血藤總黃酮對血虛小鼠抗貧血作用及機(jī)理研究

1、血藤總黃酮對血虛小鼠抗貧血作用及機(jī)理研究    【摘要】     目的觀察雞血藤總黃酮(STF)對化學(xué)因素所致的血虛小鼠外周血象及血清白細(xì)胞介素-3（IL-3），促紅細(xì)胞生成素（EPO）水平的影響。方法采用鹽酸苯肼（APH）、環(huán)磷酰胺（CTX）復(fù)合造模，建立血虛小鼠模型， 檢測外周血象RBC，HGB，HCT及血清IL-3，EPO水平。結(jié)果與正常對照相比，模型小鼠的外周血象RBC，HGB，HCT，血清中的IL-3降低，而EPO升高(P<0.05）、EPO水平顯著低于模型對照組(P< 0.01)。

2、結(jié)論雞血藤總黃酮具有抗貧血作用，其作用機(jī)理可能與促進(jìn)機(jī)體分泌IL-3、調(diào)節(jié)EPO水平，促進(jìn)紅系造血有關(guān)。     【關(guān)鍵詞】  雞血藤總黃酮； 血虛； 白細(xì)胞介素-3； 促紅細(xì)胞生成素    Study on the Blood Enriching Effect and Mechanism of Spatholobus suberect Total FlavonoidsLIANG Ning， WEI Songji， LIN Qiyun(Guangxi College of Traditional Chin

3、ese Medicine ，Nanning, 530001, China)Abstract：ObjectiveTo observe the effects of Suberect spatholobus total flavonoids (STF) on the peripheral blood hemogram and serum levels of IL-3 and EPO in  hemophthisis mice .MethodsThe methods of s.c. PHH and i.p. CTX were used to induce the model of hema

4、topenia in mice. The peripheral blood hemogram and the serum levels of IL-3 and EPO were measured.ResultsSTF could obviously increase the numbers of  HGB,RBC,HCT and the level of IL-3 of hemophthisis mice and degrade the level of EPO.ConclusionAll results suggested that STF can enrich blood STF

5、 and recover  the  haematogenesis  function of  hemophthisis mice by increasing the level of IL-3 and regulating the EPO level.Key words：Suberect  spatholobus；  Total  flavonoids；  Hemophthisis；  IL-3；  EPO    雞血藤是一種活血化瘀的壯藥， 主要分布在廣西、廣東

6、。其性溫，味苦、甘，歸肝、腎經(jīng)。有補(bǔ)血、活血、通絡(luò)的功效，用于治療月經(jīng)不調(diào)、血虛萎黃、麻木癱瘓、風(fēng)濕痹痛等。本草綱目拾遺記載雞血藤“活血”，飲片新參記載“雞血藤去瘀血，生新血，流利經(jīng)脈”。民間常用雞血藤治療各種原因引起貧血，具有較好的療效。為探討雞血藤治療貧血的有效部位和抗貧血作用機(jī)理，我們用ELISA法測定小鼠血清IL-3及EPO水平?，F(xiàn)報(bào)道如下。1  材料1.1  動(dòng)物昆明種小鼠（SPF級），1822g，廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所提供（生產(chǎn)許可證號：SCXK桂2003-0001）。1.2  藥品雞血藤總黃酮（STF），廣西中醫(yī)學(xué)院中藥化學(xué)教研室提供，含量為6

7、0%；鹽酸苯肼（APH）（上海元越化工有限公司）批號：20051030；阿膠（山東東阿阿膠股份有限公司）批號：2004030；環(huán)磷酰胺（CTX）（上海華聯(lián)制藥有限公司）批號：050914。1.3  試劑Mouse IL-3試劑盒（上海船夫生物公司）批號：20060512，Mouse EPO試劑盒（上海船夫生物公司）批號：20060725。1.4  儀器血球計(jì)數(shù)儀（sysmex  KX-21型），吉爾森微量取樣器（法國Pipetman公司），酶標(biāo)儀（奧地利Sunrise公司）。2  方法2.1  分組與給藥取小鼠60只，體重1822 g，雌雄（）

