎超低溫(-65)保存，用于測(cè)定腎組織總鈣（Ca2+）含量。2.2 腎組織病理組織學(xué)檢查觀察腎皮、髓質(zhì)分界是否清晰，腎小球、腎小管等有無(wú)異常改變，腎間質(zhì)內(nèi)有無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)及變性、出血等癥狀，重點(diǎn)觀測(cè)腎小管內(nèi)的草酸鈣結(jié)晶形成情況，以及周圍組織的病變、壞死等。觀測(cè)指標(biāo)為腎組織內(nèi)草酸鈣結(jié)晶情況、炎性滲出及壞死物的出現(xiàn)、腎小管的擴(kuò)張情況，按-、+、+、+、+分級(jí)。統(tǒng)計(jì)處理及評(píng)分方法: -、+、+、

11、+、+分別記為1，2，3，4，5分。各給藥組實(shí)驗(yàn)結(jié)果與模型對(duì)照組進(jìn)行組間t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)處理。3  結(jié)果3.1  排石膠囊對(duì)結(jié)石大鼠腎組織病理學(xué)影響結(jié)果見(jiàn)表1。模型組可見(jiàn)腎組織內(nèi)大量急、慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，大量腎小管高度擴(kuò)張，管內(nèi)充滿塊狀半透明的草酸鈣結(jié)晶，腎小管周圍腎小球被擠壓，面積減小，腎皮、髓質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)多處腎小管內(nèi)有炎性滲出物及壞死，與正常對(duì)照組比較，上述3個(gè)指標(biāo)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)。與模型對(duì)照組比較，除排石膠囊小劑量外的各給藥組大鼠腎結(jié)石情況有不同程度的顯著減少，且腎小管內(nèi)壞死及炎性滲出物顯著輕(P0.010.001)；各給藥組大鼠腎小管擴(kuò)張程度顯著減?。≒0.050.

12、001）。3.2   排石膠囊對(duì)結(jié)石大鼠腎臟重量、24h排尿量的影響結(jié)果見(jiàn)表2。與模型對(duì)照組比較，大劑量組大鼠腎臟重量、腎臟系數(shù)顯著減輕，24 h排尿量顯著增加(P0.050.01)。表1  排石膠囊防治給藥對(duì)結(jié)石大鼠腎組織病理學(xué)影響(略)表2  排石膠囊防治給藥對(duì)結(jié)石大鼠腎臟重量、24h排尿量的影響(略)3.3  排石膠囊對(duì)結(jié)石大鼠血清尿素氮、肌酐、鈣含量及腎組織鈣含量、24 h尿鈣分泌量的影響結(jié)果見(jiàn)表3。與模型對(duì)照組比較，腎結(jié)石模型組大鼠血清尿素氮、肌酐、腎組織鈣含量及24 h尿鈣分泌量顯著增加（P0.001）；排石膠囊大劑量組大鼠血清尿素

13、氮和肌酐水平明顯降低、腎組織鈣含量和24 h尿鈣分泌量顯著減少（P0.050.001），中劑量組大鼠腎組織鈣含量也明顯降低（P0.05）。各給藥組大鼠血清鈣含量著降低（P0.010.001）。表3   排石膠囊防治給藥對(duì)結(jié)石大鼠血清尿素氮、肌酐、鈣含量及腎組織鈣含量、24 h尿鈣分泌量的影響（略）4  討論泌尿系統(tǒng)結(jié)石屬于中醫(yī)學(xué)“淋證”“石淋”范疇，而草酸鈣結(jié)石約占尿石癥的80%，大鼠腎草酸鈣結(jié)石模型為尿石癥實(shí)驗(yàn)研究的重要方法。其中，乙二醇加氯化銨法誘導(dǎo)大鼠腎草酸鈣結(jié)石形成效果顯著、簡(jiǎn)便、穩(wěn)定2。腎結(jié)石模型大鼠同步灌服一定劑量排石膠囊后，能抑制因結(jié)石引起的組織水腫和腎臟重量增加，增加排尿量，促進(jìn)腎臟組織和血液中Ca2+的排泄和代謝，減少腎組織中結(jié)石的形成，減緩大鼠腎組織因結(jié)石引起的損傷和病變，從而保護(hù)腎組織