第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法(xiugai)

1、第三章第三章 細(xì)胞生物學(xué)研究方法細(xì)胞生物學(xué)研究方法本章內(nèi)容提要本章內(nèi)容提要 第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法 一、光學(xué)顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡 二、電子顯微鏡二、電子顯微鏡 第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)胞組分的分析方法細(xì)胞組分的分析方法 第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工程細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工程第一節(jié)第一節(jié) 細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法 形態(tài)觀察是細(xì)胞生物學(xué)最基本的研究方法形態(tài)觀察是細(xì)胞生物學(xué)最基本的研究方法其工具主要為顯微鏡。其工具主要為顯微鏡。 根據(jù)光源的不同，可將顯微鏡分為：根據(jù)光源的不同，可將顯微鏡分為： 光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡 可見光和紫外光可見光和紫外光 電子顯微鏡

2、電子顯微鏡 電子束電子束 在光學(xué)顯微鏡中，照明系統(tǒng)是可見光，在光學(xué)顯微鏡中，照明系統(tǒng)是可見光，使用的是玻璃透鏡系統(tǒng)，可直接通過目使用的是玻璃透鏡系統(tǒng)，可直接通過目鏡觀察鏡像。在電子顯微鏡中，照明系鏡觀察鏡像。在電子顯微鏡中，照明系統(tǒng)為電子束，使用電磁透鏡，通過熒光統(tǒng)為電子束，使用電磁透鏡，通過熒光屏觀察樣品的鏡像屏觀察樣品的鏡像、光學(xué)顯微鏡技術(shù)、光學(xué)顯微鏡技術(shù)（一）普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡一）普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡1. 1. 構(gòu)成：構(gòu)成：照明系統(tǒng)照明系統(tǒng): : 光源和聚光鏡光源和聚光鏡, ,有的還有折光有的還有折光鏡，有時(shí)附加濾光片控制光的波長。鏡，有時(shí)附加濾光片控制光的波長。光學(xué)放大系統(tǒng)光學(xué)放大系統(tǒng):

3、 : 目鏡和物鏡組成。目鏡和物鏡組成。機(jī)械和支架系統(tǒng)：機(jī)械和支架系統(tǒng)：主要保證光學(xué)系統(tǒng)的主要保證光學(xué)系統(tǒng)的準(zhǔn)確配置和靈活調(diào)控準(zhǔn)確配置和靈活調(diào)控2. 2. 原理：原理：經(jīng)經(jīng)物鏡形成倒物鏡形成倒立實(shí)像，經(jīng)立實(shí)像，經(jīng)目鏡放大成目鏡放大成虛像。虛像。3. 分辨率分辨率 透鏡最重要的性質(zhì)是它的透鏡最重要的性質(zhì)是它的分辨率分辨率，是指能分辨，是指能分辨出的相鄰兩個(gè)物點(diǎn)間最小距離的能力（區(qū)分開出的相鄰兩個(gè)物點(diǎn)間最小距離的能力（區(qū)分開兩個(gè)質(zhì)點(diǎn)間的最小距離）兩個(gè)質(zhì)點(diǎn)間的最小距離） ，這種距離稱為，這種距離稱為分辨分辨距離距離。分辨距離越小，分辨能力越高。分辨距離越小，分辨能力越高。一般規(guī)定：顯微鏡或人眼在一般規(guī)

4、定：顯微鏡或人眼在25cm25cm明視距離處，能明視距離處，能清楚地分辨被檢物體細(xì)微結(jié)構(gòu)最小間隔的能力，清楚地分辨被檢物體細(xì)微結(jié)構(gòu)最小間隔的能力，稱為分辨率。人眼分辨率是稱為分辨率。人眼分辨率是100um100um; ;光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡的最大分辨率是的最大分辨率是0.2um0.2um光學(xué)顯微鏡的分辨率光學(xué)顯微鏡的分辨率D D = 0.61/(= 0.61/(N.N.sin/2)sin/2)其中其中為入射光線波長；為入射光線波長；=物鏡鏡口角（樣品對物鏡鏡口的張角，也物鏡鏡口角（樣品對物鏡鏡口的張角，也稱角孔徑）；稱角孔徑）；NN=介質(zhì)折射率；介質(zhì)折射率； N.N.sin/2sin/2的量稱

5、為物鏡的數(shù)值孔徑的量稱為物鏡的數(shù)值孔徑(numerical (numerical aperture),aperture),縮寫為縮寫為NA,NA,因此，顯微鏡的分辨率公因此，顯微鏡的分辨率公式可表示為式可表示為D D = 0.61/= 0.61/NANA。NANA被刻在物鏡鏡筒外側(cè)和聚光被刻在物鏡鏡筒外側(cè)和聚光鏡上鏡上顯微鏡的幾個(gè)光學(xué)特點(diǎn)顯微鏡的幾個(gè)光學(xué)特點(diǎn)n介質(zhì)折射率越接近鏡頭玻璃的（介質(zhì)折射率越接近鏡頭玻璃的（ 1. 7 1. 7 ）越好。）越好。空氣中空氣中N N = 1= 1，油鏡介質(zhì)為香柏油，介質(zhì)折射，油鏡介質(zhì)為香柏油，介質(zhì)折射率可接近率可接近1.5 1.5 ；n最好的玻璃透鏡的鏡口