8、兼用，隨機(jī)分為6組：雞血藤總黃酮高劑量組（200 mg/kg）、中劑量組（100 mg/kg）、低劑量組（50 mg/kg），陽性對照組給予阿膠（10 g/kg），空白對照組、模型組給予等容量的蒸餾水，以上各組i.g.給藥，qd×8 d，給藥容量為0.2 ml/10 g。2.2  血虛小鼠造模方法1除空白對照組外，給藥后第2天sc鹽酸苯肼（20 mg/kg）、第4天sc鹽酸苯肼（40 mg/kg），第4，5，6，7天ip環(huán)磷酰胺(100 mg/kg) ，第8天末次給藥后1 h，取血進(jìn)行 RBC，HGB，HCT計(jì)數(shù)。結(jié)果見表1。2.3  ELISA法測定小鼠血清IL

9、-3及EPO水平小鼠摘眼球取血至EP管，放置室溫下析出血清。3 000 r/min離心，分離血清，備用。將板條平衡至室溫，從密封袋中取出，除空白孔外，分別將標(biāo)本或稀釋好的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 l加入相應(yīng)的孔中，除空白孔外，每孔再加入已稀釋好的生物素化抗體50 l，用封板膠封住反應(yīng)孔，37溫育90 min，取出后洗板4次，除空白孔外，各管加入稀釋好的酶結(jié)合物100 l，用封板膠封住反應(yīng)孔，37溫育30 min，取出后洗板4次，每孔加底物A、底物B各50 l，避光，室溫（2025）10 min，每孔加終止液50 l，混勻，混勻后在1020 min內(nèi)測量OD450值。查標(biāo)準(zhǔn)曲線得出IL3，EPO含量

10、。觀察藥物對小鼠血清中IL3，EPO含量的影響。結(jié)果見表2。2.4  統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS10.0分析系統(tǒng)，數(shù)據(jù)以±s表示，組間差異用t檢驗(yàn)。3  結(jié)果    除陽性對照組、STF高劑量組的HGB與模型組比較有極顯著差異（P<0.01），STF高劑量組的HCT與模型組比較有極顯著差異外（P<0.01）外，各劑量組藥物RBC，HGB，HCT與模型組比較有顯著性差異（P<0.05）。提示：各組劑量藥物對血虛動(dòng)物RBC，HGB，HCT的下降有拮抗作用，與模型組對比有顯著差異。結(jié)果見表1。   

11、 陽性對照組和各劑量組對IL3的下降和EPO的上升有拮抗作用，與模型組比較有顯著性差異(P<0.05)。提示：各劑量組對IL3濃度的下降和EPO濃度的上升有拮抗作用，與模型組比較有顯著性差異。結(jié)果見表2。表1  雞血藤總黃酮對血虛小鼠血常規(guī)的影響（略）與空白對照組比較，P表2  雞血藤總黃酮對血虛小鼠血清中IL3、EPO含量影響（略）與空白對照組比較， P3  討論    IL-3(白細(xì)胞介素-3)是一種造血促進(jìn)因子，從干細(xì)胞到祖細(xì)胞多個(gè)不同階段促進(jìn)造血細(xì)胞增殖分化，造血生長因子促紅細(xì)胞生成素(erythmpoietin， EP

12、O)是一種主要由腎臟分泌的具有高度糖基化的多肽細(xì)胞因子，是紅細(xì)胞發(fā)育過程中最重要的調(diào)節(jié)因子2。IL-3由活化的T細(xì)胞產(chǎn)生，作為一種造血促進(jìn)因子，從多個(gè)環(huán)節(jié)部位促進(jìn)造血細(xì)胞的增殖分化3。雞血藤總黃酮對血虛小鼠IL-3水平有顯著影響，推斷雞血藤總黃酮抗貧血作用是通過調(diào)節(jié)促進(jìn)因子如IL-3的生成而起作用。研究表明，EPO的水平與HGB成反比關(guān)系4。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示化學(xué)因素造成小鼠的貧血，反饋性地引起血清EPO水平升高。給藥組致使EPO下降，可能是治療后貧血癥狀緩解，使EPO反饋性升高的程度減輕。    【參考文獻(xiàn)】  1 金若敏， 寧 煉， 陳長勛，等.血虛模型動(dòng)物制備及當(dāng)歸補(bǔ)血湯的作用研究J.中成藥，2001，23(4):269.2 楊 成，夏