MAF試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA已知MAF濃度的

1、MAF試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) (ELISA ).MAF濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品 參加微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將 MAF和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，參加親和素標(biāo)記過(guò) 的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后參加底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中 MAF的濃度呈比例關(guān)系。人巨噬細(xì)胞活化因子ELISA檢測(cè)試劑盒平安性1 .防止直接接觸終止液和底物 A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。2 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化裝品。3 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作考前須知1 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品

2、應(yīng)丟棄，不可保存。2 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。3 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物 A、B液時(shí)，防止使用帶金屬局部的加樣器。5 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反響孔中吸水。7底物A應(yīng)揮發(fā)，防止長(zhǎng)時(shí)間翻開蓋子。底物 B對(duì)光敏感，防止長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。防止用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取 0D值。8 參加試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反響板孔溫育的時(shí)間一樣。9 按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的

3、量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、血清-操作過(guò)程中防止任何細(xì)胞刺激。 使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。 收集血液后，1000 Xg離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地別離。2、 血漿-EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000 Xg離心30分鐘去除顆粒。3、 細(xì)胞上清液-1000X離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、 保存-如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小局部 -70 C保存，防止反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37 C或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。人巨噬細(xì)胞活化因子ELISA檢測(cè)試劑盒操作

4、步驟1 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)參加大量的氣泡，產(chǎn)生 加樣上的誤差。2 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè) 樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。3 參加稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品 50ul于反響孔、參加待測(cè)樣品 50ul于反響孔內(nèi)。立即參加 50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37 C溫育1小時(shí)。4 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5 每孔參加80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37 C溫育3

5、0分鐘。6 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。7 每孔參加底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37 C溫育10分鐘。防止光照。8 取岀酶標(biāo)板，迅速參加 50ul終止液，參加終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。9 在450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 0D值。試劑盒性能1. 靈敏度：最小的檢測(cè)濃度小于 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.9902. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反響。3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 10%。人巨噬細(xì)胞活化因子 ELISA檢測(cè)試劑盒結(jié)果判斷與分析1、 儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的 OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)丫，相應(yīng)的MAF標(biāo)準(zhǔn)