6、角是最好的玻璃透鏡的鏡口角是140140，sin/2sin/2的的最大值為最大值為0.940.94；n可見光的波長范圍為可見光的波長范圍為400700nm400700nm，而可見光，而可見光中的藍(lán)色光的波長最短，為中的藍(lán)色光的波長最短，為450nm450nm；n用空氣作介質(zhì)，普通光鏡的最大分辨率約為用空氣作介質(zhì)，普通光鏡的最大分辨率約為0.3um0.3um，用油作介質(zhì)，最大分辨率為，用油作介質(zhì)，最大分辨率為0.2um0.2um，人眼的分辨力為人眼的分辨力為0.2mm0.2mm，因此普通光學(xué)顯微鏡，因此普通光學(xué)顯微鏡的最大有效倍數(shù)為的最大有效倍數(shù)為1000X1000X。光鏡樣本制作光鏡樣本制作樣

7、品樣品固定固定( (甲甲醛醛)包埋包埋( (石蠟石蠟)切片切片(5um)(5um)染色染色（如伊紅和美藍(lán)能（如伊紅和美藍(lán)能與蛋白質(zhì)結(jié)合；品與蛋白質(zhì)結(jié)合；品紅能與紅能與DNADNA結(jié)合）結(jié)合） 大多數(shù)細(xì)胞總重量的大多數(shù)細(xì)胞總重量的70%70%是水，對可見光幾乎是水，對可見光幾乎是透明的，只有很少的內(nèi)含物不透光。染色的是透明的，只有很少的內(nèi)含物不透光。染色的目的就是給細(xì)胞的不同組分帶上可區(qū)別的顏色目的就是給細(xì)胞的不同組分帶上可區(qū)別的顏色特征。如蘇木精特征。如蘇木精(hematoxylin)(hematoxylin)對負(fù)電荷分子有親對負(fù)電荷分子有親和性，能顯示出細(xì)胞內(nèi)核酸的分布；酸性染料和性，能顯示

8、出細(xì)胞內(nèi)核酸的分布；酸性染料如如伊紅伊紅(eosin)(eosin)可使細(xì)胞質(zhì)染色；可使細(xì)胞質(zhì)染色；蘇丹染料蘇丹染料(Sudan (Sudan dyes)dyes)在脂肪中的溶解度比在乙醇中大，所以蘇在脂肪中的溶解度比在乙醇中大，所以蘇丹染料的乙醇飽和溶液能使脂肪著色。丹染料的乙醇飽和溶液能使脂肪著色。（二）倒置顯微鏡（二）倒置顯微鏡 倒置顯微鏡的結(jié)構(gòu)組成與普通顯微鏡一倒置顯微鏡的結(jié)構(gòu)組成與普通顯微鏡一樣，樣， 所不同的只是它的物鏡與照明系統(tǒng)所不同的只是它的物鏡與照明系統(tǒng)的位置顛倒過來。前者置于載物臺之下，的位置顛倒過來。前者置于載物臺之下， 而后者在載物臺的上方。聚光器與載物而后者在載物臺的

9、上方。聚光器與載物臺之間的工作距離提高，可以放置培養(yǎng)臺之間的工作距離提高，可以放置培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等容器，直接對培養(yǎng)的細(xì)胞皿、培養(yǎng)瓶等容器，直接對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行照明和觀察。進(jìn)行照明和觀察。（三）熒光顯微鏡（三）熒光顯微鏡(Fluorescencemicroscope)(Fluorescencemicroscope) 以紫外線為光源照射被檢物體，使之發(fā)出以紫外線為光源照射被檢物體，使之發(fā)出熒光（自發(fā)熒光、次生熒光），然后在熒光（自發(fā)熒光、次生熒光），然后在顯微鏡下觀察物體的形態(tài)及其所在位置。顯微鏡下觀察物體的形態(tài)及其所在位置。用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸以及用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸以及化學(xué)

10、物質(zhì)的分布及定位等。能對特異蛋化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。能對特異蛋白質(zhì)等生物大分子進(jìn)行定性定位研究。白質(zhì)等生物大分子進(jìn)行定性定位研究。熒光顯微鏡熒光顯微鏡特點(diǎn)：光源為短波光；特點(diǎn)：光源為短波光；有兩個(gè)特殊的濾光片；有兩個(gè)特殊的濾光片；照明方式通常為落射照明方式通常為落射式。式。尼康尼康E800E800熒光熒光DICDIC顯微鏡熒光顯微鏡顯微鏡熒光顯微鏡熒光顯微鏡和普通顯微鏡有以下的區(qū)別：熒光顯微鏡和普通顯微鏡有以下的區(qū)別：1. 1.照明方式通常為落射式，即光源通過物鏡投射照明方式通常為落射式，即光源通過物鏡投射于樣品上；于樣品上；2. 2.光源為紫外光，波長較短，分辨力高于普通顯光源為紫外光，波

11、長較短，分辨力高于普通顯微鏡；微鏡；3.3.有兩個(gè)特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見有兩個(gè)特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見光，目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線，用以保光，目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線，用以保護(hù)人目。護(hù)人目。用于觀察能激發(fā)出熒光的結(jié)構(gòu)。用于觀察能激發(fā)出熒光的結(jié)構(gòu)。用途：免疫熒光觀察、基因定位、用途：免疫熒光觀察、基因定位、疾病診斷。疾病診斷。葉綠體自發(fā)熒光葉綠體自發(fā)熒光（四）相差顯微鏡（四）相差顯微鏡1934-1935 1934-1935 荷蘭物理學(xué)家荷蘭物理學(xué)家Zernike Zernike 設(shè)計(jì)和發(fā)明相設(shè)計(jì)和發(fā)明相差顯微鏡，并獲得諾貝爾獎。差顯微鏡，并獲得諾貝爾獎。 相差顯

12、微鏡在結(jié)構(gòu)上進(jìn)行了特別設(shè)計(jì)，尤其是相差顯微鏡在結(jié)構(gòu)上進(jìn)行了特別設(shè)計(jì)，尤其是光學(xué)系統(tǒng)有很大的不同，可用于觀察未染色的光學(xué)系統(tǒng)有很大的不同，可用于觀察未染色的活細(xì)胞，提高活細(xì)胞活細(xì)胞，提高活細(xì)胞結(jié)構(gòu)反差。結(jié)構(gòu)反差。 基本原理基本原理：把透過標(biāo)本的可見光的：把透過標(biāo)本的可見光的光程差光程差變成變成振幅差振幅差，從而提高細(xì)胞各種結(jié)構(gòu)間的對比度，從而提高細(xì)胞各種結(jié)構(gòu)間的對比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個(gè)相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個(gè)特殊之處：特殊之處：1. 1.環(huán)狀光闌（環(huán)狀光闌（annular diaphragmannular diaph

13、ragm）：位于光源）：位于光源與聚光器之間。與聚光器之間。2. 2.相位板（相位板（phase platephase plate）：物鏡中加了涂有氟）：物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲相位推遲1/41/4。光光學(xué)學(xué)部部件件及及光光線線通通路路（五）暗視野顯微鏡（五）暗視野顯微鏡（dark fieldmicroscopedark fieldmicroscope） 聚光鏡中央有擋光片，照明光線不直接聚光鏡中央有擋光片，照明光線不直接進(jìn)入物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的進(jìn)入物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡，因而視野背景是黑的，光線

14、進(jìn)入物鏡，因而視野背景是黑的，物體邊緣是亮的。可觀察物體邊緣是亮的?？捎^察4200nm4200nm的微粒的微粒子，分辨率比普通顯微鏡高子，分辨率比普通顯微鏡高5050倍。倍。（六）熒光漂白恢復(fù)技術(shù)（六）熒光漂白恢復(fù)技術(shù)（FRAP)起源于起源于2020世紀(jì)世紀(jì)7070年代，使用年代，使用與蛋白質(zhì)或脂質(zhì)耦聯(lián)的親脂與蛋白質(zhì)或脂質(zhì)耦聯(lián)的親脂性或親水性的熒光分子，如性或親水性的熒光分子，如熒光素、綠色熒光蛋白等，熒光素、綠色熒光蛋白等，檢測活體細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)檢測活體細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)部的分子運(yùn)動以及各種結(jié)構(gòu)部的分子運(yùn)動以及各種結(jié)構(gòu)上分子動態(tài)變化率的大小。上分子動態(tài)變化率的大小。二、電子顯微鏡二、電子顯微

15、鏡 19321932年年RuskaRuska發(fā)明了以電子束為光源的透射發(fā)明了以電子束為光源的透射電子顯微鏡（電子顯微鏡（transmission electron microscopetransmission electron microscope，TEMTEM），電子束的波長要比可見光和紫），電子束的波長要比可見光和紫外光短得多，利用樣品對電子的散射和外光短得多，利用樣品對電子的散射和透射形成明暗反差成像。透射形成明暗反差成像。（一）、激光掃描共聚焦顯微鏡一）、激光掃描共聚焦顯微鏡 激光掃描共聚焦顯微鏡是在傳統(tǒng)熒光顯激光掃描共聚焦顯微鏡是在傳統(tǒng)熒光顯微鏡成像的基礎(chǔ)上，采用激光作為光源，微鏡成

16、像的基礎(chǔ)上，采用激光作為光源，使用激光掃描裝置和共軛聚焦裝置，利使用激光掃描裝置和共軛聚焦裝置，利用微機(jī)控制的數(shù)字化圖像采集和處理的用微機(jī)控制的數(shù)字化圖像采集和處理的技術(shù)。技術(shù)。 用于熒光組織光學(xué)切片分析用于熒光組織光學(xué)切片分析,3維圖像重維圖像重建分析建分析,細(xì)胞物理和生物化學(xué)測定細(xì)胞物理和生物化學(xué)測定(如分如分子擴(kuò)散子擴(kuò)散,膜電位膜電位)研究研究,熒光定量和定位分熒光定量和定位分析析,細(xì)胞中離子的實(shí)時(shí)定量分析細(xì)胞中離子的實(shí)時(shí)定量分析, 熒光漂熒光漂白恢復(fù)研究（白恢復(fù)研究（FRAP）技術(shù)研究，胞間）技術(shù)研究，胞間通訊研究，細(xì)胞膜流動性測定。通訊研究，細(xì)胞膜流動性測定。 激光掃描共聚焦顯微鏡（

17、1 1）超薄切片）超薄切片 用于電鏡觀察的標(biāo)本須制成厚度僅用于電鏡觀察的標(biāo)本須制成厚度僅50nm50nm的的超薄切片，用超薄切片超薄切片，用超薄切片（ultramicrotomeultramicrotome）制作。制作。通常以鋨酸和戊二醛通常以鋨酸和戊二醛固定固定樣品，丙酮逐樣品，丙酮逐級級脫水脫水，環(huán)氧樹脂，環(huán)氧樹脂包埋包埋，以熱膨脹或螺，以熱膨脹或螺旋推進(jìn)的方式旋推進(jìn)的方式切片切片，重金屬（鈾、鉛），重金屬（鈾、鉛）鹽鹽染色染色。制制制樣樣樣技技技術(shù)術(shù)（二）主要電鏡制樣技術(shù)介紹（二）主要電鏡制樣技術(shù)介紹(2) (2) 負(fù)染技術(shù)（負(fù)染技術(shù)（Negative stainingNegative

18、staining）用重金屬鹽用重金屬鹽( (如磷鎢如磷鎢酸或醋酸雙氧鈾酸或醋酸雙氧鈾) ) 染染色；吸去染料干燥色；吸去染料干燥后，樣品凹陷處鋪后，樣品凹陷處鋪了一層重金屬鹽，了一層重金屬鹽，而凸出的地方?jīng)]有而凸出的地方?jīng)]有染料沉積，從而出染料沉積，從而出現(xiàn)負(fù)染效果，分辨現(xiàn)負(fù)染效果，分辨力可達(dá)力可達(dá)1.5nm1.5nm左右。左右。(3)冰凍蝕刻冰凍蝕刻 freeze-etching亦稱冰凍斷裂。標(biāo)本置于干冰或液氮中冰凍。亦稱冰凍斷裂。標(biāo)本置于干冰或液氮中冰凍。然后斷開，升溫后，冰升華，暴露出了斷面結(jié)然后斷開，升溫后，冰升華，暴露出了斷面結(jié)構(gòu)。向斷裂面上噴涂一層蒸汽碳和鉑。然后將構(gòu)。向斷裂面上噴

19、涂一層蒸汽碳和鉑。然后將組織溶掉，把碳和鉑的膜剝下來，此膜即為復(fù)組織溶掉，把碳和鉑的膜剝下來，此膜即為復(fù)膜（膜（replicareplica）。）。 是分離細(xì)胞器（如細(xì)胞核、線粒體、高爾基體）及各種大是分離細(xì)胞器（如細(xì)胞核、線粒體、高爾基體）及各種大分子基本手段。分子基本手段。 轉(zhuǎn)速小于轉(zhuǎn)速小于2500r/min2500r/min的離心機(jī)稱為的離心機(jī)稱為高速離心機(jī)高速離心機(jī)。 轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)速2500-50000r/min2500-50000r/min，稱為，稱為超速離心機(jī)超速離心機(jī)。轉(zhuǎn)速高于轉(zhuǎn)速高于50000r/min50000r/min，稱為，稱為超高速離心機(jī)超高速離心機(jī)。 目前超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)

20、速可達(dá)目前超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá)100000r/min100000r/min一、離心技術(shù)一、離心技術(shù)第二節(jié)第二節(jié) 細(xì)胞組分的分析方法細(xì)胞組分的分析方法1）差速離心差速離心（different centrifugationdifferent centrifugation）用途：分離大小相差懸殊的細(xì)胞和細(xì)胞器。用途：分離大小相差懸殊的細(xì)胞和細(xì)胞器。 沉降順序：核沉降順序：核線粒體線粒體溶酶體溶酶體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體體核蛋白體。核蛋白體。Low speedHigh speed2）密度梯度離心密度梯度離心 用途：分離密度不等的顆粒。（速度沉降和等密度沉降）用途：分離密度不等的顆粒。（速度

21、沉降和等密度沉降）常用介質(zhì)：氯化銫、蔗糖、多聚蔗糖。常用介質(zhì)：氯化銫、蔗糖、多聚蔗糖。 原理：原理：樣品各成分在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)過一定時(shí)間的離心樣品各成分在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)過一定時(shí)間的離心則沉降到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達(dá)到平衡，則沉降到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達(dá)到平衡，從而將不同密度的成分分離。從而將不同密度的成分分離。速度沉降速度沉降(velocity sedimentation )用途：分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器。用途：分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器。特點(diǎn)：介質(zhì)密度較低，介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于被特點(diǎn)：介質(zhì)密度較低，介質(zhì)的最大密度應(yīng)小于被分離生物顆

22、粒的最小密度。分離生物顆粒的最小密度。原理：介質(zhì)密度梯度平緩，分離物按各自的沉降原理：介質(zhì)密度梯度平緩，分離物按各自的沉降系數(shù)以不同的速度沉降而達(dá)到分離系數(shù)以不同的速度沉降而達(dá)到分離等密度沉降等密度沉降 isopycnic sedimentation用途：分離密度不等的顆粒。用途：分離密度不等的顆粒。特點(diǎn)：特點(diǎn)：n介質(zhì)密度較高，陡度大，介質(zhì)的最高密度應(yīng)大于被分離組分的最大介質(zhì)密度較高，陡度大，介質(zhì)的最高密度應(yīng)大于被分離組分的最大密度。密度。n所需的力場通常比速率沉降法大所需的力場通常比速率沉降法大1010010100倍，往往需要高速或超速離心。倍，往往需要高速或超速離心。原理：樣品各成分在連續(xù)

23、梯度的介質(zhì)中經(jīng)過一定時(shí)間的離心則沉原理：樣品各成分在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)過一定時(shí)間的離心則沉降到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達(dá)到平衡，從而將降到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達(dá)到平衡，從而將不同密度的成分分離。不同密度的成分分離。二二、細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、酶、糖與脂類等的顯示方法細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、酶、糖與脂類等的顯示方法原理：原理：利用一些利用一些顯色劑顯色劑與所檢測物質(zhì)的與所檢測物質(zhì)的特殊集團(tuán)特殊集團(tuán)特異性結(jié)合，特異性結(jié)合，通過顯色劑在細(xì)胞中的定位及顏色的深淺來判斷檢測物質(zhì)的分通過顯色劑在細(xì)胞中的定位及顏色的深淺來判斷檢測物質(zhì)的分布和含量。布和含量。福爾根（福爾根（Feulge

24、n）反應(yīng)）反應(yīng)DNA的分布的分布PAS反應(yīng)反應(yīng)多糖的存在多糖的存在細(xì)胞中的醛細(xì)胞中的醛基可使希夫基可使希夫試劑中的無試劑中的無色品紅變成色品紅變成紅色紅色酶的顯示酶的顯示酸性磷酸酶的顯示酸性磷酸酶的顯示 免疫細(xì)胞化學(xué)（免疫細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistryimmunocytochemistry）是根據(jù)免疫學(xué)原理，）是根據(jù)免疫學(xué)原理，利用抗體同特定抗原專一結(jié)合，對抗原進(jìn)行定位測定的技術(shù)。利用抗體同特定抗原專一結(jié)合，對抗原進(jìn)行定位測定的技術(shù)?？乖饕獮榇蠓肿踊蚺c大分子相結(jié)合的小分子；抗體則是由抗原主要為大分子或與大分子相結(jié)合的小分子；抗體則是由漿細(xì)胞針對特定的抗原分泌的蛋白。如果將抗

25、體結(jié)合上標(biāo)記漿細(xì)胞針對特定的抗原分泌的蛋白。如果將抗體結(jié)合上標(biāo)記物，再與組織中的抗原發(fā)生反應(yīng)，即可在光鏡或電鏡下顯示物，再與組織中的抗原發(fā)生反應(yīng)，即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織中的部位出該抗原存在于組織中的部位。 三、特異蛋白抗原的定位與定性三、特異蛋白抗原的定位與定性一般步驟：一般步驟：1 1、抗原的選擇、抗原的選擇2 2、抗體的分離與提純、抗體的分離與提純3 3、抗體的標(biāo)記、抗體的標(biāo)記4 4 、標(biāo)記抗體引入組織細(xì)胞、標(biāo)記抗體引入組織細(xì)胞5 5 、光鏡或電鏡樣品制備、光鏡或電鏡樣品制備6 6、染色觀察、結(jié)果分析、染色觀察、結(jié)果分析用途：用途：1 1）對細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)部的抗原進(jìn)行定

26、位；）對細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)部的抗原進(jìn)行定位；2 2）了解抗體合成過程中的動態(tài)變化；）了解抗體合成過程中的動態(tài)變化；3 3）抗原）抗原抗體復(fù)合物結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)；抗體復(fù)合物結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)；4 4）鑒定免疫損傷引起的細(xì)胞病理變化等。）鑒定免疫損傷引起的細(xì)胞病理變化等。 常用的標(biāo)記物有熒光素和酶：常用的標(biāo)記物有熒光素和酶：熒光素標(biāo)記的稱為免疫熒光法（熒光素標(biāo)記的稱為免疫熒光法（immunofluorescentimmunofluorescent techniquetechnique）常用的）常用的熒光素有熒光素有異硫氰酸熒光素異硫氰酸熒光素（fluoresceinfluorescein isothiocyanate

27、isothiocyanate）、）、羅丹明羅丹明（rhodaminerhodamine）等。）等。酶標(biāo)記的稱為酶標(biāo)免疫法酶標(biāo)記的稱為酶標(biāo)免疫法(enzyme-labeled(enzyme-labeled antibodyantibody method)method)，常用的酶，常用的酶有有辣根過氧化物酶辣根過氧化物酶（horseradishhorseradish peroxidaseperoxidase），酶與底物發(fā)生反應(yīng)），酶與底物發(fā)生反應(yīng)后形成不透明的沉積物，從而顯示出抗原存在的部位。后形成不透明的沉積物，從而顯示出抗原存在的部位。 （一）免疫熒光技術(shù)（一）免疫熒光技術(shù)免疫熒光法特點(diǎn)：快速

28、、靈敏、有特異性，但其分辨率有限。免疫熒光法特點(diǎn)：快速、靈敏、有特異性，但其分辨率有限。（二）（二）免疫電鏡技術(shù)：免疫電鏡技術(shù)： 免疫鐵蛋白技術(shù)：鐵蛋白提取繁瑣，分子量大，不易進(jìn)入免疫鐵蛋白技術(shù)：鐵蛋白提取繁瑣，分子量大，不易進(jìn)入細(xì)胞。細(xì)胞。 免疫酶標(biāo)技術(shù)：反應(yīng)沒有特異性，不能進(jìn)行感受部位的點(diǎn)免疫酶標(biāo)技術(shù)：反應(yīng)沒有特異性，不能進(jìn)行感受部位的點(diǎn)對點(diǎn)對應(yīng)。對點(diǎn)對應(yīng)。 免疫膠體金技術(shù)：是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原免疫膠體金技術(shù)：是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)?？贵w的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金是直徑膠體金是直徑1-100nm1-100nm的金的金顆粒分散在水中

29、形成的金溶膠。特異性強(qiáng)，容易識別。分辨顆粒分散在水中形成的金溶膠。特異性強(qiáng)，容易識別。分辨率高。率高。應(yīng)用：應(yīng)用：通過對分泌蛋白的定位，可以確定某種蛋白的分泌動通過對分泌蛋白的定位，可以確定某種蛋白的分泌動態(tài)；胞內(nèi)酶的研究；膜蛋白的定位與骨架蛋白的定位等。態(tài)；胞內(nèi)酶的研究；膜蛋白的定位與骨架蛋白的定位等。免疫膠體金技術(shù)免疫膠體金技術(shù)具有互補(bǔ)核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸分子片段，在適當(dāng)具有互補(bǔ)核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸分子片段，在適當(dāng)條件下，通過氫鍵結(jié)合，形成條件下，通過氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNADNA-DNA，DNA-RNADNA-RNA或或RNA-RNARNA-RNA雜交的雙鏈分子。這種技術(shù)

30、可用來測定單鏈分子雜交的雙鏈分子。這種技術(shù)可用來測定單鏈分子核苷酸序列間是否具有互補(bǔ)關(guān)系。核苷酸序列間是否具有互補(bǔ)關(guān)系。Southern blot檢測基因的拷貝數(shù)檢測基因的拷貝數(shù)Northern blot檢測某種基因時(shí)空表達(dá)檢測某種基因時(shí)空表達(dá) 原位雜交原位雜交基因在細(xì)胞內(nèi)或染色體上基因在細(xì)胞內(nèi)或染色體上的定位及其表達(dá)的定位及其表達(dá)四、細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性四、細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性原位雜交技術(shù)：原位雜交技術(shù)：用標(biāo)記的核酸探針通過分子雜交用標(biāo)記的核酸探針通過分子雜交, ,經(jīng)放射自經(jīng)放射自顯影或非放射檢測體系，確定特殊核苷酸序列在染色體或顯影或非放射檢測體系，確定特殊核苷酸序列在染色體或

31、細(xì)胞中位置的方法。細(xì)胞中位置的方法。分分RNARNA原位雜交和染色體原位雜交兩大類。最初是使用放原位雜交和染色體原位雜交兩大類。最初是使用放射性射性DNADNA探針，后來又發(fā)明了免疫探針法。探針，后來又發(fā)明了免疫探針法。 光鏡水平的原位雜交技術(shù)：光鏡水平的原位雜交技術(shù)：用同位素標(biāo)記或熒光素標(biāo)用同位素標(biāo)記或熒光素標(biāo)記探針。記探針。 電鏡水平的原位雜交技術(shù)電鏡水平的原位雜交技術(shù) ：生物素標(biāo)記的探針與抗生生物素標(biāo)記的探針與抗生物素抗體相連的膠體金標(biāo)記結(jié)合。物素抗體相連的膠體金標(biāo)記結(jié)合。（一）原位雜交（一）原位雜交（in situ hybridization）1、RNA原位雜交原位雜交標(biāo)記特異性探針標(biāo)

32、記特異性探針RNA被固定的組織切片被固定的組織切片若細(xì)胞中存在與探針互補(bǔ)的若細(xì)胞中存在與探針互補(bǔ)的mRNA分子分子放射自顯影或酶促免疫顯色放射自顯影或酶促免疫顯色放射性物質(zhì)或非放射性（如地高辛、生物素）放射性物質(zhì)或非放射性（如地高辛、生物素）對該基因的表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞對該基因的表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞水平上做出定位定量的分析水平上做出定位定量的分析反應(yīng)反應(yīng) 熒光原位雜交顯示的端粒熒光原位雜交顯示的端粒 2、熒光原位雜交技術(shù)、熒光原位雜交技術(shù)FISH（fluorescence in situ hybridization）熒光原位雜交顯示的人體著絲粒衛(wèi)星熒光原位雜交顯示的人體著絲粒衛(wèi)星DNA 檢測熒光素來確定

33、與探針檢測熒光素來確定與探針DNA序列雜交的序列雜交的互補(bǔ)序列在染色體或互補(bǔ)序列在染色體或DNA 上的位置上的位置熒光素標(biāo)記探針熒光素標(biāo)記探針DNA染色體染色體DNA（二）分子雜交技術(shù)（二）分子雜交技術(shù)SouthernSouthern雜交雜交：是體外分析特異：是體外分析特異DNADNA序列的方法，序列的方法，操作時(shí)先用限制性內(nèi)切酶將核操作時(shí)先用限制性內(nèi)切酶將核DNADNA或線粒體或線粒體DNADNA切成切成DNADNA片段，經(jīng)凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)移到醋酸片段，經(jīng)凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)移到醋酸纖維薄膜上，再用纖維薄膜上，再用DNADNA探針雜交，通過放射自顯探針雜交，通過放射自顯影，即可辨認(rèn)出與探針互

34、補(bǔ)的特殊核苷序列。影，即可辨認(rèn)出與探針互補(bǔ)的特殊核苷序列。將將RNARNA轉(zhuǎn)移到薄膜上，用轉(zhuǎn)移到薄膜上，用DNADNA探針雜交，則稱為探針雜交，則稱為NorthernNorthern雜交。雜交。分子雜交實(shí)驗(yàn)分子雜交實(shí)驗(yàn)?zāi)康模耗康模河糜谘芯繕?biāo)記化合物在機(jī)體、組織和細(xì)胞中的分布、用于研究標(biāo)記化合物在機(jī)體、組織和細(xì)胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用機(jī)理、作用部位等等。定位、排出以及合成、更新、作用機(jī)理、作用部位等等。原理：原理：將放射性同位素標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物體內(nèi)，經(jīng)過一將放射性同位素標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物體內(nèi)，經(jīng)過一段時(shí)間后，制取切片，涂上鹵化銀乳膠，經(jīng)放射性曝光，使段時(shí)間后，制取切片，涂

35、上鹵化銀乳膠，經(jīng)放射性曝光，使乳膠感光。乳膠感光。實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行動態(tài)和追蹤研究。實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)行動態(tài)和追蹤研究。五、放射自顯影技術(shù)五、放射自顯影技術(shù)一般用一般用1414C C和和3 3H H標(biāo)記。常用標(biāo)記。常用3 3H-TDRH-TDR來顯示來顯示DNADNA，用，用3 3H-UDRH-UDR顯示顯示RNARNA；用；用3 3H H氨基酸研究蛋白質(zhì)，用氨基酸研究蛋白質(zhì)，用3 3H H甘露糖、甘露糖、3 3H H巖藻巖藻糖研究多糖。糖研究多糖。六、定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)六、定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)細(xì)胞顯微分光光度術(shù)（細(xì)胞顯微分光光度術(shù)（Microspectrophotometry

36、Microspectrophotometry） 利用細(xì)胞內(nèi)某些物質(zhì)對特異光譜的吸收，測定這些物質(zhì)利用細(xì)胞內(nèi)某些物質(zhì)對特異光譜的吸收，測定這些物質(zhì)( (如核酸與蛋白質(zhì)等如核酸與蛋白質(zhì)等) )在細(xì)胞內(nèi)的含量。在細(xì)胞內(nèi)的含量。 包括：包括： 紫外光顯微分光光度測定法紫外光顯微分光光度測定法 可見光顯微分光光度測定法可見光顯微分光光度測定法l 流式細(xì)胞儀（流式細(xì)胞儀（Flow CytometryFlow Cytometry） 主要應(yīng)用：可定量測定細(xì)胞中的主要應(yīng)用：可定量測定細(xì)胞中的DNADNA、RNARNA或某一特異蛋或某一特異蛋白的含量；測定細(xì)胞群體中不同時(shí)相細(xì)胞的數(shù)量；從細(xì)胞群白的含量；測定細(xì)胞群

37、體中不同時(shí)相細(xì)胞的數(shù)量；從細(xì)胞群體中分離某些特異染色的細(xì)胞；分離體中分離某些特異染色的細(xì)胞；分離DNADNA含量不同的中期染含量不同的中期染色體。色體。第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)一、細(xì)胞培養(yǎng)一、細(xì)胞培養(yǎng) 1. 動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng) （原代細(xì)胞培養(yǎng)，永生細(xì)胞系）（原代細(xì)胞培養(yǎng)，永生細(xì)胞系） 2. 植物細(xì)胞培養(yǎng)植物細(xì)胞培養(yǎng) （單倍體細(xì)胞培養(yǎng)，原生質(zhì)體培養(yǎng)，體細(xì)胞培養(yǎng)）（單倍體細(xì)胞培養(yǎng)，原生質(zhì)體培養(yǎng)，體細(xì)胞培養(yǎng)） 3. 非細(xì)胞體系非細(xì)胞體系 （DNA復(fù)制、復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)合成、高爾基體的膜轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)合成、高爾基體的膜泡泡 運(yùn)輸，細(xì)胞核

38、裝配等）運(yùn)輸，細(xì)胞核裝配等） 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)。指在細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)。指在無菌條件下，模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，培無菌條件下，模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，培養(yǎng)從有機(jī)體中取出的細(xì)胞，使之生存和養(yǎng)從有機(jī)體中取出的細(xì)胞，使之生存和生長的技術(shù)。生長的技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)條件容易控制實(shí)驗(yàn)條件容易控制重復(fù)性好重復(fù)性好方法簡便方法簡便經(jīng)濟(jì)迅速經(jīng)濟(jì)迅速結(jié)果易分析結(jié)果易分析動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞（原代細(xì)胞（primary culture cell）繼代細(xì)胞（繼代細(xì)胞（subculture cell）指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的指從機(jī)體取出后立

39、即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第第2代細(xì)胞與傳代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞指適應(yīng)在體外培養(yǎng)條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞指適應(yīng)在體外培養(yǎng)條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞細(xì)胞系（細(xì)胞系（cell linecell line）永生細(xì)胞系永生細(xì)胞系指從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志指從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群。特點(diǎn)：的細(xì)胞群。特點(diǎn)：保持原來的二倍體數(shù)量和接觸抑制保持原來的二倍體數(shù)量和接觸抑制的行為的行為。指從腫瘤組織培養(yǎng)建立的細(xì)胞群或培養(yǎng)過程中發(fā)生突指從腫瘤組織培養(yǎng)建立的細(xì)胞群或培養(yǎng)過程中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，可無限繁殖。變或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，可無

40、限繁殖。特點(diǎn)：特點(diǎn)：呈亞二倍體或非整倍體；失去接觸抑制的行為呈亞二倍體或非整倍體；失去接觸抑制的行為。細(xì)胞在生長過程中，如果細(xì)胞細(xì)胞在生長過程中，如果細(xì)胞相互接觸，則生長和增值受到相互接觸，則生長和增值受到抑制，這種現(xiàn)象稱為接觸抑制抑制，這種現(xiàn)象稱為接觸抑制動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)接觸抑制接觸抑制 細(xì)胞克?。河脝渭?xì)胞克隆培養(yǎng)或通過藥物細(xì)胞克隆：用單細(xì)胞克隆培養(yǎng)或通過藥物篩選的方法從某一細(xì)胞系中分離出單個(gè)篩選的方法從某一細(xì)胞系中分離出單個(gè)細(xì)胞，并由此增值形成的，具有基本相細(xì)胞，并由此增值形成的，具有基本相同的遺傳性狀的細(xì)胞群體。同的遺傳性狀的細(xì)胞群體。細(xì)胞株細(xì)胞株(cell strain)(ce

41、ll strain)：經(jīng)過生物學(xué)鑒定，如具：經(jīng)過生物學(xué)鑒定，如具有特殊的遺傳標(biāo)記或性質(zhì)，由單細(xì)胞增有特殊的遺傳標(biāo)記或性質(zhì)，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群體。殖形成的細(xì)胞群體。人的細(xì)胞培養(yǎng)人的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中常見的幾種細(xì)胞系Hela 細(xì)胞細(xì)胞(a) 和和 CHO (b) 細(xì)胞的培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株1. 外植體培養(yǎng)：外植體培養(yǎng)：誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織。用于研究植物的生長發(fā)誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織。用于研究植物的生長發(fā)育、分化和變異；進(jìn)行無性繁殖；制取代謝產(chǎn)物。育、分化和變異；進(jìn)行無性繁殖；制取代謝產(chǎn)物。2. 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)：懸浮細(xì)胞培養(yǎng)：適合于進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，制取適合于進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，制取植物

42、代謝產(chǎn)物。植物代謝產(chǎn)物。3. 原生質(zhì)體培養(yǎng)：原生質(zhì)體培養(yǎng)：培養(yǎng)脫壁后的細(xì)胞，特點(diǎn)：培養(yǎng)脫壁后的細(xì)胞，特點(diǎn)：n比較容易攝取外來的遺傳物質(zhì)，如比較容易攝取外來的遺傳物質(zhì)，如DNA；n便于進(jìn)行細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞；便于進(jìn)行細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞；n適宜條件下可產(chǎn)生細(xì)胞壁，經(jīng)誘導(dǎo)分化成完整植株。適宜條件下可產(chǎn)生細(xì)胞壁，經(jīng)誘導(dǎo)分化成完整植株。4. 單倍體培養(yǎng)：單倍體培養(yǎng)：通過花藥或花粉培養(yǎng)可獲得單倍體植株。通過花藥或花粉培養(yǎng)可獲得單倍體植株。植物細(xì)胞培養(yǎng)植物細(xì)胞培養(yǎng)Plant Cell Culture植物組織培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)是進(jìn)行植物轉(zhuǎn)基因的重要步驟植物組織培養(yǎng)是進(jìn)行植物轉(zhuǎn)基因

43、的重要步驟（一）細(xì)胞融合（一）細(xì)胞融合(cell fusion)(cell fusion)與細(xì)胞雜交技術(shù)與細(xì)胞雜交技術(shù)通過培養(yǎng)和介導(dǎo)，兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞合并成一個(gè)雙核或多核通過培養(yǎng)和介導(dǎo)，兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞合并成一個(gè)雙核或多核細(xì)胞的過程稱為細(xì)胞的過程稱為細(xì)胞融合或細(xì)胞雜交細(xì)胞融合或細(xì)胞雜交。同核融合細(xì)胞：同核融合細(xì)胞：相同基因型的細(xì)胞融合而成。相同基因型的細(xì)胞融合而成。異核融合細(xì)胞：異核融合細(xì)胞：不同基因型的細(xì)胞融合而成。不同基因型的細(xì)胞融合而成。自發(fā)融合：自發(fā)融合：同種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中自發(fā)合并的現(xiàn)象。同種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中自發(fā)合并的現(xiàn)象。誘發(fā)融合：誘發(fā)融合：異種間的細(xì)胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合。異種間

44、的細(xì)胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合。誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法：誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法：生物方法（仙臺病毒、副流感病毒生物方法（仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒和新城雞瘟病毒 ）、化學(xué)方法（聚乙二醇）、化學(xué)方法（聚乙二醇PEGPEG）、物理方）、物理方法（電擊和激光）。法（電擊和激光）。 二、細(xì)胞工程二、細(xì)胞工程 （二）單克隆抗體技術(shù)（二）單克隆抗體技術(shù) 細(xì)胞拆合：把核與質(zhì)分離開來，然后把不同來源的細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞拆合：把核與質(zhì)分離開來，然后把不同來源的細(xì)胞質(zhì) 和細(xì)胞核相互配合，形成核質(zhì)雜交細(xì)胞。和細(xì)胞核相互配合，形成核質(zhì)雜交細(xì)胞。 物理法結(jié)合顯微操作技術(shù)：用機(jī)械方法或激光把細(xì)胞核去物理法結(jié)合顯微操作技術(shù)：用機(jī)械

45、方法或激光把細(xì)胞核去 掉或使之失活，然后用微吸管吸取其它細(xì)胞核，注入去核掉或使之失活，然后用微吸管吸取其它細(xì)胞核，注入去核 的細(xì)胞質(zhì)中，組成新的雜交細(xì)胞。的細(xì)胞質(zhì)中，組成新的雜交細(xì)胞。 化學(xué)法結(jié)合離心技術(shù)：用松馳素化學(xué)法結(jié)合離心技術(shù)：用松馳素B B處理細(xì)胞，離心，將細(xì)胞處理細(xì)胞，離心，將細(xì)胞 拆分為核體（拆分為核體（karyoplastkaryoplast）和胞質(zhì)體）和胞質(zhì)體cytoplastcytoplast）。在）。在PEGPEG 或仙臺病毒介導(dǎo)下，核體與另一胞質(zhì)體融合，形成重組細(xì)胞?；蛳膳_病毒介導(dǎo)下，核體與另一胞質(zhì)體融合，形成重組細(xì)胞。 體細(xì)胞體細(xì)胞-綠色熒光蛋白水母基因綠色熒光蛋白水母基因-取核取核-未受精卵未受精卵圖為：美國密蘇